实验四环境中微生物的检测和分离纯化
一、 实验目的
1. 熟悉常用微生物培养基的配置方法。
2. 学习并掌握各种无菌操作技术,并用此技术进行微生物稀释分离、划线分离接种。
3. 用平板划线法和稀释法分离微生物。
4. 认识微生物存在的普遍性,体会无菌操作的重要性。
二、 实验原理
土壤中有数量巨大、种类丰富的微生物,可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的是平板分离法。
平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释,使其中的微生物充分分散成单个细胞,取一定量的稀释样液接种到平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数,根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品含菌数。
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实验三 菌种的分离纯化技术——平板划线法
实验目的
了解平板划线分离纯种的原理,并熟练掌握该操作法。
实验内容
1.培养基平板的制备。
2.用平板划线分离法分离混菌。
实验原理
平板划线分离法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落,通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的,故必须反复分离多次才可得到纯种。其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。
划线的形式有多种,可将一个平板分成四个不同面积的小区进行划线,第一区(A区)面积最小,作为待分离菌的菌源区,第二和第三区(B、C区)是逐级稀释的过渡区,第四区(D区),则是关键区,使该区出现大量的单菌落以供挑选纯种用。为了得到较多的典型单菌落,平板上四区面积的分配应是D>C>B>A。
实验器材
大肠杆菌、枯草芽孢杆菌混合菌悬液
牛肉膏蛋白胨培养基
无菌培养皿,水浴锅,接种环等。
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实验六 平板划线法分离菌种
一、实验目的
1、了解平板划线法分离菌种的基本原理
2、练习平板划线法分离菌种的基本操作,掌握无菌操作技术
二、实验原理
平板划线法是指把杂菌样品通过在平板表面划线稀释而获得单菌落的方法。一般是将混杂在一起的不同种微生物或同种微生物群体中的不同细胞,通过在分区的平板表面上作多次划线稀释,形成较多的独立分布的单个细胞,经培养而繁殖成相互独立的多个单菌落。通常认为这种单菌落就是某微生物的“纯种”。实际上同种微生物数个细胞在一起通过繁殖也可形成一个单菌落,故在科学研究中,特别是在菌种鉴定等工作中,必须对实验菌种的单菌落进行多次划线分离,才可获得可靠的纯种。
平板划线分离对细菌、酵母菌较为适宜,而霉菌和放线菌的分离多采用稀释分离法进行菌种的分离纯化。
具体的划线形式有多种,这里仅介绍一种经过长期实践并证明可获得良好实验效果的方法:将一个平板分成A、B、C、D4个面积不同的小区进行划线,A区面积最小,作为待分离菌的菌源区,B和C区为经初步划线稀释的过渡区,D区则是关键的单菌落收获区,它的面积最大,出现单菌落的概率也最高。由此可知,这4个区的面积安排应做到D>C>B>A。
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平板划线法操作步骤
1.操作前准备:将接种环2支,酒精灯2个,打火机2个,无菌平板两包,酒精棉球2瓶,镊子2个,洁净烧杯2个置于超净工作台,打开紫外灯,灭菌30分钟。取待纯化菌种2支放入超净工作台。操作者直立坐于操作台前,打开操作台玻璃,高度可供双手顺利出入即可。
2.擦拭:用镊子取酒精棉球擦拭双手,在超净工作台门口处,并将台面擦出与肩同宽的正方形区域,此区域即为操作区域。将用毕的棉球放入烧杯中。
3.物品摆放:将酒精灯放于擦拭区域的中心,将接种环放于酒精灯的右侧,将菌种放于酒精灯的左侧,将无菌平板的包装除去,包装置于操作区外,无菌平板置于酒精灯左侧。
4.点燃酒精灯:打开酒精灯盖,将盖扣于离开操作区的台面上,点燃酒精灯,酒精灯周围3-5cm之内即为无菌区。
5.灼烧接种环:右手持接种环,将接种环的金属丝直立于酒精灯外焰处,灼烧至红透,然后略倾斜接种环,灼烧金属杆,注意灼烧时要将金属丝与金属杆的连接部分充分灼烧。
6.取菌种:左手持斜面的底部,将管口置于火焰的无菌区,右手小指打开试管塞,将接种环的接种丝放于外焰处再次灼烧至红透,然后将其深入试管内部,稍微凉一下,轻轻取一环,勿划破培养基,将接种环从试管中取出,注意取时勿碰触试管壁。将试管塞灼烧一圈,塞于试管上。因试管口一直在火焰的外焰处,故其温度较高,塞试管塞时注意勿烫手。
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南昌大学实验报告
学生姓名: 叶落不晓 学 号: 6002212025 专业班级: 给排水121班
实验类型:√ 验证□ 综合□ 设计□ 创新 实验日期:20##-12-02~09 实验成绩:
水处理微生物学实验实验设计:
水体中总大肠菌群的检验
一、实验目的和要求
1.掌握多管发酵法测定水中大肠菌群的技术;
2、通过大肠杆菌群的测定,了解大肠杆菌群的生化特性;
3、学习使用大肠菌群检数表;
3、进一步巩固光学显微镜的使用方法。
二、实验基本原理
总大肠菌群可用多管发酵法或滤膜法检验。多管发酵法的原理是根据大肠菌群能发酵乳糖、产酸、产气,以及具备革兰氏染色阴性,无芽孢,呈杆状等有关特性,通过初发酵试验、平板分离和复发酵试验等三个步骤进行检验求得水样中的总大肠菌群数。试验结果以最可能数(Most Probable Number),简称MPN表示。
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脓汁和粪便标本中病原菌的检测
09级 临床心理 113200900140026 方海瑞
v 实验目的
①实验课教学的主要目标是使我们了解医学微生物学主要的研究方法和手段,掌握基本技能和基本原理,树立牢固的无菌观念。
②培养我们自学能力、科学思维能力、动手能力和表达能力。
③掌握检测脓汁和粪便标本中病原菌的基本方法和操作
实验器材
常用设备:隔水式电热恒温培养箱 冷冻室
固定器材:试管架 酒精灯 污物盘 油性笔 打火机 奥林巴斯 CX21型生物显微镜
共用实验台:蒸馏水 1‰新洁而灭 玻片缸 消毒液
微生物器材柜(放微生物实验必备器材和试剂等)
此次实验专用器材:天平,干粉培养基,浓汁标本1支,粪便标本1支,碘酒棉球1瓶,酒精棉球1瓶,眼科镊子2把,伊红美兰平板2个,营养琼脂平板5个,斜面4支,细菌分离培养物(上次实验平板),斜面培养物4支,营养肉汤4支,生理盐水2支,营养肉汤培养物(菌液)4支,半固体琼脂4支,营养琼脂平板4个,糖发酵管1套,抗菌素纸片1套,眼科镊子2把,镜油瓶、拭镜纸1套,吸水纸1本,载玻片4张,半固体培养物4支,药敏试验培养物4个,微量发酵管培养物1套。
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微生物技术综合实验
年 级: 13级生物工程(专升本)
班 级: 2013011201
学 号: 1301014026
姓 名: 徐 红 贞
指导老师: 刘凤霞 教授
日 期: 二零一三十月五号
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