药敏试验与报告解读
一、药敏试验
1、概念: 测定抗感染药物在体外对病原微生物有无抑菌或杀菌作用的方法称为药物敏感性试验，简称药敏试验。
2、目的：检测可能引起感染的细菌对一种或多种抗菌药的敏感性。
3、结果判断标准: 目前我国药敏试验判断标准参照CLSI标准文件，CLSI文件是我国的卫生部部颁文件。
二、MIC(minimal inhibitory concentration ，最小抑菌浓度）
1、概念：是指在体外试验中，抗菌药物能抑制培养基中细菌生长的最低药物浓度。是抗菌药抗菌活性指标，显示出药物抑制病原微生物的能力。
2、CLSI文件中关于敏感、中介、耐药的定义
???????敏感：最高血药浓度＞4倍MIC，使用常规剂量有效；
???????中介：最高血药浓度≈MIC，加大剂量或药物浓缩部位有效； ???????耐药：最高血药浓度＜MIC，无效。
三、抗生素的等效性与抗菌谱
1、抗生素的等效性：是指用一种相关抗生素的试验结果预测同类抗生素体内抗菌活性。如头孢噻吩与其他一代头孢具有等效性，可用头孢噻吩结果预测其他一代头孢。此特性允许检测少数几种抗生素而不影响临床对其他抗生素广泛选择。
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S(susceptible)，是指细菌对抗菌药敏感，使用常规剂量时的平均血浓度超过MIC 5倍以上，用常规剂量通常有效；I(intermediate）是指细菌对抗菌药中度敏感，常规剂量时平均血浓度等于或略高于MIC，需用高剂量或对体内药物浓缩部位的感染可能有效；R(resistance）是指细菌对某种抗菌药耐药，药物对细菌的MIC 高于应用常规剂量时的血浓度，应用常规剂量治疗通常无效。
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近年来，随着抗菌药物的广泛应用，尤其是光谱及超光谱的抗菌药物的滥用，导致耐药性菌株逐年增多；环境的污染，以及养殖户的饲养管理意识跟不上，促使细菌性疾病的流行及发病率逐年上升；且使用抗菌素药物预防和治疗的效果越来越不理想，为了减少药物的滥用和耐药性的产生，在临床治疗前进行药敏试验筛选出有效的抗菌药物是十分必要的，正确选用药物是治疗和预防禽病的重要措施之
一。笔者根据近几年来的经验选用本公司的现有抗生素药物自制药敏片，通过药敏试验在临床上取得十分好的效果。
一、药敏片的制备
1、纸片的选用 在医疗器械公司购买定性滤纸，用0.6cm的打孔器把滤纸打成圆形纸片，分别装入洁净的青霉素小瓶内，50片/瓶，放入高压蒸汽锅内进行121℃灭菌20min，再放入60-100℃干燥箱烘干，冷却后放入洁净箱备用。
2、抗菌药液的配制 选用本公司的抗菌药物，按我们习惯常用的药物浓度进行配比，如冀农杆特，规格为100g/瓶，习惯常用兑水量为400斤水，即用分析天枰称取0.2g的杆特5ml灭菌生理盐水置于灭菌的青霉素小瓶内，充分溶解后再吸取0.1ml于另一灭菌青霉素瓶内，加入3.9ml的灭菌生理盐水即可。
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抗菌药物实验方法――药敏试验
由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，细菌的耐药性问题正变得越来越突出，不少耐药菌株可耐受多种抗生素。由此而造成的危害十分严重，它不仅使抗菌药的疗效降低，疗程延长，死亡率升高和治疗费用增加。这不仅给养殖业带来巨大的经济损失，而且耐药菌株可能会将耐药性基因由动物转移给人类，对人类健康也造成潜在威胁。专家强调指出，临床上应合理应用抗菌药，以避免或减少耐药性的产生，而合理应用抗菌药控制畜禽疾病的一项重要内容就是通过药敏试验指导临床用药，以充分发挥抗菌药疗效，并尽可能减少其不良影响。
目前由各种细菌所引起的疾病给畜禽养殖业带来严重经济损失，阻碍了养殖业的快速发展和经济效益，所以使用抗菌药预防和治疗细菌性疾病成了畜禽养殖过程中的一项重要工作。但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，细菌的耐药性问题正变得越来越突出，不少耐药菌株可耐受多种抗生素。由此而造成的危害十分严重，它不仅使抗菌药的疗效降低，疗程延长，死亡率升高和治疗费用增加。这不仅给养殖业带来巨大的经济损失，而且耐药菌株可能会将耐药性基因由动物转移给人类，对人类健康也造成潜在威胁。因此，临床上应合理应用抗菌药，以避免或减少耐药性的产生，而合理应用抗菌药控制畜禽疾病的一项重要内容就是通过药敏试验指导临床用药，以充分发挥抗菌药疗效，并尽可能减少其不良影响。
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微生物鉴定及药敏设备购买可行性论证报告
一、必要性：
根据新的国家医疗体制的设想，医疗卫生服务体系应覆盖大部分人群，因此对公共卫生安全的重视程度会是一个明显的趋势。
而根据卫生部文件的指示，每家二级以上的医院必须筹备医院感染管理委员会，每家医院均须建立流行病学资料。
因此，为了达到国家的要求，保障人民卫生健康，根据我们医院的实际情况，我科特申请购买一套微生物鉴定及药敏设备。
二、可行性：
1）院目前的抗生素使用现状：临床目前普遍的做法为：先上抗生素，再抽血
进行细菌培养，然后才能进行鉴定和药敏；根据这个流程，真正的致病菌往往已经受抗生素影响，等药敏试验的结果出来，往往出现药敏结果与临床疗效不符合的情况。再加，限于经济成本核算考虑，我科室目前在细菌鉴定和药敏方面仍采用手工方法操作，很难达到标准化，另外各种复杂原因，抽取的血液样本又不一定能在第一时间送达进行培养，这些都大大降低了致病菌的检出阳性率。
2）如果引进全套的细菌鉴定及药敏设备，使得上述流程可以标准化，加上人
员的培训和教育，参加国家举办的标准化质量控制体系，我院就能极大地改善细菌鉴定和药敏结果的可靠性，从而更好地为临床服务。
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药敏实验流程
（一）普通肉汤培养基的制作：
1. NaCL5g, 牛肉膏3g，蛋白胨10g，蒸馏水1000ml，PH7.2~7.6, 2%琼脂粉20 g。
2. 先称取NaCL,牛肉膏，蛋白胨易于潮解最后称取，放于烧杯中溶解，玻璃棒搅拌。
3. 用PH试纸或PH校正仪调PH值，偏酸加1mol/L的NaOH,偏碱加1mol/L的HCL。
4. 用量筒再量一次加入2%的琼脂粉玻璃棒搅拌溶解。
5. 盖上硅胶塞，用8层纱布橡皮筋扎好，再用4层报纸包好，令用两层报纸包扎相应数量的平板，121°灭菌20分钟。
6. 把已灭菌了的平板放于烘箱内使其干燥或拆开报纸倒放于无菌工作台内使上面的水珠蒸发。
7. 做好无菌室的准备工作，待培养基的温度合适时开始倒平板，每个倒25~30ml，一般下午用时上午倒平板，第二天上午用时前一天下午倒平板，若用不完的培养基倒置于4°冰箱保存一周内用完。
（二）接种培养：
1. .用酒精棉球檫试要解剖的鱼的体表部位，解剖后用酒精棉球檫试要取的发病组织（肝脾肠）。
2. 点燃酒精灯，用灭菌了的镊子取发病组织剖面涂抹于培养基一角，用着烧过的接种环在培养基内做三四划线或“之”子划线，做上标记，倒置于37°恒温培养箱内培养18~24h。
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纸片扩散药敏试验的原理：将含药物的纸片贴在接种有待测菌的固体培养基上，通过药物在培养基上的扩散，观察是否出现抑菌环，推断是否抑制细菌的生长。药物扩散的距离越远，药物浓度越低抑菌能力越强，因此可根据抑菌环的大小，判定药物对细菌的抑制作用强弱。药敏试验根据美国临床标准委员会 (NCCLS) 推荐的 K–B 琼脂法进行。本实验通过纸片药敏试验法观察多酸化合物对细菌有无抑制作用，为试管二倍稀释法提供有效基础数据。
用无菌棉拭子蘸取已经校正的 0.5 麦氏比浊浓度的菌液，挤掉多余菌液。用棉拭子涂布整个 MH 培养基表面，每次将平板旋转 60°，涂抹三次，最后沿周边擦绕两圈，以保证菌液涂抹均匀。待平板上的水分被琼脂完全吸收后贴含药纸片。用无菌镊子取药敏纸片贴在平板表面，纸片一贴后不可再拿起。每个平板贴 5 张纸片，纸片间距不少于 24 mm，纸片中心距平皿边缘不少于 15 mm。在菌接种后 15 min内贴完纸片。将平板反转，37℃ 恒温孵育 18~24 h 后取出，用游标卡尺测量抑菌圈直径，由平板背面测量最接近的整数毫米数并记录，每个平板各设三个平行组平板，测量抑菌直径时，应取三个平板的平均值为最终结果。抑菌环边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。
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药敏实验
检验原理：含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断的向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈越大，MIC越小。
样本要求:鉴定后的致病微生物纯菌落
检验方法：
1、菌液制备：挑选鉴定后的致病微生物纯菌落3~4个菌落置于灭菌0.9%氯化钠液中，制成均匀悬液。
经与浊度管（0.5麦氏单位比浊管）比较，浊度一致。
2、接种平板：用灭菌的棉拭子蘸取制备好的接种菌液，在管壁上旋转挤压几次，去掉过多的菌液，再用试子涂布整个培养基表面，反复几次，每次将平板旋转60℃，最后沿平皿周边绕两圈，用镊子压平。？每张纸片间距不少于24mm，纸片中心距平皿边缘不少于15mm。
3、孵育：贴好纸片后在15min内放到35℃孵箱，将平板倒置培养。平板孵育16~18h后取出。
4、结果判定：培养后取出平板，测量抑菌环的直径，抑菌环的边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。 【检测结果的解释】
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