实验一  蛋白质及氨基酸的呈色反应

一、实验目的

1、了解构成蛋白质的基本结构单位及主要联接方式

2、了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理

3、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法

二、实验原理

1. 双缩脲反应(biuret reaction)

蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫色或红色，此反应称为双缩脲反应，双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。

2. 茚三酮反应(ninhydrin reaction) 

蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮反应。  

3.苯环的黄色反应

Tyr

Trp

Phe+少量浓硫酸+浓硝酸                        黄色

4. 乙醛酸的反应：

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实验三蛋白质及氨基酸的呈色反应

一、实验目的

1、了解蛋白质和某些氨基酸的特殊颜色反应及其原理

2、掌握几种常用鉴定蛋白质和氨基酸的方法

二、实验内容

    对蛋白质及氨基酸的双缩脲反应、茚三酮反应、黄色反应、乙醛酸反应、偶氮反应、醋酸铅反应等颜色及沉淀反应进行定性确定。

三、实验操作

（一）   双缩脲反应

1、实验原理

当尿素加热到180℃左右时，两个分子的尿素缩合可放出一个分子氨后形成双缩脲，双

缩脲在碱性溶液中与铜离子结合生成复杂的红色配合物，此呈色反应称为双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有多个肽键，其结构与双缩脲相似，故能呈此反应，而形成紫红色或蓝紫色的配合物。此反应常用作蛋白质的定性或定量的测定。

2、试剂

(1)尿素

(2)10%NaOH溶液

(3)1%CuSO₄溶液

(4)蛋白质溶液：将鸡蛋清用蒸馏水稀释10~20倍，3层纱布过滤，滤液冷藏备用。

3、操作

（1）取少许结晶尿素放在干燥试管，微火加热，则尿素开始熔化，并形成双缩脲，释放的氨可用湿润的红色石蕊试纸鉴定。待熔融的尿素开始硬化，试管内有白色固体出现，停止加热，让试管缓慢冷却。然后加10% NaOH溶液 1 ml和1% CuSO­4 2~3滴，混匀后观察颜色的变化。

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,实验二蛋白质及氨基酸的呈色反应

一、实验目的

1、了解蛋白质和某些氨基酸的特殊颜色反应及其原理

2、掌握几种常用鉴定蛋白质和氨基酸的方法

二、实验内容

    对蛋白质及氨基酸的双缩脲反应、茚三酮反应、黄色反应、乙醛酸反应、偶氮反应、醋酸铅反应等颜色及沉淀反应进行定性确定。

三、实验操作

（一）   双缩脲反应

1、实验原理

当尿素加热到180℃左右时，两个分子的尿素缩合可放出一个分子氨后形成双缩脲，双

缩脲在碱性溶液中与铜离子结合生成复杂的红色配合物，此呈色反应称为双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有多个肽键，其结构与双缩脲相似，故能呈此反应，而形成紫红色或蓝紫色的配合物。此反应常用作蛋白质的定性或定量的测定。

2、试剂

(1)尿素

(2)10%NaOH溶液

(3)1%CuSO₄溶液

(4)蛋白质溶液：将鸡蛋清用蒸馏水稀释10~20倍，3层纱布过滤，滤液冷藏备用。

3、操作

（1）取少许结晶尿素放在干燥试管，微火加热，则尿素开始熔化，并形成双缩脲，释放的氨可用湿润的红色石蕊试纸鉴定。待熔融的尿素开始硬化，试管内有白色固体出现，停止加热，让试管缓慢冷却。然后加10% NaOH溶液 1 ml和1% CuSO­4 2~3滴，混匀后观察颜色的变化。

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实验五 蛋白质的性质实验——蛋白质及氨基酸的呈色反应

一、实验目的

1．了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。

2．了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。

3．学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。

Ⅰ 双缩脲反应

二、实验原理

尿素加热至180℃左右，生成双缩脲并放出一分子氨。双缩脲在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。可用于蛋白质的定性或定量测定。

因此，一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。

三、材料、仪器与试剂

尿素；10%氢氧化钠溶液；1%硫酸铜溶液；2%卵清蛋白溶液

四、实验操作

取少量尿素结晶，放在干燥试管中。用微火加热使尿素熔化。熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。冷后，加10%氢氧化钠溶液约1ml，振荡混匀，再加1%硫酸铜溶液1滴，再振荡。观察出现的粉红颜色。要避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。

向另一试管加卵清蛋白溶液约1ml和10%氢氧化钠溶液约2ml，摇匀，再加1%硫酸铜溶液2滴，随加随摇。观察紫玫瑰色的出现。

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实验二       蛋白质及氨基酸的呈色反应

【实验目的】

1.了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。

2.了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。

3.学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。

（一）双缩脲反应

【实验原理】

?    尿素加热至180℃左右生成双缩脲并放出一分子氨。双缩脲在碱性环境中能与cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。可用于蛋白质的定性或定量测定。

?    一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。

 

【实验器材及试剂】

器材：

试管、酒精灯、试管夹、试管架

试剂：

（1）尿素

（2）10%氢氧化钠溶液

（3）1%硫酸铜溶液

（4）2％卵清蛋白溶液

【实验步骤】

?    取少量尿素结晶，放在干燥试管中。用微火加热使尿素熔化。熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。冷后，加10％氢氧化钠溶液约1毫升，振荡混匀，再加1％硫酸铜溶液1滴，再振荡。观察出现的粉红颜色。避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。

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实验十一蛋白质与氨基酸的显色反应

一、实验目的

1、了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。

2、了解蛋白质和某些氨基酸的显色反应原理。

3、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。

（一）双缩脲反应

1、实验原理

尿素加热至180℃左右生成双缩脲并放出一分子氨。双缩脲在碱性环境中能与cu²⁺结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。可用于蛋白质的定性或定量测定。

一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。

2、实验器材及试剂

（1）器材：  试管、酒精灯、试管夹、试管架

（2）试剂： 1）尿素 

2）10%氢氧化钠溶液

3）1%硫酸铜溶液

4）2%卵清蛋白溶液，或新鲜鸡蛋清溶液（将鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍，3层纱布过滤，滤液冷藏备用）。

3、实验步骤

（1）取少量尿素结晶，放在干燥试管中。用微火加热使尿素熔化。熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。冷后，加10%氢氧化钠溶液约1毫升，振荡混匀，再加1%硫酸铜溶液1滴，再振荡。观察出现的粉红颜色。避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。 

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实验9  蛋白质及氨基酸的颜色反应

一、目的和要求

1、了解蛋白质和某些氨基酸的特殊颜色反应及其原理

2、掌握几种常用鉴定蛋白质和氨基酸的方法

二、试剂

1.         鸡蛋清。

2.         蛋白质溶液：将鸡蛋清用蒸馏水稀释10~20倍，3层纱布过滤，滤液冷藏备用。

3.         10% NaOH溶液；20% NaOH。

4.         浓硝酸（比重1.42）；浓盐酸；浓硫酸（分析纯）；冰醋酸（一般含有乙醛酸杂质，故可用冰醋酸代替乙醛酸）。

5.         1% CuSO₄溶液。

6.         10% Pb(Ac)₂溶液（醋酸铅溶液）。

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实验二 蛋白质的显色反应

一、实验目的

1、了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接形式。 2、了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。 3、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。 二、呈色反应

1、双缩脲反应 （1）原理：

尿素加热至180C左右，生成双缩脲并放出一分子氨。双缩脲在碱性条件下能与Cu结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应（二肽和氨基酸都不能发生双缩脲反应）。可用于蛋白质的定性或定量测定。

反应式如下：

o

2+

双缩脲反应不仅为含有两个以上肽键的物质所有，含有一个肽键和一个-CS-NH2, -CH2-NH2,

-CHR-NH2, -CH2-NH2-CH-NH2-CH2-OH或-CHOHCH2NH2等基团的物质以及乙二酰二胺等物质也有此反应。NH3也干扰此反应，因为NH3与Cu可生成暗蓝色的络离子Cu（NH3）4。因此，一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。

（2）试剂

①尿素，②10%氢氧化钠溶液，③1%硫酸铜溶液，④水= 1：9）

（3）操作

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