实验六 纸层析法观察转氨基作用

【实验名称】：纸层析法观察转氨基作用

09救援一班 第三大组 

室温：28°

（一）实验目的：

1、学习氨基酸纸层析的基本原理。

2、掌握氨基酸纸层析的操作原理。

（二）实验原理：

转氨基作用是氨基酸代谢过程中的一个重要反应，在转氨酶的催化下，氨基酸的а-酮酸与α-酮基的互换反应称为转氨基作用。转氨基作用广泛地存在于机体各组织器官中，是体内氨基酸代谢的重要途径。氨基酸反应时均由专一的转氨酶催化，此酶催化氨基酸的α－氨基转移到另一α－酮基酸上。各种转氨酶的活性不同，其中肝脏的丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化如下反应：

α—酮戊二酸 + 丙氨酸  谷氨酸 + 丙酮酸

本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸为底物，加肝匀浆保温后，用纸层析法检查谷氨酸的出现，以证明转氨基作用。纸层析属于分配层析。以滤纸为支持物，滤纸纤维与水亲合力强，水被吸附在滤纸的纤维素的纤维之间形成固定相。有机溶剂与水不相溶，把预分离物质加到滤纸的一端，使流动溶剂经此向另一端移动，这样物质随着流动相的移动进行连续、动态的不断分配。由于物质分配系数的差异，而使移动速度就不一样，在固定相中，分配趋势较大的组分，随流动相移动的速度就慢，反之，在流动相分配趋势较大的成分，移动速度快，最终不同的组分彼此分离，物质在纸上移动的速率可以用比值Rf表示：

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实验四 转氨基作用（纸层析法）

原理

氨基酸分子上的氨基转移到α-酮酸分子上的反应过程称为转氨基作用（或称氨基移换作用）。转氨基作用是氨酸代谢的重要反应之一，由转氨酶催化。经转氨后，原来的α-—氨基酸变成了相应的α-—酮酸，原来的α-—酮酸则成为新的、相应的α-—氨基酸。

本实验观察谷氨酸与丙酮酸在肌匀浆中的谷氨酸—丙酮酸转氨酶（简称GPT）的催化进行转氨基的过程。然后用纸层析法检查反应体系中丙氨酸的生成。为便于观察转氨基作用，在反应中须加一碘醋酸（或—溴醋酸），以抑制谷氨酸和丙酮酸的其它代谢过程。

试剂

1．0.9% NaCl溶液。

2．PH7.4 0.01mol/L磷酸缓冲液：取0.2mol/LNa₂HPO₄溶液81ml与0.2mol/LNaH₂PO₄溶液19ml混匀，稀释至2000ml。

3．1%谷氨酸钾溶液：取谷氨酸1g ，加水20ml，用5%KOH调到中性，然后用pH7.4 0.01mol/L磷酸缓冲液稀释至100ml。

4．1%丙酮酸钠溶液：取丙酮酸1g加pH7.4 0.01mol/L磷酸缓冲溶液溶解成100ml。

5．0.25%一碘酸钠溶液：取一碘醋酸0.25g加水1ml，用5%KOH调到中性，然后加pH7.4，0.01mol/L磷酸缓冲液成100ml。（一碘醋酸可用一溴醋酸代替）。

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实验报告

课程名称：   生化实验甲   指导老师：         成绩：__________________

实验名称： 氨基移换反应及其产物的鉴定 实验类型：       同组学生姓名：            

一、实验目的和要求（必填）                         二、实验内容和原理（必填）

三、实验材料与试剂（必填）              四、实验器材与仪器（必填）                 

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纸层析法测定肝组织的转氨基作用

【目的】

1 ．掌握纸层析法的原理和方法。

2 ．熟悉相关转氨酶的临床意义。

【原理】

转氨基作用是氨基酸代谢的一个重要反应。在转氨酶作用下，将氨基酸的氨基转移到α - 酮酸上。每种转氨基反应均由专一的转氨酶催化。转氨酶广泛分布于机体各器官、组织，例如肝细胞中存在的丙氨酸氨基转移酶，能催化α - 酮戊二酸与丙氨酸之间的转氨基作用。反应式如下：

纸层析是以滤纸作为支持物，与滤纸纤维素结合的水（约占纸重 20 ～ 30 ％）称为层析中的“固定相”。另一种和固定相不能混合或部分混合的溶剂则为“流动相”。把欲分离的物质加在纸的一端，并使流动相借滤纸的毛细现象移动，此时，待分离溶质因分配系数不同而逐渐分布于滤纸的不同部位。层析过程中或层析结束时，用显色剂使被分离的物质显出颜色，成为一个个色斑。分配在固定相中趋势较大的成分在纸上随流动相移行的速度就小，色斑距原点的位置就较近。反之，分配在固定相内趋势较小的成分移行就远，色斑位置离原点也远。溶质在纸上的移动速率可用比移（ R f ）表示：

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化学综合实验

第十组

组长：环境工程1班     1203090121    祝钰

组员：环境工程1班     1209090120    朱丽华

      环境工程1班     1203090130    林斌

      环境工程1班     1203090131    刘刚

甲基橙的制备及性能测定

一、实验目的

1、掌握甲基橙的制备方法

2、掌握有机化合物的合成的基本方法

3、掌握红外光谱仪的使用及图谱解析

4、掌握酸碱滴定方法及重点判断

二、实验原理

    甲基橙是一种酸碱指示剂， pH值变色范围3.1之前为红色，3.1-4.4为橙色，4.4以后为黄色测定多数强酸、强碱和水的碱度，容量测定锡(热时Sn2+)使甲基橙褪色)。强还原剂(Ti3+、Cr2+)和强氧化剂(氯、溴)的消色指示剂。分光光度测定氯、溴和溴离子。可与靛蓝二磺酸钠或溴甲酚绿组成混合指示剂，以缩短变色域和提高变色的锐灵性。氧化还原指示剂，如用于溴酸钾滴定三价砷或锑。 贮存： 密封阴凉干燥保存。

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广州大学化学化工学院

 本科学生综合性实验报告

实验课程        基础合成实验A1                          

实验项目        磺胺药物的合成                         

专    业        化学教育         班 级   1班         

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                    DMEM细胞培养液的配制及贴壁细胞的传代

一．实验目的

1.熟练掌握DMEM细胞培养液的配制

2.熟练掌握贴壁细胞的传代过程以及倒置显微镜的使用

二．实验原理

     培养基既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质，也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。培养基的种类很多，按其物质状态分为半 固体培养基和液体培养基两类；按其来源分为合成培养基和天然培养基。

(1) 合成培养基：合成培养基是根据细胞所需物质的种类和数量严格配制而成的。内含碳水化合物、氨基酸、脂类、无机盐、维生素、微量无素和细胞生长因子等。单独使用细胞虽有生存但不能很好的生长增殖。

(2) 天然培养基：使用最普遍的天然培养基是血清，基本以小牛血清最普遍。血清由于含有多种细胞生长因子、促贴附因子及多种活性物质。与合成培养基合用，能使细胞顺利增殖生长。常见使用为5-20%。

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分子生物学实验报告

                       姓名：马发辉

                       学院：生命科学学院

                       班级：生工114班

                       学号：2011013843

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