培养基配制及灭菌实验报告单
班级 名字 小组成员 时间 指导老师
一、 实验目的
了解培养基的配制原理;掌握配制培养基的一般方法和步骤;了解常见灭菌、清毒基本原理及方法;掌握高压蒸汽灭菌操作方法。
二、实验原理
培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同,培养基也有不同的种类和配制方法。
马铃薯培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供微生物生长繁殖之用。高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
平板划线接种法(分离培养法):是将细菌分离培养的常用技术,其目的是将混有多种细菌的培养物,或标本中不同的细菌(病原菌与非病原菌)使其分散生长,形成单个菌落或分离出单一菌株,便于识别鉴定。平板划线接种方法较多,其中以分段划线法与曲线划线法较为常用。
三、试剂与器材
1.器材
试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、镊子等。
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实验二 培养基的配制和灭菌
一、 实验目的
微生物的生长发育都有一定的营养需要,培养基即人工培养微生物、为其生长发育提供所需营养的基质。培养基配好后必须经过灭菌方能用于分离培养微生物试验,因此培养基的配制和灭菌是植物病理实验室中最基本的工作,通过本次实验学习植病实验室中常用培养基的配制方法和高压灭菌锅的使用方法。
二、内容、材料和方法
(一)培养基的配制
培养基按组成成分及对这些成分了解的程度分为天然培养基、半组合培养基和组合培养基三类,从物理性质上又分为液体培养基和固体培养基两类,培养基的种类不同,配制方法也有差异,限于时间,本次实验仅配制马铃薯琼脂培养基和牛肉膏蛋白胨培养基。
1、马铃薯蔗糖琼脂培养基(PSA)
这是植病实验室最常用的培养基(简称PSA),主要用于植物病原真菌的分离和培养,有时也用于植物病原细菌。
成分:马铃薯200克
蔗 糖 10~20克
琼 脂 17~20克
加水至1000毫升
方法:将马铃薯洗净去皮切块,加水煮沸半小时,用双层纱布滤去薯块,补足水量,加入琼脂,加热熔化,再加糖,待完全化后,乘热用双层纱布过滤分装,塞好棉塞高压灭菌。
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一、实验题目:培养基的制备与灭菌
二、实验目的:
1、明确培养基的配置原则,掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理,学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材:
1、药品:牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器:三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理:
1、培养基的制备
包括一下几种成分:
(1)水分:主要成分。
(2)N源:包括无机氮和有机氮。
(3)C源:主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
(4)无机盐:如NaCl、KH2PO4等。
微量元素:Cu、K、Mg、S、P、Zn。
有些还需要添加“生长因子”,通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则
根据不同的培养对象及培养目的,选用不同的培养基,但有机物总量不得超过15%,盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类:
按成分:天然培养基、合成培养基、半合成培养基
按状态:固体培养基、半固体培养基、液体培养基
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《培养基的制备与消毒灭菌》 实验报告
实验目的
1.学习和掌握配制培养基(以牛肉膏蛋白胨培养基的配制为例)的一般方法和原理。
2.了解消毒和灭菌的原理,掌握常用灭菌方法的操作步骤。
实验原理
培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质,用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。在自然界中.微生物种类繁多,营养类型多样,加之实验和研究的目的不同,所以培养基的种类很多。但是,不同种类的培养基中,一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。不同微生物对PH要求不一样.雷菌和酵母的培养基的pH一般是偏酸性的,而细菌和放线菌的培养基的pH一般为中性或微碱性的(嗜碱细菌和嗜酸细菌例外)。所以配制培养基时,都要根据不同微生物的要求将培养基的pH调到合适的范围。此外,由于配制培养的各类营养物质和容器等含有各种微生物,因此,已配制好的培养基必须立即灭菌.如果来不及灭菌,应暂存冰箱内,以防止其中的微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养的酸碱度所带来不利的影响。
高压蒸气灭菌是将持灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内,通过加热,使灭菌锅套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽,然后关闭排气阀.继续加热,此时由于蒸气不能道出,而增加了灭菌器内的压力,从而使沸点增高,得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
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培养基的配制与灭菌
一、实验目的
1. 了解一般培养基配制原理,掌握培养基常规配制程序。
2. 了解培养基配制过程各环节的要求和注意事项,掌握实验室各种灭菌技术及玻璃器皿的包装方法。
二、基本原理
培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料,主要含有微生物生长繁殖所必需的碳源、氮源、无机盐、生长因子及水分,并要求具有适宜的pH值、合适的渗透压等。由于微生物具有不同的营养类型,对营养物质的要求各不相同,加之实验和研究的目的不同,所以培养基的种类很多,使用的原料各有差异,但一般配制程序却大致相同。
三、实验材料
1. 器皿及材料
天平、称量纸、钥匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、橡胶塞、试管架、三角瓶、移液管、洗耳球、培养皿、玻璃棒、烧杯、剪刀、酒精灯、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、电炉、灭菌锅等。
2. 药品试剂
蛋白胨、牛肉膏、NaCl、琼脂、水、1mol/LNaOH溶液、1mol/LHCl溶液。
四、实验流程
称药品→溶解→调pH值→加琼脂融化(补水,固体培养基用)→过滤(可省略)→分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板→无菌检查。
五、操作步骤
1. 称量药品
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实验一 培养基的配制与灭菌
一、目的
掌握培养基母液的配制方法;培养基的配制和灭菌技术;不同质地实验用品的灭菌方法。
二、方法步骤
1、玻璃器皿清洗
2、母液配制
一般大量元素、微量元素和其它成分分别配制成100-200倍母液,使用时按比例稀释即可。配好的母液需贮存于2~4℃的冰箱中,定期检查有无沉淀和微生物污染,如果出现沉淀或微生物污染,则不能使用。
同学们只要配大量元素母液,按教科书P32页上进行,但不是20倍,配10倍即可。其他母液老师已经配制好,请注意试剂瓶上的浓度,即浓缩的倍数。
3、植物激素母液配制
植物激素一般配制成浓度为0.1—1.0mg/ml的溶液,贮存在2~4℃下备用。由于多数激素难溶于水,所以配制时应按下面步骤进行:
IAA: 先用少量95%乙醇使之充分溶解,再加蒸馏水定容至需要浓度的体积。
NAA:可溶于热水中,也可采用与IAA同样的方法配制。
2,4-D:先用少量1mol/L的NaOH溶液充分溶解,然后缓慢加入蒸馏水定容至需要浓度体积。
细胞分裂素类:KT和BA等细胞分裂素类物质均溶于稀盐酸,应先用少量1mol/L的HCl溶
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培养基的常规配置程序
一、目的要求
1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2. 掌握培养基的配置原则和方法。
3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。
二、基本原理
营养琼脂培养基:
是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌:
主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内,通过加热,使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽,关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出,压力增大,沸点升高,获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性,而达到灭菌的目的。
三、实验材料
1. 药品:营养琼脂、蒸馏水。
2. 仪器及玻璃器皿:天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿等。
3. 其他物品:药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。
四、操作步骤
(一)玻璃器皿的洗涤和包装
1.玻璃器皿的洗涤
将玻璃器皿浸入含有洗涤剂的水中.用毛刷刷洗,然后用自来水及蒸馏水冲净。再置于烘箱中烘干后备用。
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