预习报告

一、实验名称:薄层色谱和柱色谱

二、实验目的：1、学习薄层色谱和柱色谱技术的原理和应用

2、掌握薄层色谱和柱色谱分离技术和操作要点。

3、掌握如何正确的配置展开剂

三、实验原理：色谱法的基本原理，是利用混合物各组分在固定相

和流动相中分配平衡常数的差异。简单地说就是，当

流动相流经固定相时，由于固定相对各组分的吸附或

溶解性能的不同，使吸附力较弱或溶解度较小的组分

在固定相中移动的速度较快，在多次反复平衡过程中

导致各组分在固定相中形成了分离的“色带”，从而

得到分离。

四、主要试剂规格及用量

1%偶氮苯的甲苯溶液，1%苏丹Ⅲ的甲苯溶液，1%的羧甲基纤维素

钠（CMC）水溶液，硅胶G，立即比为9:1的甲苯-乙酸乙酯。

五、实验装置图（见实验记录本）

六、实验步骤

（一）薄层色谱实验步骤：

1、薄层板的制备（此实验中不考虑，有直接的可用）

2、取两块薄层板，分别在距一端1cm处用铅笔轻轻地画一条

线，作为起始线。用分别两根毛细管，分别取偶氮苯、苏丹

甲苯溶液和其混合液放在起始线上，取两个样点，且两样点

相距1到1.5厘米，且样点的直径不超过2毫米。如果样点 颜色太浅，可以等其变干后在重复几次。

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实验十 薄层色谱和柱色谱

1.

①

②

2.

① 实验目的 了解薄层色谱和柱色谱的基本原理； 学习用薄层色谱和柱色谱分离、纯化有机化合物的技术 实验原理 色谱法是分离、提纯和鉴定有机化合物的重要方法之一。 其基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能的不同，或其它亲和作用性能的差异，使混合物的溶液流经该物质时进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分开。流动的混合物溶液称为流动相；固定的物质称为固定相(可以是固体或液体)。根据组分在固定相中的作用原理不同，可分为吸附色谱、分配色谱等。吸附色谱常用氧化铝和硅胶作固定相；分配色谱中以硅胶、硅藻土和纤维素作为支持剂，以吸收较大量的液体作固定相，而支持剂本身不起分离作用。根据操作条件不同，可分为柱色谱、纸色谱、薄层色谱、气相色谱及高效液相色谱等类型。

② 薄层色谱：薄层色谱属于固-液吸附色谱，是一种微量的分离分析方法，具有设备简单、速度快、分离效果好、灵敏度高以及能使用腐蚀性显色剂等优点。适用于小量样品(几到几十微克，甚至0.01?g的分离。此法特别适用于挥发性较小或者在较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。其可分为吸附色谱和分配色谱。由于不同组分被固定相吸附程度不同，在流动相中溶解程度不同，因此，不同组分移动的距离不同，因而形成了互相分离的斑点

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运用薄层色谱法对氨基酸分析实验的改进 作者：林 珊

来源：《职业·中旬》20xx年第01期

薄层色谱法(thin layer chromatography,TLC)是20世纪50年代从经典柱色谱法和纸色谱法基础上发展起来的一种色谱技术,是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术,属固-液吸附色谱。薄层色谱法操作简便、快速、灵敏、分离效果好、显色容易,在生物化学与分析实验中广泛应用于氨基酸、多肽、核苷酸、脂类、类、生物碱等多种物质的分离和鉴定。但在氨基酸分析实验中,常出现显色效果不好及拖尾的现象,为改变以上现状,我们经过多次实验,提出以下方案。

一、氨基酸薄层色谱茚三酮显色的改良

薄层色谱是将固相支持物(也叫吸附剂)均匀铺在玻璃板上使之成为薄层,将待分析的样品点到薄层板的一端,然后将点样端浸入适宜的扩剂中,在密闭的层析缸中展层。由于各种氨基酸的理化性质(分子极性、分子大小和形状、分子亲和力等)不同,其在吸附剂表面的吸附能力各异。当展开剂在薄层板的毛细管中移动时,点在薄板上样品的组分就不同程度地随着展开剂移动,使不同的氨基酸得以分离。

由于吸附剂在喷雾显色时,常见层析表面破坏,造成分析困难,经过多次实验发现,若不采用喷雾法,而直接将展开剂与喷雾剂同时使用,不但便于操作,氨基酸斑点清晰,边缘整齐,薄层面光滑完整,而且比移值也保持不变。

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有机化学实验报告

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实验项目名称: 柱色谱和薄层色谱 一、实验目的:

1.了解色谱法分离提纯有机化合物的基本原理和应用. 2.掌握柱层析, 薄层层析的操作技术. 二、实验基本原理（或主、副反应式）

色谱法的基本原理是利用混合物各组分在某一物质中的吸附或溶解性能分配的不同,或其亲和性的差异,使混合物的溶液流经该种物质进行反复的吸附或分配作用,从而使各组分分离.色谱法在有机化学中的应用主要包括分离混合物，精致提纯化合物，鉴定化合物，观察一些反应是否完成等等；吸附色谱主要以氧化铝、硅胶等为吸附剂，将一些物质自溶液中吸附到它的表面，而后用溶剂洗脱或展开，利用不同化合物受到吸附剂的不同吸附作用，和它们在溶剂中不同的溶解度，也就是利用不同化合物在吸附剂和溶液之间的分布情况不同而得到分离。吸附色谱分离课可采用柱色谱和薄层色谱两种方式。

三、主要试剂及主、副产物的物理常数(列举实验所涉及的主要物质与试剂需要的物理常数就可以)

四、主要试剂规格及用量

薄层色谱：样品1：1%偶氮苯的苯溶液，样品2: 1%苏丹Ⅲ的苯溶液，样品3：以上两者的混合物；展开剂；9:1的无水苯—乙酸乙酯，硅胶G薄层板。 柱色谱：荧光黄（1mg）和次甲基蓝（1mg）溶于1ml 95%乙醇溶液、中性氧化铝（100—200目）、石英砂；洗脱剂；95%的乙醇，冰醋酸。 五、实验装置图

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实验一 柱色谱、薄色谱

一、实验目的

1、了解色谱法分离提纯有机化合物的基本原理和应用。

2、掌握柱层析、薄层层析的操作技术。

二、实验原理

色谱法（Chromatography）亦称色层法、层析法等。

色谱法是分离、纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一。色谱法的基本原理是利用混合物各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（分配）的不同，或其亲和性的差异，使混合物的溶液流经该种物质进行反复的吸附或分配作用，从而使各组分分离。

     色谱法在有机化学中的应用主要包括以下几方面:

1、分离混合物  一些结构类似、理化性质也相似的化合物组成的混合物，一般应用化学方法分离很困难，但应用色谱法分离，有时可得到满意的结果。

2、精制提纯化合物  有机化合物中含有少量结构类似的杂质，不易除去，可利用色谱法分离以除去杂质，得到纯品。

3、鉴定化合物  在条件完全一致的情况，纯碎的化合物在薄层色谱或纸色谱中都呈现一定的移   动距离，称比移值（Rf值），所以利用色谱法可以鉴定化合物的纯度或确定两种性质相似的化合物是否为同一物质。但影响比移值的因素很多，如薄层的厚度，吸附剂颗粒的大小，酸碱性，活性等级，外界温度和展开剂纯度、组成、挥发性等。所以，要获得重现的比移值就比较困难。为此，在测定某一试样时，最好用已知样品进行对照。

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薄层色谱和柱色谱

色谱法是分离、提纯和鉴定有机化合物的重要方法，有着极其广泛的用途。

色谱法的基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能(即分配)的不同，或其它亲和作用性能的差异，使混合物的溶液流经该物质时进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分开。流动的混合物溶液称为流动相；固定的物质称为固定相(可以是固体或液体)。根据组分在固定相中的作用原理不同，可分为吸附色谱、分配色谱等。吸附色谱常用氧化铝和硅胶作固定相；分配色谱中以硅胶、硅藻土和纤维素作为支持剂，以吸收较大量的液体作固定相，而支持剂本身不起分离作用。根据操作条件不同，可分为柱色谱、纸色谱、薄层色谱、气相色谱及高效液相色谱等类型。

一、薄层色谱

薄层色谱(Thin Layer Chromatography, TLC)属于固-液吸附色谱，是一种微量的分离分析方法，具有设备简单、速度快、分离效果好、灵敏度高以及能使用腐蚀性显色剂等优点。适用于小量样品(几到几十微克，甚至0.01?g)的分离。同时薄层色谱是一种非常有用的跟踪反应的手段，在进行化学反应时，常利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失来判断反应是否完成。也常用作柱色谱的先导，可用于柱色谱分离中展开剂的选择，也可监视柱色谱分离状况和效果。

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实验六薄层色谱层析

一、实验目的

1、学习 薄层色谱法的原理和方法；

2、学会利用薄层色谱分离提纯有机化合物的规范操作；

2、掌握比移值的计算方法；

3、了解比移值的影响因素。

二、实验原理

层析的基本原理：所有的层析系统都由互不相溶的两相组成，一个是固定相，另一个是流动相。利用混合物中各组分物理化学性质上的差异（如吸附力、分子形状和大小、分子极性、分子亲合力、分配系数（是指在一定温度下达到平衡后溶质在两相中浓度的比值是一个常数）等），使各组分以不同程度分布在两相中，它们以不同的速度移动，最终彼此分开。

层析分类：柱色谱、纸色谱、薄层色谱、气相色谱、 液相色谱

薄层色谱(thin layer chromatography)常用TLC表示，又称薄层层析，属于固－液吸附色谱。依其所采用的薄层材料性质和物理、化学原理的不同，可分为吸附薄层色谱、分配薄层色谱、离子交换薄层色谱和排阻薄层色谱等。

吸附薄层色谱采用硅胶、氧化铝等吸附剂铺成薄层，将样品以毛细管点在原点处，用移动的展开剂将溶质解吸，解吸出来的溶质随着展开剂向前移动，遇到新的吸附剂，溶质又会被吸附，新到的展开剂又会将其解吸，经过多次的解吸-吸附-解吸的过程，溶质就会随着展开剂移动。吸附力强的溶质随展开剂移动慢，吸附力弱的溶质随展开剂移动快，这样不同的组分在薄层板上就得以分离。

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