药敏试验与报告解读

一、药敏试验

1、概念: 测定抗感染药物在体外对病原微生物有无抑菌或杀菌作用的方法称为药物敏感性试验，简称药敏试验。

2、目的：检测可能引起感染的细菌对一种或多种抗菌药的敏感性。

3、结果判断标准: 目前我国药敏试验判断标准参照CLSI标准文件，CLSI文件是我国的卫生部部颁文件。

二、MIC(minimal inhibitory concentration ，最小抑菌浓度）

1、概念：是指在体外试验中，抗菌药物能抑制培养基中细菌生长的最低药物浓度。是抗菌药抗菌活性指标，显示出药物抑制病原微生物的能力。

2、CLSI文件中关于敏感、中介、耐药的定义

???????敏感：最高血药浓度＞4倍MIC，使用常规剂量有效；

???????中介：最高血药浓度≈MIC，加大剂量或药物浓缩部位有效； ???????耐药：最高血药浓度＜MIC，无效。

三、抗生素的等效性与抗菌谱

1、抗生素的等效性：是指用一种相关抗生素的试验结果预测同类抗生素体内抗菌活性。如头孢噻吩与其他一代头孢具有等效性，可用头孢噻吩结果预测其他一代头孢。此特性允许检测少数几种抗生素而不影响临床对其他抗生素广泛选择。

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药敏实验流程

（一）普通肉汤培养基的制作：

1. NaCL5g, 牛肉膏3g，蛋白胨10g，蒸馏水1000ml，PH7.2~7.6, 2%琼脂粉20 g。

2. 先称取NaCL,牛肉膏，蛋白胨易于潮解最后称取，放于烧杯中溶解，玻璃棒搅拌。

3. 用PH试纸或PH校正仪调PH值，偏酸加1mol/L的NaOH,偏碱加1mol/L的HCL。

4. 用量筒再量一次加入2%的琼脂粉玻璃棒搅拌溶解。

5. 盖上硅胶塞，用8层纱布橡皮筋扎好，再用4层报纸包好，令用两层报纸包扎相应数量的平板，121°灭菌20分钟。

6. 把已灭菌了的平板放于烘箱内使其干燥或拆开报纸倒放于无菌工作台内使上面的水珠蒸发。

7. 做好无菌室的准备工作，待培养基的温度合适时开始倒平板，每个倒25~30ml，一般下午用时上午倒平板，第二天上午用时前一天下午倒平板，若用不完的培养基倒置于4°冰箱保存一周内用完。

（二）接种培养：

1. .用酒精棉球檫试要解剖的鱼的体表部位，解剖后用酒精棉球檫试要取的发病组织（肝脾肠）。

2. 点燃酒精灯，用灭菌了的镊子取发病组织剖面涂抹于培养基一角，用着烧过的接种环在培养基内做三四划线或“之”子划线，做上标记，倒置于37°恒温培养箱内培养18~24h。

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细菌药敏实验中需要关注的问题（1）

写在课前的话

长期以来，各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药物往往失去药效，以及不能很好的掌握药物对细菌的敏感度，所以一个正确的结果，可供临床医师选用抗菌药物的参考，并提高疗效。这就需要利用药敏试验进行药物敏感度的测定，以便准确有效的利用药物进行治疗。

一、摘要

随着抗菌药在临床的广泛使用，耐药细菌越来越多，临床医生也越来越关注细菌对不同种类抗菌药物的敏感性。实验室检测细菌药敏就成了我们工作当中的一个主要的内容，怎么样才能做好细菌药敏试验？下面我们就来讨论一下细菌药敏试验中需要特别关注的几个问题。这些问题包括：一、哪些细菌需要进行药敏试验？二、采取什么方法进行药敏试验？三、药敏试验应该检测哪些抗菌药物？四、药敏试验时我们应该注意哪些环节？五、如何正确报告药敏试验结果？六、怎样做好药敏试验的室内质控？

二、哪些细菌需要进行药敏试验

（一） 需要进行药敏试验

需要进行药敏试验的情况主要包括两种情况：一个是明确了这个细菌是引起感染的病源，注意这是引起感染的病源。第二种情况是这种引起感染的细菌在治疗过程当中可能发生了耐药。

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药敏实验

检验原理：含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断的向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈越大，MIC越小。

样本要求:鉴定后的致病微生物纯菌落

检验方法：

1、菌液制备：挑选鉴定后的致病微生物纯菌落3~4个菌落置于灭菌0.9%氯化钠液中，制成均匀悬液。

经与浊度管（0.5麦氏单位比浊管）比较，浊度一致。

2、接种平板：用灭菌的棉拭子蘸取制备好的接种菌液，在管壁上旋转挤压几次，去掉过多的菌液，再用试子涂布整个培养基表面，反复几次，每次将平板旋转60℃，最后沿平皿周边绕两圈，用镊子压平。？每张纸片间距不少于24mm，纸片中心距平皿边缘不少于15mm。

3、孵育：贴好纸片后在15min内放到35℃孵箱，将平板倒置培养。平板孵育16~18h后取出。

4、结果判定：培养后取出平板，测量抑菌环的直径，抑菌环的边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。 【检测结果的解释】

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脓汁和粪便标本中病原菌的检测

专业： 学号： 姓名：

一、实验目的

探究检测其病原菌的类型并通过一系列的观察与鉴定从而确定其病原菌的名称和性质。在实践中学习培养基的制备、消毒和灭菌，细菌的分离与培养，细菌群体和个体形态特征的观察，细菌生化反应鉴定等技巧。从而掌握微生物实验的各种操作方法，培养对微生物实验的兴趣。

二、实验材料

器材

打火机、油性笔、酒精灯、接种环、接种针、污物盘、普通冰柜、隔水式电热恒温培养箱、奥林巴斯CX21型生物显微镜、电炉、试管（带棉塞）、称量纸、药勺、牛皮纸、硫酸纸、橡皮筋、尺子、锥形瓶、高压蒸汽灭菌器、镊子、玻片、吸水纸、拭镜纸

试剂药品

普通营养琼脂培养基、蒸馏水、脓汁标本、粪便标本、石蜡油、生理盐水、结晶紫、卢戈碘液、95%乙醇、稀释复红、葡萄糖微量发酵管（2支）、乳糖微量发酵管（2支）、青霉素抗菌素纸片、链霉素抗菌素纸片、庆大霉素抗菌素纸片、血浆、福氏志贺菌诊断血清

三、方法与步骤

干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→ 用橡皮筋扎好 →放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌→

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动物微生物及免疫学实验报告

一、实验目的

（一）掌握一般培养基的制备原理及要求，掌握培养基酸碱度的测定，熟悉一

般培养基的制备过程和各种器皿灭菌方法。

（二）掌握细菌分离培养的基本要领和方法，掌握细菌抹片的制备方法和革兰

氏染色法及油镜的使用方法，并认识革兰氏染色的反应特性。

（三）掌握学习用微生物学原理诊断疾病的一般方法及步骤。

二、实验用品

（一）器材

量筒、烧杯、电子天平、漏斗、三角烧瓶、空试剂瓶、玻璃棒、玻璃平皿、刻度吸管、pH试纸、纱布、脱脂棉、天平、电炉、试剂瓶瓶塞、扎绳、放大镜、包装纸、洗耳球、酒精灯、载玻片、火柴、吸水纸、剪刀、记号笔、接种环、注射器、镊子、钳子、毫米尺、培养箱、水浴培养箱、高压蒸汽灭菌锅、油镜

（二）试剂及材料

肘胨、蛋白胨、猪胆盐、氯化钠、琼脂、乳糖、0.01%结晶紫水溶液、0.5%中性红水溶液、血清、胰化蛋白胨、酵母提取物、氢氧化钠、盐酸、牛血清、革兰氏染色液、蒸馏水、小白鼠、病猪内脏

三、实验步骤

（一）培养基的制备

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（所有用到的器皿都已121℃高压灭菌15~30min，倾注平板在无菌操作台内完成，并放在无菌操作台内）

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四川农业大学

动物微生物及免疫学（实践教学）

实验报告

组长：**********

组员：**********

二零一二年四月

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一、 实验目的

（一） 掌握一般培养基的制备原理及要求，掌握培养基酸碱度的测定，

熟悉一般培养基的制备过程和各种器皿灭菌方法。

（二） 掌握细菌分离培养的基本要领和方法，掌握细菌抹片的制备方法

和革兰氏染色法及油镜的使用方法，并认识革兰氏染色的反应特性。

（三） 掌握学习用微生物学原理诊断疾病的一般方法及步骤。

二、 实验用品

（一） 器材

量筒、烧杯、电子天平、漏斗、三角烧瓶、空试剂瓶、玻璃棒、玻璃平皿、刻度吸管、pH试纸、纱布、脱脂棉、天平、电炉、试剂瓶瓶塞、扎绳、放大镜、包装纸、洗耳球、酒精灯、载玻片、火柴、吸水纸、剪刀、记号笔、接种环、注射器、镊子、钳子、毫米尺、培养箱、水浴培养箱、高压蒸汽灭菌锅、油镜

（二） 试剂及材料

肘胨、蛋白胨、猪胆盐、氯化钠、琼脂、乳糖、0.01%结晶紫水溶液、0.5%中性红水溶液、血清、胰化蛋白胨、酵母提取物、氢氧化钠、盐酸、牛血清、革兰氏染色液、蒸馏水、小白鼠、病猪内脏

三、 实验步骤

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