篇一 :蛋白酶的盐析沉淀实验报告

蛋白酶的盐析沉淀实验报告

班级:生工1005    学号:0203100520  姓名:朱同辉 

实验目的:

1.掌握使蛋白质胶体溶液保持稳定的因素;

2.了解蛋白质沉淀的几种方法及其意义;

3.掌握测定蛋白酶活力的原理和方法;

4.学习酶活力的计算方法。

实验原理:

盐析法

在蛋白质溶液中加入少量中性盐,蛋白质溶解度增加,称为盐溶;而加入大量中性盐达一定浓度,蛋白质就会沉淀,称为盐析。

    原理 : ①大量盐加入后,能与蛋白质争夺水分子,去除水膜;

②大量盐能中和蛋白质分子表面电荷,使分子间静电斥力减弱,疏水作用增强,使蛋白质沉淀。

盐析效果: 二价离子 > 一价离子

                      离子半径小 > 离子半径大

   阳离子∶Mg2+>Ca2+>Ba2+>NH4+>Na+>K+>Pb+>Cs+

…… …… 余下全文

篇二 :《蛋白质盐析实验条件的探究》

蛋白质盐析实验条件的探究

黄秋静

广西师范大学化学与药学学院  桂林

摘要  对影响蛋白质盐析的实验条件进行了探究。认为其中三个主要影响因素为:鸡蛋清溶液的浓度、盐溶液种类、酸的加入顺序,最终总结得出蛋白质盐析实验的适宜条件。

关键字  蛋白质  盐析  实验条件

Inquiry experiment conditions of protein salting out

Huang-Qiujing

School of chemistry and pharmacy, Guangxi Normal University.Guilin,China

Abstract: The experimental conditions affecting protein salting out of the research. The three main factors: the egg white solution concentration, salt solution type, acid addition order, finally summarizes suitable conditions of protein salting out experiment.

…… …… 余下全文

篇三 :蛋白质生化技术实验报告

蛋白质生化实验报告

生殖免疫研究所

薛樱子

学号:1133111003

实验一   溶液中蛋白质浓度的测定

  光吸收法(测量范围:0.1—2mg)

1实验原理:由于蛋白质中存在着含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸,它们具有吸收紫外光的性质,其吸收高峰在280nm波长处,且在此波长内吸收峰的光密度值OD280nm与其浓度成正比关系,故可作为蛋白质定量测定的依据。
纯蛋白的A280/A260为1.8,纯核酸的A280/A260为

2步骤

2.1)打开仪器的电源开关(接220V交流电),打开比色槽暗箱盖,选择光源,选档,选波长,用调零旋钮调暗电流至0 。

2.2)将空白对照样品和待测溶液装入石英比色杯

2.3)将仪器的比色槽暗箱合上,比色槽处于蒸馏水(或校正缓冲液)校正位置,旋转光量调节器使电表指针正确处于0 。

 2.4)拉出比色槽手柄拉杆使比色槽处于样品位置读数。

 2. 5)在260nm和280nm分别读数(分别用缓冲液调0),根据上表查处相应蛋白浓度,根据喜事倍数计算原溶液蛋白浓度,根据体积计算总蛋白量。

3结果与分析

…… …… 余下全文

篇四 :实验四 蛋白质纯化 盐析沉淀法

实验四 蛋白质纯化 盐析沉淀法

【实验目的】

采用硫酸铵盐析法将日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶融合蛋白从大肠杆菌BL21(DE3)pGEX-NS53细胞裂解液中分离出来,使学生学习掌握制备细胞裂解液的技术和采用盐析法从中分离目的蛋白质的技术。

【实验原理】

用盐析法从成分复杂的蛋白质溶液(如细胞裂解液)中提取目的蛋白质是一种传统的目前仍被广泛使用的蛋白质分离纯化技术。此种技术的工作原理如下:蛋白质在稀盐溶液中,其溶解度会随盐浓度的升高而增加,此种现象被称作盐溶。但是当盐的浓度继续增高时,蛋白质的溶解度又以不同程度地下降并先后从溶液中析出,此种现象被称为盐析。上述现象 是由于蛋白质分子中极性基团之间存在静电力。在低盐浓度下,蛋白质分子中极性基团之间的静电力受盐离子的影响而被消除,蛋白质在水中的极性基团的电荷被中和,水化膜被破坏,于是蛋白质分子之间相互聚集并从溶液中析出。盐析法就是根据不同蛋白质在一定浓度的盐溶液中溶解度降低程度的不同而达到彼此分离的方法。

盐析的一般操作步骤是,选择一定浓度范围的盐溶液(如0-25%饱和度的硫酸铵)使部分杂质呈“盐析”状态从溶液中沉淀出来,经离心法去除。而目的蛋白质呈盐溶状态,存在于上清中。增加盐浓度(如25-60%饱和度的NH4SO4)使目的蛋白质呈盐析状态,而从溶液中分离出来。

…… …… 余下全文

篇五 :蛋白质功能性质的检测实验报告

华南农业大学实验报告

专业班次 组别

题目 蛋白质功能性质的检测 姓 名 黄俊怡 日期 2015.07.11

一、实验目的

通过本实验定性地了解蛋白质的主要功能性质。

二、实验原理

蛋白质的功能性质一般是指能使蛋白质成为人们所需要的食品特征而具有的物理化学性质,即对食品的加工、贮藏、销售过程中发生作用的那些性质,这些性质对食品的质量和风味起着重要的作用。蛋白质的功能性质与蛋白质在食品体系中的用途有着十分密切的关系,是开发和有效利用蛋白质资源的重要依据。 蛋白质的功能性质可分为水化性质、表面性质、蛋白质-蛋白质相互作用的有关性质三个主要类型,主要包括有吸水性、溶解性、保水性、分散性、粘度和粘着性、乳化性、起泡性、凝胶作用等。

三、实验材料、试剂和仪器

1. 实验材料

(1) 2%蛋清蛋白溶液:取2g蛋清加98ml蒸馏水稀释,过滤取清夜。

(2) 卵黄蛋白:鸡蛋除蛋清后剩下的蛋黄捣碎。

2. 试剂

(1) 硫酸铵、饱和硫酸铵溶液

(2) 氯化钠、饱和氯化钠溶液

(3) 花生油

(4) 酒石酸

3. 仪器

(1) 刻度试管

…… …… 余下全文

篇六 :SCAU实验报告蛋白质功能性质的检测

蛋白质功能性质的检测

一、    实验目的

通过本实验定性地了解蛋白质的主要功能性质。

二、    实验原理

蛋白质的功能性质一般是指能使蛋白质成为人们所需要的食品特征而具有的物理化学性质,即对食品的加工、贮藏、销售过程中发生作用的那些性质,这些性质对食品的质量和风味起着重要的作用。蛋白质的功能性质与蛋白质在食品体系中的用途有着十分密切的关系,是开发和有效利用蛋白质资源的重要依据。

蛋白质的功能性质可分为水化性质、表面性质、蛋白质-蛋白质相互作用的有关性质三个主要类型,主要包括有吸水性、溶解性、保水性、分散性、粘度和粘着性、乳化性、起泡性、凝胶作用等。蛋白质的功能性质受多种因素影响,变化规律十分复杂。

三、    实验材料、试剂和仪器

1. 实验材料

(1)  2%蛋清蛋白溶液:取2g蛋清加98ml蒸馏水稀释,过滤取清夜。

(2)  卵黄蛋白:鸡蛋除蛋清后剩下的蛋黄捣碎。

2. 试剂

(1)  硫酸铵、饱和硫酸铵溶液

(2)  氯化钠、饱和氯化钠溶液

…… …… 余下全文

篇七 :实验二 中性盐沉淀法分离蛋清中的蛋白质

实验二  中性盐沉淀法分离蛋清中蛋白质

一、实验目的

掌握盐析法从蛋清中分离目的蛋白质的技术。

二、实验原理

蛋白质在稀盐溶液中,其溶解度会随盐浓度的升高而增加,此种现象被称作盐溶。但是当盐的浓度继续增高时,蛋白质的溶解度又以不同程度地下降并先后从溶液中析出,此种现象被称为盐析。上述现象是由于蛋白质分子中极性基团之间存在静电力。在低盐浓度下,蛋白质分子中极性基团之间的静电力受盐离子的影响而被消除,蛋白质在水中的极性基团的电荷被中和,水化膜被破坏,于是蛋白质分子之间相互聚集并从溶液中析出。盐析法就是根据不同蛋白质在一定浓度的盐溶液中溶解度降低程度的不同而达到彼此分离的方法。

三、实验用品

1.仪器:100mL锥形瓶;50mL烧杯;50mL带盖离心管;离心机。

2.试剂:蛋白质溶液:5%卵清蛋白溶液或鸡蛋清水溶液(新鲜鸡蛋清:水=1:9);饱和硫酸铵溶液;固体硫酸铵

四、实验方法

1. 取锥形瓶一个,加入蛋白质溶液5.0ml,再加等量的饱和硫酸铵(半饱和硫酸铵)溶液,混匀后静置数分钟,则析出球蛋白。将混合液转移至两离心管(等量)中,2000rpm离心5min,小心将上清夜转移至小烧杯;向沉淀中加少蒸馏水,观察是否溶解,为什么?

…… …… 余下全文

篇八 :11.6 生化实验报告 血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定及电泳分析

血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定及电泳分析


【实验目的】
1、了解蛋白质分离提纯的总体思路。
2、掌握盐析法、凝胶层析法和离子交换层析的实验原理及操作技术
3、掌握电泳法分离纯化蛋白质的方法。


【实验原理】
1、蛋白质的粗提——盐析法
胶体的盐析是加盐,盐中的带电粒子使蛋白质周围的水化膜减弱,胶粒溶解度降低,形成沉淀析出的过程,是胶体的聚沉现象的一种。向蛋白质溶液中加入某些浓的无机盐[如(NH4)2SO4或Na2SO4]溶液后,可以使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用就叫做盐析。盐析不能使蛋白质变性,可以复原。利用这个性质,可以采用多次盐析的方法来分离、提纯蛋白质。蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目,亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。蛋白质溶液中加入中性盐后,由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质,致使蛋白质分子周围的水化层减弱乃至消失。同时,离子强度发生改变,蛋白质表面的电荷大量被中和,蛋白质溶解度更加降低,之蛋白质分子之间聚集而沉淀。由于各种蛋白质在不同盐浓度中的溶解度不同,不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋白质不同,从而使之从其他蛋白中分离出来。简单的说就是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加入蛋白质溶液,使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏,导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。由于清蛋白的亲水性比球蛋白大,且清蛋白的分子比球蛋白小,所以清蛋白需要高浓度的盐溶液才能够发生盐析,低浓度的时候球蛋白发生盐析。盐析法分离蛋白质:各种蛋白质的颗粒大小、亲水程度、pI不同,盐析所需的盐浓度也不一样。调节盐浓度可使不同的蛋白质沉淀,从而达到分离的目的。

…… …… 余下全文