生物化学实验报告
实验三 酵母核糖核酸的提取及测定
一、研究背景及目的
RNA（核糖核酸）属酸性高分子化合物，是遗传信息的载体，由数量不等的核糖核苷酸通过磷酸二酯键连接而成。由于RNA在细胞内能够行使各种各样的生物功能，参与蛋白质生物合成、调控基因表达、作为核酶催化生化反应活性等，对维持生物体的正常发育有着重要作用。RNA制剂是以RNA及其衍生物为材料，经加工制成的产品，主要包括从富含RNA的生物体中的提取物、自溶物或者降解产物加工制成的各种商品。核糖核苷酸与其衍生物作为一大类RNA制剂，在生物体内有着诸多的功能，例如：ATP是细胞内的能量通用货币，cAMP作为第二信使传递胞外信号，CoⅠ、CoⅡ、CoA、FAD作为酶的辅因子在催化反应中起重要作用，UDP等作为单糖载体在糖代谢中起着重要作用等。此外，鸟苷酸（GMP）和肌苷酸（IMP）是强力助鲜剂，胞苷酸（CMP）和尿苷酸（UMP）可作为生产治疗癌症、肝炎及冠心病等药物的原料；在化妆品中加入核酸或其水解物，可促进皮肤蛋白合成，达到养护皮肤的作用；在农业上，RNA降解物具有促进作物生长增产的作用，因此RNA制剂被广泛应用于医药、食品、农业、日化、环境保护等各产业，具有广阔的商业前景，形成了一大新兴产业。[1]可见，无论是科研工作还是商业产品的生产过程，都需要大量的纯品RNA作为原料。但是RNA的活化能较高，不易直接合成，而天然材料中的RNA往往与细胞内的其他化合物混在一起，故采用廉价、合适的手段分离纯化得到RNA就显得至关重要。目前，人们已经摸索出来了多种多样的方法，这些方法各有特点，但其基本的思路和程序大致相似，基本战略也是有规律可循的。
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实验五 酵母RNA的提取与鉴定
一、实验目的
1. 掌握稀碱法分离酵母RNA的原理与操作过程。
2. 了解RNA的组分并掌握定性鉴定的具体方法。
二、实验原理
1.酵母核酸中RNA含量较多，DNA含量则少于2%。
2.RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，有此可得粗RNA制品。
3.用碱液提取的RNA有不同程度的降解
三、实验仪器
1.离心机
2.水浴锅
3.电炉
4.烧杯
5.量筒
四、实验试剂
1.干酵母粉
2.0.2%氢氧化钠溶液：2g氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至1000ml。
3.乙酸
4.95%乙醇
5.无水乙醚
6.10%硫酸
7.氨水
9.5%硝酸银溶液：5g硝酸银溶于蒸馏水并稀释至100ml，贮于棕色瓶中。
1.苔黑酚-三氯化铁溶液：将100mg苔黑酚溶于100ml浓盐酸中，再加入100mgFeCl3.6H2O。临用时配制。
五、实验步骤
1. RNA的提取：
（1）称取2g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%氢氧化钠溶液10ml，沸水浴加热30分钟，经常搅拌（如沸水浴过程中溶液蒸干可再加5~10ml氢氧化钠）。然后加入乙酸数滴，使提取液呈酸性（pH试纸检验），离心10-15分钟（4000r.p.m）。
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酵母RNA的提取和含量测定
姓名：周超
学号：201100140067
班级：11级生命基地
同组者：刘炳煜
时间：20##年3月26日
【实验目的】
1. 掌握稀间法提取酵母RNA的原理和方法
2. 了解测量核算浓度的不同方法的原理
3. 掌握紫外吸收法测定核酸浓度的原理和技术
4. 学会使用紫外分光光度计
5. 学会使用离心机
【实验原理】
1. 酵母RNA提取的原理：
（1） 酵母核酸中RNA含量较多，DNA则少与2%
（2） RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加入乙醇使其沉淀，由此可制得粗RNA制品。
（3） 用碱提取的RNA有不同程度的降解。
2. 紫外吸收法测RNA含量的原理：
（1）核酸具有吸收紫外线的性质，在波长260nm处有最大吸收，且在一定浓度范围内光吸收值与浓度成正比（5-45ug/ml），符合朗伯-比尔定律。
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实验六——酵母RNA的提取与含量测定
13生物基地 201300140059 刘洋 20##-05-10
同组者：张奕
一、实验目的
1.掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。
2.掌握紫外分光光度计的使用。
3.了解和掌握紫外吸收法测定RNA浓度的原理。
二、实验原理
酵母核酸中RNA含量较多，DNA则少于2%。RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，由此即可得到RNA制品。但是用碱液提取的RNA有不同的降解。
核酸及其衍生物，核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶有吸收紫外光的性质，其吸收高峰在260nm左右， 且一定浓度范围内其浓度与吸光度成正比（浓度为5µg/ml—45µg/ml吸光度与浓度成正比），利用此性质，可用RNA标准液绘制RNA吸光标准曲线(标准曲线的斜率为0.022-0.024左右)，测定样品RNA浓度。由于蛋白质在280nm的光吸收，对核酸测定有一定的干扰作用，最大吸收峰在280nm处，原因是蛋白质组成中常含有酪氨酸和色氨酸等芳香族氨基酸。所以如果有蛋白质的干扰必须得先测260nm处的吸光度，再测280nm处的吸光度，通过计算消除其对核酸的影响。
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姓名：郭沈杰年级专业：2012级生物科学同组者：蔡萍萍
学号：12050011012
实验七 酵母RNA的提取及鉴定
一、实验目的
掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。
二、实验原理
酵母核酸中RNA含量较多，DNA含量则少于2%。RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，有此可得粗RNA制品。
用碱液提取的RNA有不同程度的降解。
三、实验仪器
1、离心机
2、水浴锅
3、电炉
4、烧杯
5、量筒
6、移液管
7、玻璃棒
8、滤纸
9、漏斗
10、试剂瓶
11、电子天平
12、pH试纸（pH1~14）
四、实验试剂
1、干酵母粉
2、0.2%氢氧化钠溶液：2g氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至1000ml。
3、乙酸（A.R.）
4、95%乙醇
5、 无水乙醚（A.R.）
6、10%硫酸：浓硫酸（比重1.84）10ml，缓缓倾于水中，稀释至100ml。
7、氨水（A.R.）
8、5%硝酸银溶液：5g硝酸银溶于蒸馏水并稀释至100ml，贮于棕色瓶中。
五、实验步骤
(一)RNA的提取：
1、称取2g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%氢氧化钠溶液10ml，沸水浴加热30分钟，经常搅拌（如沸水浴过程中溶液蒸干可再加5~8ml氢氧化钠）。冷却，然后加入乙酸数滴，使提取液呈酸性（pH试纸检验，pH5~6），离心10-15分钟（4000r.p.m）。
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华南师范大学实验报告
学生姓名 吴志军 学 号 20082502046
专 业 生物工程 年级、班级 08工程1班
课程名称 下游技术 实验项目 酵母RNA提取
实验类型 验证 设计 综合 实验时间 20##年 10月 17 日
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酵母RNA的提取及含量测定
一、实验目的与要求
1、了解并掌握稀碱法提取RNA的原理和方法；
2、了解测量核酸浓度不同方法的原理；
3、熟悉和掌握紫外吸收法测定核酸含量原理和操作方法；
4、熟悉紫外分光光度计的基本原理和使用方法。
二、实验原理
1、RNA提取原理：
由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也很各异。一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验是最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中。向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好的除去DNA和蛋白质。上述方法提取的RNA具有生物活性。工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。浓盐法使用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3-4h，迅速冷却，提取液经离心后, 上清液用乙醇沉淀RNA。稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。 酵母含RNA达2.67-10.0%，而DNA含量仅为0.03-0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原料。
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实验三 酵母RNA的提取及含量测定
一、实验目的与要求
1、了解并掌握稀碱法提取RNA的原理和方法。
2、熟悉和掌握紫外吸收法测定核酸含量原理和操作方法，
3、熟悉紫外分光光度计的基本原理和使用方法。
二、实验原理
由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也很各异。一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验是最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中。向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好的除去DNA和蛋白质。上述方法提取的RNA具有生物活性。工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。浓盐法使用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3-4h，迅速冷却，提取液经离心后, 上清液用乙醇沉淀RNA。稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。
酵母含RNA达2.67-10.0%，而DNA含量仅为0.03-0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原料。
核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统（-C=C一C=C-），能够强烈吸收250-280nm 波长的紫外光。核酸（DNA,RNA）的最大紫外吸收值在260nm 处。遵照Lambert-Beer 定律，可以从紫外光吸收值的变化来测定核酸物质的含量。
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