篇一 :实验十:血清醋酸纤维薄膜电泳 实验报告

实验十:血清醋酸纤维薄膜电泳

【实验名称】 :血清醋酸纤维薄膜电泳

09救援一班 第3大组

室温:25°

(一)实验目的:

1.学习醋酸纤维薄膜电泳原理。

2.掌握血清醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质的技术。

3.熟悉血清蛋白组分定量方法,并确定血清中蛋白与球蛋白的比值。

(二)实验原理:

血清绝大多数蛋白质的等电点在pH5.0~7.0。在pH8.6的巴比妥缓冲液中,血清蛋白全部带负电荷,在直流电场中向正电极移动,移动的速度与带电蛋白质颗粒所带电荷成正比,与蛋白质颗粒的大小成反比。如果样品点在醋酸纤维薄膜的同一条线上,电泳相同的时间,不同的蛋白质颗粒移动的距离不同,通过染色,薄膜条上的血清的蛋白质被分离成不同的条带。将此薄膜条透明,可以进行扫描,或将色带剪下,将颜色洗脱,进行比色,都能获得各色带所含蛋白质占血清总蛋白的百分比,并可计算血清中清蛋白/球蛋白比值,正常值为1.5~2.5。

(三)实验材料与仪器:

1.实验仪器材料:1、醋酸纤维薄膜(2cm*8cm,厚度120μm)2、人血清;3、烧杯及培养皿 数只;4、x光片;5、镊子;6、试管 六只;7、电泳槽;8、直流稳压电泳仪;9、7220型分光光度计;10、剪刀

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篇二 :醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白实验报告

前言

血清蛋白:

血清蛋白是血液中脂肪酸的携带者。当身体需要能量或者需要建造材料时,脂肪细胞就把脂肪酸释放到血液中 ,脂肪酸被血清蛋白获取,并被运送到需要的部位。

牛血清白蛋白的相对分子质量为10的4次方这个级别,它不是一定的,是多聚物,有的地方测的70 000,这就是一个数据了。在做PCR的时候会用到它。

牛血清蛋白是血液的主要成分,分子量68kD。等电点4.8。含氮量16%,含糖量0.08%。仅含已糖和已糖胺,含脂量只有0.2%。白蛋白由581个氨基酸残基组成,其中35个半胱氨酸组成17个二硫键,在肽链的第34位有一自由巯基。白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中,添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。

醋酸纤维薄膜电泳:

醋酸纤维薄膜电泳以醋酸纤维薄膜为支持物。它是纤维素的醋酸酯,由纤维素的羟基经乙酰化而制成。它溶于丙酮等有机溶液中,即可涂布成均一细密的微孔薄膜,厚度以0.1mm—0.15mm为宜。太厚吸水性差,分离效果不好;太薄则膜片缺少应有的机械强度则易碎。

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篇三 :血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验

血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验

一.实验原理

1、电泳是指带电质点在电场中向本身所带电荷相反的电极移动的现象。在一定pH条件下,不同的质点由于具有不同的等电点而带不同性质的电荷,因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同,即它们的电泳迁移率不同,因此,可使它们分离。
2、影响电泳迁移率的外界因素:电场强度、溶液的pH值、溶液的离子强度和电渗现象。

3、影响电泳迁移率的内在因素:质点所带净电荷的量、质点的大小和形状。

4、采用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法称为醋酸纤维素薄膜电泳。醋酸纤维素薄膜电泳具有微量、快速、简便、分辨力高,对样品无拖尾和吸附现象等优点。

5、醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯,将它溶于有机溶剂(如:丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等)后,涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结构,厚度约为120 μm,有很强的通透性,对分子移动阻力很小。

6、本实验以醋酸纤维素为电泳支持物,分离各种血清蛋白。血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白和各种脂蛋白等。各种蛋白质由于氨基酸组成、分子量、等电点及形状不同,在电场中的迁移速度不同。以醋酸纤维素薄膜为支持物,正常人血清在pH8.6的缓冲体系中电泳,染色后可显示5条区带。其中清蛋白的泳动速度最快,其余依次为α1-、α2-、β-及γ-球蛋白。

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篇四 :实验三_醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白

生化实验报告 山东大学实验报告 20xx年

3月27日

姓名 张行润 系年级 2009级生科4班 学号 200900140177 同组者 于潜 科目 生物化学实验 题目 醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白 仪器编号 一、 实验目的

掌握醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白的原理和方法。

二、 实验原理

蛋白质是两性电解质。在pH值小于其等电点的溶液中,蛋白

质为正离子,在电场中向阴极移动;在pH值大于其等电点的溶液

中,蛋白质为负离子,在电场中向阳极移动。血清中含有数种蛋白

质,它们所具有的可解离基团不同,在同一pH的溶液中,所带净

电荷不同,故可利用电泳法将它们分离。

血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等,各

种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形

状不同,在电场中迁移速度不同。由表可知,血清中5种蛋白质的

等电点大部分低于pH值7.0,所以在pH8.6的缓冲液中,它们都电

离成负离子,在电场中向阳极移动。

实验三醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白

1

生化实验报告

实验三醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白

在一定范围内,蛋白质的含量与结合的燃染料量成正比,故可将蛋白质区带剪下,分别用0.4mol/L NaOH溶液浸洗下来,进行比色,测定其相对含量。也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描,测定其相对含量。

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篇五 :血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验设计

综合性实验

实验报告

实验名称:血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳

姓  名:

指导教师:

专  业: 生物技术

实验班级:

实验时间:

实验地点:实验楼生物化学实验室

成  绩:_________________________________

一、    实验目的

1、掌握醋酸纤维薄膜电泳的原理和操作方法。

2、作出清晰合格的人血清蛋白的电泳图谱。

二、    实验原理

     1、带电颗粒在电场的作用下,向着与其电性相反的方向移动,这种现象称为电泳,采用醋酸纤维薄膜为支持物的电泳方法称为醋酸纤维薄膜电泳。

     影响泳动速度的重要因素:①电场强度E  ②溶液的pH  ③溶液的离子强度   ④电渗现象  ⑤其他影响因素

         血清蛋白的等电点,分子量与泳动度的关系

          正常人血清蛋白的相对含量:     清蛋白    54.0~73.0%

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篇六 :血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳

2011级生化实验

血清醋酸纤维素薄膜电泳

一、目的要求

1. 掌握醋酸纤维素薄膜电泳的基本原理及操作过程。

2. 了解猪血清蛋白质的各种成分。

3. 熟悉猪血清中各种蛋白质相对含量的测定原理和方法。

4. 熟悉分光光度计的工作原理及使用方法。

二、实验原理

1. 电泳的基本原理

电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团,它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电,在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下,由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异,使带电分子产生不同的迁移速度,从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。电泳过程必须在一种支持介质中进行。自由界面电泳没有固定支持介质,所以扩散和对流都比较强,影响分离效果。于是出现了固定支持介质的电泳,样品在固定的介质中进行电泳过程,减少了扩散和对流等干扰作用。最初的支持介质是滤纸和醋酸纤维素膜。 由于pH值的改变会引起带电分子电荷的改变,进而影响其电泳迁移的速度,所以电泳过程应在适当的缓冲液中进行,缓冲液可以保持待分离物的带电性质的稳定。

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篇七 :影响血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验分离效果的因素

影响血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验分离效果的因素:

【1】电泳介质pH的影响:

对于蛋白质及氨基酸等两性物质,电泳介质的pH影响蛋白质的电泳情况 即可决定蛋白质的带电量(Q)。

pI-pH<0,分子带正电荷,向负极泳动;

pI-pH>0,分子到负电荷,向正极泳动;

pI-pH=0,兼性离子,净电荷为零。

pH偏离等电点越远,分子所带净电荷越多,其泳动速度越快。

所以,当┃pI-pH┃接近零时,分子处于等电状态,不移动,影响条带清晰度,从而影响实验分离效果。

【对应注意点】由于血清蛋白质的等电点多在pH 4~6 之间,因此,分离血清

蛋白常用pH 8.6的巴比妥缓冲液或者三羟甲基氨基甲烷(Tris)

缓冲液。

【2】缓冲溶液的离子强度:

离子强度低,电泳速度快,分离区带不易清晰;

离子强度高,电泳速度慢,但区带分离较清晰。

离子强度过低,缓冲溶液的缓冲量小,不易维持pH的恒定;

离子强度过高,则降低蛋白质的带电量使电泳速度减慢。

所以,当离子强度过低时,电泳速度虽快,但易引起分离区带不清晰; 当离子强度过高时,虽分离区带清晰,但点用速度过慢,所以要选择合适

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篇八 :生物化学实验五——醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白 山东大学实验报告

实验五 醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白

13生物基地 201300140059 刘洋 20##-04-29

同组者:张奕

一、实验目的

掌握醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白的原理和方法。

二、实验原理

蛋白质是两性电解质。在pH值小于其等电点的溶液中,蛋白质为正离子,在电场中向阴极移动;在pH值大于其等电点的溶液中,蛋白质为负离子,在电场中向阳极移动。血清中含有数种蛋白质,它们所具有的可解离基团不同,在同一pH的溶液中,所带净电荷不同,故可利用电泳法将它们分离。

血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等,各种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同,在电场中迁移速度不同。由表可知,血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH值7.0,所以在pH8.6的缓冲液中,它们都电离成负离子,在电场中向阳极移动。

在一定范围内,蛋白质的含量与结合的燃染料量成正比,故可将蛋白质区带剪下,分别用0.4mol/L NaOH溶液浸洗下来,进行比色,测定其相对含量。也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描,测定其相对含量。

肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。肾病时α1、α2、β球蛋白升高,γ-球蛋白降低。肝硬化时α2、β-球蛋白降低,而α1、γ-球蛋白升高。

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