常用血细胞化学染色原理及应用
（1）过氧化物酶染色的原理和临床意义
[原理] 粒细胞和单核细胞胞浆中含有的过氧化物酶（peroxidase，POX）能将底物过氧化氢分解，产生新生态氧，它将四甲基联苯胺氧化为联苯胺蓝。联苯胺蓝自我脱氢氧化，显棕色四甲基苯醌二胺，再加入亚硝基铁氰化钠与联苯胺蓝结合，可形成稳定的蓝色颗粒，定位于细胞浆内酶所在的部位。
[临床意义]
临床上主要用于急性白血病类型的鉴别：急性淋巴细胞白血病原、幼淋巴细胞POX染色均呈阴性反应；急性粒细胞白血病 原粒细胞POX染色呈局灶分布的阳性反应；急性早幼粒细胞白血病 颗粒增多的早幼粒细胞POX染色呈强阳性反应；急性单核细胞白血病原、幼单核细胞POX染色多呈细小颗粒弱阳性反应。
（2）过碘酸-雪夫染色的原理和临床意义
[原理] 过碘酸-雪夫（Pexiodic acid-schiff，PAS）染色又称糖原染色。胞浆内存在的糖原或多糖类物质（如黏多糖、黏蛋白、糖蛋白、糖酯等）中的乙二醇基（CHOH-CHOH）经过碘酸（Periodic acid）氧化，转变为二醛基（CHO-CHO），与雪夫（Schiff）试剂中的无色品
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常用血细胞化学染色原理及应用
（1）过氧化物酶染色的原理和临床意义（POX）
[原理] 粒细胞和单核细胞胞浆中含有的过氧化物酶能将底物过氧化氢分解，产生新生态氧，它将四甲基联苯胺氧化为蓝色联苯胺。后者进一步变成黑色化合物，沉积于胞质内。
正常血细胞的染色反应：
1. 粒细胞系---原粒大多数呈阴性反应，有点渴出现少量蓝黑色颗粒。自早幼粒致成熟中性郡城阳性反应，细胞月成熟，阳性越强。中性分叶核强阳性，嗜酸性粒细胞阳性反应最强，其阳性颗粒比中性粗大，有折光性。定位于胞质内。嗜碱性粒细胞呈阴性反应。
2. 单核细胞系-原始单核呈阴性反应，幼稚单核及单核呈弱阳性,阳性颗粒少而细小，均匀分布，有时也可呈阴性反应。
3. 红细胞系、淋巴细胞系、巨核细胞系、浆细胞系---均呈阴性。有的巨噬细胞可呈阳性。
（2）过碘酸-雪夫染色的原理和临床意义（PAS）
[原理] 过碘酸-雪夫又称糖原染色。胞浆内存在的糖原或多糖类物质（如黏多糖、黏蛋白、糖蛋白、糖酯等）中的乙二醇基经过碘酸氧化，转变为二醛基，与雪夫试剂中的无色品红结合，形成紫红色化合物而沉积于胞浆中糖原类物质所存在的部位。该反应称为过碘酸-雪夫（PAS）阳性反应。
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常用血细胞化学染色原理及应用
（1）过氧化物酶染色的原理和临床意义（POX）
[原理] 粒细胞和单核细胞胞浆中含有的过氧化物酶能将底物过氧化氢分解，产生新生态氧，它将四甲基联苯胺氧化为蓝色联苯胺。后者进一步变成黑色化合物，沉积于胞质内。 正常血细胞的染色反应：
1. 粒细胞系---原粒大多数呈阴性反应，有点渴出现少量蓝黑色颗粒。自早幼粒致成熟中性郡城阳性反应，细胞月成熟，阳性越强。中性分叶核强阳性，嗜酸性粒细胞阳性反应最强，其阳性颗粒比中性粗大，有折光性。定位于胞质内。嗜碱性粒细胞呈阴性反应。
2. 单核细胞系-原始单核呈阴性反应，幼稚单核及单核呈弱阳性,阳性颗粒少而细小，均匀分布，有时也可呈阴性反应。
3. 红细胞系、淋巴细胞系、巨核细胞系、浆细胞系---均呈阴性。有的巨噬细胞可呈阳性。
（2）过碘酸-雪夫染色的原理和临床意义（PAS）
[原理] 过碘酸-雪夫又称糖原染色。胞浆内存在的糖原或多糖类物质（如黏多糖、黏蛋白、糖蛋白、糖酯等）中的乙二醇基经过碘酸氧化，转变为二醛基，与雪夫试剂中的无色品红结合，形成紫红色化合物而沉积于胞浆中糖原类物质所存在的部位。该反应称为过碘酸-雪夫（PAS）阳性反应。
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?细胞化学染色检验前言
细胞化学是细胞和化学相结合的一门科学。细胞化学染色是根据化学反应的原理，应用涂片染色的方法，观察细胞的化学成分及其变化的重要方法。在病理情况下，血细胞的化学成分可发生改变。因此，细胞化学染色不仅对研究血细胞的代谢活动、生理功能，而且对生理和病理情况下血细胞的化学成分的变化、各种类型血细胞的鉴别、某些血液病的鉴别诊断、疾病的疗效观察以及发病机制的探讨均有重要意义。研究血细胞的化学物质较多，如各种酶类、脂类、糖元、铁等。下面主要介绍血液学中常用的一些细胞化学染色方法。
瑞氏染色法：
瑞氏染色液的配制：
瑞氏染料（粉）1g
纯甲醇60ml
将染料放在乳钵内加少量甲醇研磨使染料溶解，然后将已溶解得倒入洁净的玻璃瓶内，剩下未溶解的再加少量甲醇研磨，如此继续操作，直到全部染料溶解及用完甲醇为止。制配好的染液保存于温室中一周便可应用。新鲜配制的染液偏碱性，放置后可呈酸性，染液储存愈久染色愈好。
缓冲液的配制及其作用:
1% KH2PO4 (即1g KH2PO4+100ml蒸馏水) 30ml
1% Na2HPO4 20ml
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Hoechst染色:hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合 (主要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色. Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果.hoechst有hoechest33342和hoechst33258两种 hoechsts33258，hoechst33342二者区别不大，但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些，所以一般来说hoechsts33258用于细胞固定后再染色，而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色！
染色步骤
PI (Propidium Iodide碘化丙啶)染色: 是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测. 碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料(红色），它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红.用PI单一染色观测培养细胞，只能表示细胞的坏死情况，而不是凋亡（当然晚期凋亡PI亦可着色）。但是如果您只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡，那么PI单一染色也可以。但是如果您一定要认定细胞的凋亡，那么PI单一染色显然不够！
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课题9： 血细胞化学染色（二）
授课班级：
授课日期：
学 时 数：2学时
一、目的要求：
1. 掌握糖原染色、中性粒细胞碱性磷酸酶染色、铁染色的原理、染色结果与临床应用。
2．熟悉细胞化学染色的实用价值。
二、讲授重点：
1．糖原染色
2．中性粒细胞碱性磷酸酶染色
3．铁染色
三、讲授难点：
细胞化学染色的实用价值。
四、教学方法：
运用多媒体课件，以讲授为主，解释课本中的难点。
五、教学内容概要与学时分配
第四章 血细胞化学染色
（续上）
四、过碘酸-雪夫反应（10分钟）
1．原理
2．染色结果
3．临床意义
五、中性粒细胞碱性磷酸酶染色（30分钟）
（一）钙-钴法
1．原理
2．染色结果
3．临床意义
（二）偶氮偶联法
1．原理
2．染色结果
3．临床意义
六、铁染色（20分钟）
1．原理
2．染色结果
3．临床意义
七、细胞化学染色的实用价值（30分钟）
六、授课内容：
第四章 血细胞化学染色
一、过碘酸-雪夫反应（糖原染色，PAS反应）
（一）实验原理
含有乙二醇基的糖类，在过碘酸的作用下，经氧化而产生双醛基，醛基进而与雪夫液(Schiff液)中的无色品红结合，形成紫红色染料，并沉着于含有糖原的细胞或组织结构上。
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课题7： 血细胞化学染色（一）
授课班级：
授课日期：
学 时 数：2学时
一、目的要求：
1. 了解血细胞化学染色的概念与要求。
2.掌握过氧化物酶染色、酯酶染色的原理、染色结果与临床应用。
3．熟悉苏丹黑B染色临床应用。
二、讲授重点：
1．过氧化物酶染色
2．酯酶染色
三、讲授难点：
酯酶染色的临床应用。
四、教学方法：
运用多媒体课件，以讲授为主，解释课本中的难点。
五、教学内容概要与学时分配
第四章 血细胞化学染色
概述： 1．血细胞化学染色的概念（20分钟）
2．血细胞化学染色要求
3．血细胞化学染色固定方法
4．血细胞化学染色显示方法
一、过氧化物酶染色（30分钟）
（一）四甲基联苯胺法
1．原理
2．染色结果
3．临床意义
（二）改良PEREIRA法
1．原理
2．染色结果
3．临床意义
二、苏丹红B染色（10分钟）
1．原理
2．染色结果
3．临床意义
三、酯酶染色（30分钟）
（一）特异性
1．原理
2．染色结果
3．临床意义
（二）非特异性
1．原理
2．染色结果
3．临床意义
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4血细胞化学染色（1）
一、过氧化物酶（POX）染色。
0， 主要是染色中性粒细胞，如白细胞的各种类。
1， 正常血细胞染色情况：
粒细胞系：原始粒细胞是阴性，自早幼粒到成熟粒细胞都是阳性.
单核细胞，淋巴细胞，BPC，浆细胞，组织细胞等到，因都其细胞内不含有过氧化物酶故为阴性。
应用： 急粒呈阳性。 急单核细胞，急性淋巴细胞等为阴性。（因为只有粒细胞能引起阳性）。
急生早幼粒与急单区别：前者为阳性，后者是阴性。
2， 意义： 活性增高：再障，感染（特别是化脓性感染）、急慢淋。
降低： 放射病、急慢粒，急单，骨髓增生综合症，放射病。
二、过碘酸--雪夫反应：也叫PAS染色。
1，不典型的巨核细胞呈强阳性， 霍奇金细胞（或R—S细胞）则呈弱阳性或阴性。
2，戈谢细胞呈强阳性， 尼曼—匹克细胞则呈弱阳性，并且空泡中心呈阴性。
3，急粒呈强阳性， 急淋呈阴性。
4，巨幼贫呈阴性， 红白血病呈阳性。
二、碱性磷酸酶（NAP、ALP）染色 NAP主要在中性粒细胞上，除巨核细胞呈阳性外，其它细胞都是阴性。 1， 生理性变化：新生儿的NAP活性↑，年龄变大则活性↓，成年人的≤儿童的。
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