柱色谱分离实验报告

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实验 10 柱色谱分离实验报告

--亚甲基蓝与荧光黄的分离

一实验目的

? 学习并掌握色谱法的原理及其应用。

? 学习并掌握柱色谱的实验操作技能。

二实验原理

色谱法亦称色层法，层析法等，是分离，纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一。

色谱法的基本原理是利用混合物各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不同，或其它亲和作用性能的差异，混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分开。

色谱分离法的分类

（按操作条件的不同）

色谱分离法的分类

（按组分在固定相中的作用原理不同）

色谱法的应用

色谱法在有机化学中的应用主要包括以下几个方面：

（1）分离混合物

（2）精致提纯化合物

（3）利用比移值（Rf）鉴定化合物

(4)跟踪反应进程

柱色谱常用的有吸附色谱和分配色谱两类。前者常用氧化铝或硅胶为吸附剂。后者以硅胶，硅藻土和纤维素为支持剂，以吸收大量的液体为固定相。

                  

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柱色谱分离实验报告

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柱色谱分离实验报告

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色 谱 实 验 报 告

项目一：气相色谱流出曲线的研究 一：实验目的

1、

2、

3、 掌握气相色谱仪的基本结构及工作原理 理解色谱流出曲线中各参数的表示方法 掌握气相色谱中定性、定量分析方法

二、实验原理

气相色谱的固定相是涂布在载体表面的固定液，试样气体由载气携带进入色谱柱，与固定液接触时，气相中各组分便溶解在固定液中。随着载气的不断通入，被溶解的组分又从固定液中挥发出来，挥发出的组分随载气向前移动时又再次被固定液溶解。由于各组分在固定液中的溶解能力不同，随着载气的流动，各组分在两相间经过反复的溶解-挥发过程，经过一段时间，最终实现彼此分离。

色谱图是指被测组分从进样开始，经色谱柱分离到组分全部流过检测器后，所产生的响应信号随时间分布的图像。色谱图上有一组色谱峰，每每个峰代表试样中的一个组分。色谱流出曲线是以组分流出色谱柱的时间或载气流出的体积为横坐标，以检测器对各组分的电信号响应值为纵坐标的一条曲线。

三、仪器与试剂

1、仪器

气相色谱仪

2、试剂

乙醇、正丁醇

2

四、实验步骤

1、调试气相色谱仪

2、分别进行进样

3、进乙醇和正丁醇的混合物样品，分别记录保留时间

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实验一 柱色谱、薄色谱

一、实验目的

1、了解色谱法分离提纯有机化合物的基本原理和应用。

2、掌握柱层析、薄层层析的操作技术。

二、实验原理

色谱法（Chromatography）亦称色层法、层析法等。

色谱法是分离、纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一。色谱法的基本原理是利用混合物各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（分配）的不同，或其亲和性的差异，使混合物的溶液流经该种物质进行反复的吸附或分配作用，从而使各组分分离。

     色谱法在有机化学中的应用主要包括以下几方面:

1、分离混合物  一些结构类似、理化性质也相似的化合物组成的混合物，一般应用化学方法分离很困难，但应用色谱法分离，有时可得到满意的结果。

2、精制提纯化合物  有机化合物中含有少量结构类似的杂质，不易除去，可利用色谱法分离以除去杂质，得到纯品。

3、鉴定化合物  在条件完全一致的情况，纯碎的化合物在薄层色谱或纸色谱中都呈现一定的移   动距离，称比移值（Rf值），所以利用色谱法可以鉴定化合物的纯度或确定两种性质相似的化合物是否为同一物质。但影响比移值的因素很多，如薄层的厚度，吸附剂颗粒的大小，酸碱性，活性等级，外界温度和展开剂纯度、组成、挥发性等。所以，要获得重现的比移值就比较困难。为此，在测定某一试样时，最好用已知样品进行对照。

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实验五 硅胶柱色谱分离丁香油中

丁香酚及高效液相色谱

实验五 硅胶柱色谱分离丁香油中丁香酚及高效液相色谱测定

一、实验目的

1、学习硅胶柱色谱纯化丁香酚的方法

2、了解液相色谱的仪器组成、工作原理以及数据采集、数据分析的基本操作。

3、外标法测定丁香酚的含量。

二、实验原理

1、丁香酚简介

丁香中主要成分为挥发油，丁香酚占总挥发油的78-98%，其他还有丁香酚乙酸酯，石竹烯，甲基戊基甲酮等，丁香中另几类化学成分为色原酮、黄酮和三萜。

丁香酚异名丁香油酚。分子式C10H12O2，分子量164.20.无色或苍黄色液体，沸点225，熔点-9.2.几乎不溶于水，与乙醇、氯仿、乙醚及油可混溶。1mL溶于 2mL70%乙醇，溶于冰醋酸。 OH

3

丁香酚

H2CH=CH2

四、实验仪器

50mL容量瓶2个，1000mL容量瓶1个、10mL刻度试管2个，80目硅胶，丁香油，50μg·mL-1标准品丁香酚甲醇溶液，色谱纯甲醇，KOH，2%乙醇，乙醚，正己烷和乙酸乙酯，硫酸钠，移液枪，250mL，100mL烧杯5个，250mL分液漏斗，1 mol·L-1 HCl，柱层析仪(紫外检测，转盘，横流泵)，玻璃柱(1.5-30cm)，记号笔，试管架，移液管。

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实验五   柱色谱

计划学时：3学时

一、实验目的：学习柱色谱的操作方法。

二、实验原理：

柱色谱（柱上层析）常用的有吸附色谱和分配色谱两类。吸附色谱常用氧化铝和硅胶作固定相；而分配色谱中以硅胶、硅藻土和纤维素作为支持剂，以吸收较大量的液体作固定相，而支持剂本身不起分离作用。

吸附柱色谱通常在玻璃管中填入表面积很大经过活化的多孔性或粉状固体吸附剂。当待分离的混合物溶液流过吸附柱时，各种成分同时被吸附在柱的上端。当洗脱剂流下时，由于不同化合物吸附能力不同，往下洗脱的速度也不同，于是形成了不同层次，即溶质在柱中自上而下按对吸附剂的亲和力大小分别形成若干色带，再用溶剂洗脱时，已经分开的溶质可以从柱上分别洗出收集；或将柱吸干，挤出后按色带分割开，再用溶剂将各色带中的溶质萃取出来。

 1、吸附剂

常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙和活性炭等。吸附剂一般要经过纯化和活性处理，颗粒大小应当均匀。对于吸附剂而言，粒度愈小表面积愈大，吸附能力就愈高，但颗粒愈小时，溶剂的流速就太慢，因此应根据实际分离需要而定。供柱色谱使用的氧化铝有酸性、中性、碱性三种，本实验选择中性氧化铝。

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