天然药物化学实验书-合集-20xx(6300字)

来源:m.fanwen118.com时间:2021.7.19

天然药物化学

实验指导

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目 录

实验一 槐花米中芦丁的提取 实验二 芦丁水解液的纸色谱鉴定 实验三大黄中大黄素的提取 实验四大黄中大黄素的柱色谱提纯 实验五苦参生物碱的薄层鉴定 实验六茶叶中咖啡因的提取

实验一 槐花米中芦丁的提取

芦丁(Rutin)广泛存在于植物界中,现已发现含芦丁的植物至少在70种以上,如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米(为植物Sophora japonica的未开放的花蕾)和荞麦中含量最高,可作为大量提取芦丁的原料。

槐花米为豆科植物槐花的未开放花蕾。味苦性凉,具清热、凉血、止血之功。槐花的主要化学成分为芦丁,又名芸香甙,含量可达12-16%。

芦丁是由槲皮素(Quercetin)3位上的羟基与芸香糖(Rutinose)〔为葡萄糖(Glucose)与鼠李糖(Rhamnose)组成的双糖〕脱水合成的苷。为浅黄色粉末或极细的针状结晶,含有三分子的结晶水,熔点为174~178℃,无水物188~190℃。溶解度:冷水中为1:10000;热水中1:200;冷乙醇1:650;热乙醇1:60;冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯,不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚,溶于碱而呈黄色。

芦丁具有维生素P的作用。可降低毛细管前壁的脆性和调节渗透性,有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性,临床上用作毛细管脆性引起的出血症,并常用作防治高血压病的辅助治疗剂。现在国处也常用芦丁作食品及饮料的染色剂。

一、实验目的

1.通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。

2.掌握黄酮类化合物的主要性质。

二、实验原理

芦丁属黄酮类化合物,分子中有较多酚羟基,具弱酸性,易溶于热碱中,酸化后又析出,因此可以用碱溶酸沉的方法提取芦丁,又利用芦丁在冷水和热水中溶解度相差较大的特性进行重结晶精制。

三、实验材料

槐米、石灰乳、0.4%硼砂水溶液、浓盐酸、广泛pH试纸、棉花等。

四、实验内容

称取槐米30g,在乳钵中研碎后,投入300ml0.4%硼砂溶液的沸水溶液中煮沸2-3分钟,在搅拌下加入石灰乳调pH9,煮沸40分钟(注意添加水,保持原有体积,保持pH8~9),趁热倾出上清液,用棉花过滤。残渣加100ml水,加石灰乳调pH9,煮沸30分钟,趁热用棉花过滤,二次滤液合并。滤液保持在60℃,加浓HCl,调pH2-3,放置过夜,则析出芦丁沉淀。

五、实验说明及注意事项

1、加入饱和石灰水溶液既可达到碱溶液提取芦丁的目的,又可除去槐花米中大量多糖粘液质,更容易过滤。也可直接加入150mL水和1g氢氧化钙粉末,而不必配成饱和溶液。

2、pH值过低会使芦丁形成烊盐而增加了水溶性,降低收率。

六、思考题

1.本实验提取过程中应注意哪些问题?

2、根据这个实验,请总结出用酸碱调节法提取中药活性成分的适用条件及一般原理。

实验二 芦丁水解液的纸色谱鉴定

一、实验目的

1.掌握纸色谱方法。

2.掌握黄酮类化合物的色谱特点。

二、实验原理

芦丁可被稀酸水解,生成槲皮素及葡萄糖、李糖,并能通过纸层析鉴定。

三、实验材料

槐米、石灰乳、0.4%硼砂水溶液、2%的硫酸溶液、浓盐酸、正丁醇、醋酸、氨水、1%的氢氧化钠溶液、1%的三氯化铝乙醇溶液、1%的葡萄糖溶液、1%的鼠李糖溶液、1%芸香苷乙醇溶液、1%槲皮素乙醇溶液、95%乙醇、碳酸钡、广泛pH试纸、中速层析滤纸等。

四、实验内容

(一)芦丁的水解

取芦丁1g,研碎,加2%硫酸水溶液80ml,小火加热,微沸回流30-60min,并及时补充蒸发掉的水分。在加热过程中,开始时溶液呈浑浊状态,约10min后,溶液由浑浊转为澄清,逐渐析出黄色小针状结晶,即水解产物槲皮素,继续加热至结晶物不再增加时为止。抽滤,保留滤液20ml,以检查滤液中的单糖。

(二)糖的纸色谱检识

取上述水解母液10ml小心用Ba(OH)2(大约1-1.5g , 并预先用10ml水调至成乳液)中和至中性,过滤出生成的BaSO4沉淀,滤液用热水浴小心浓缩至小体积1ml备用。取1张圆形滤纸, 用铅笔画出通过圆心的三条直线将滤纸等分为6份,对角点样法两次将样品、葡萄糖、鼠李糖标准品点于距圆心一定(>0.5mm)处, 并将用其它滤纸卷成的滤纸芯通过圆滤纸的圆心,借助滤纸芯的毛细作用用正丁醇-乙酸-水(4:1:5)上层溶液作径向展开。 支持剂:新华层析滤纸(中速、20cmХ7cm)

样品:水解浓缩液

对照品:a. 葡萄糖标准品水溶液b. 鼠李糖标准品水溶液

展开剂:正丁醇:冰醋酸:水(4:1:5上层)

显色:a. 喷苯胺-邻苯二甲酸试剂,于105℃加热10min,显棕色或棕红色斑点 b.喷氨性硝酸银试剂,于100℃左右加热,呈棕褐色斑点。

五、思考题

1、芦丁酸水解时有何现象,如何解释?

2、槲皮素和芦丁纸色谱鉴定时,用BAW(4:1:5)上层和下层展开后,解释两者的相对比移值大小关系?

3、葡萄糖和鼠李糖的纸层析鉴定时,用BAW(4:1:5)上层展开后,何者相对比移值较大,为什么?

实验三 大黄中大黄素的提取

一、实验目的

(1)熟悉蒽醌类成分的提取分离方法

(2)掌握PH梯度提取法的原理和操作技术

二、实验原理

大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。其主要有效成分为大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚等蒽醌类化合物 ,其中大部分为结合的蒽醌,少量为游离的蒽醌。结合的蒽醌类化合物由于其苷元具有酚羟基,故呈弱酸性,能溶于水、乙醇、碳酸氢钠溶液,但在有机溶剂中的溶解度很小。游离的蒽醌易溶于氯仿、乙醚等有机溶剂而不溶于水。其中,大黄酸具有羧基,酸性最强;大黄素具有β-酚羟基,酸性第二;芦荟大黄素连有羟甲基,酸性第三;大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。根据以上化合物的酸度差异,可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。

本实验主要用薄层层析法分离纯化大黄素,其Rf值由大到小分别为大黄酚和大黄素甲醚、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸。

大黄酸:黄色针状结晶mp.321—322℃(升华),不溶于水,能溶于吡啶、碳酸氢钠水溶液,微溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚。

大黄素:橙黄色针状结晶,mp.256—257℃(乙醇或冰醋酸),能升华。其溶解度如下:四氯化碳0.01%、氯仿0.07%、二硫化碳0.009%、乙醚0.14%、苯0.041%。易溶于乙醇,可溶于稀氨水、碳酸钠水溶液,几乎不溶于水。

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大黄酸 R1=H R2=COOH

大黄素 R1=CH3 R2=OH

芦荟大黄素 R1=CH2OH R2=H

大黄素甲醚 R1=CH3 R2=OCH3

大黄酚 R1=CH3 R2=H

三、实验器材

试药:大黄粗粉、20%硫酸溶液、5%碳酸氢钠溶液、5%碳酸钠溶液、盐酸、丙酮、乙酸乙

酯、硅胶CMC-Na板、石油醚、大黄素标准品等

仪器:回流装置一套、烧杯、层析槽、试管、梨形分液漏斗、水浴锅、电热套、旋转蒸发仪

循环水式多用真空泵、抽滤瓶、铁架台等

四、实验内容

大黄素的提取、分离流程图

大黄粗粉30g

天然药物化学实验书合集20xx

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20%H2SO4 150ml

加热1h,抽滤、干燥

滤饼

乙酸乙酯回流提取1h

水层(红色)乙酸乙酯层(弃掉)

HCl

黄色沉淀(粗品)

大黄素结晶

五、具体操作步骤:

1.游离蒽醌的提取

称取大黄粗粉30g,加20%H2SO4水溶液150mL,加热1小时,放冷,抽滤,同时滤饼水洗至近中性(除去H2SO4),于70℃干燥后,置回流装置中,加入乙酸乙酯300 mL回流提取1小时,得到乙酸乙酯提取液。

2.PH梯度萃取分离

(1)将乙酸乙酯提取液加入分液漏斗中,用 5% NaHCO3水溶液萃取三次,经观察乙酸乙酯层颜色变浅及无气泡产生为止。

(2)经5% NaHCO3水溶液萃取后的乙酸乙酯层,继以5% Na2CO3水溶液萃取三次,乙酸乙酯层经薄层检查(标准大黄素作对照),得知已提尽大黄素后,合并三次Na2CO3萃取液,并用HCl酸化,得大黄素沉淀。(注意:加酸时应缓慢加入,以防酸液溢出)。

六、注意事项:

1、游离蒽醌的提取要控制温度,不宜太高

2、PH梯度萃取分离时,要检查是否萃取完全

3、注意碱液浓度及萃取时的静置时间对实验结果的影响。

五、思考题

pH梯度萃取法的原理是什么?如何利用该方法分离大黄中的5种游离羟基蒽醌化合物?

实验四大黄中大黄素的柱色谱提纯

一、实验目的

1、学习硅胶柱色谱的分离原理。

2、学习大黄素柱色谱的操作方法。

二、实验原理

利用混合物中各组分对固定相的吸附能力不同可将大黄素分离出来。

三、实验方法

(一)大黄素提纯

(1)装柱:取一玻璃层析柱,垂直固定在铁架台上,在管的下端垫入少量棉花,装入100~200目硅胶(约1/3高,湿法装柱)。

(2)上样:将样品置于小蒸发皿中,用少量石油醚分散,另加用3倍量硅胶拌和均匀,并于水浴上缓缓蒸去溶剂。然后将含有样品的硅胶装入色谱柱的上端,并盖一圆形滤纸。

(3)洗脱:将色谱柱活塞打开,洗脱剂为石油醚(沸程60-90℃)-乙酸乙酯(15∶1)混合液。

(4)收集:洗脱液25ml一份,分别收集,用硅胶薄层板跟踪检查(被洗脱的成份先后次序为:大黄酚和大黄素甲醚、大黄素、芦荟大黄素等)。合并大黄素部分,回收溶剂至小体积,放置,即可析出结晶,过滤,即得纯品大黄素。

(二)大黄素的薄层色谱检识

薄层板:硅胶CMC-Na板

样品液:自制大黄素溶液

对照品:标准大黄素溶液

展开剂:石油醚-乙酸乙酯(7:3)

显色:观察斑点颜色

四、思考题

大黄中5种游离羟基蒽醌化合物的极性与结构的关系如何?薄层鉴别时常用何类吸附剂?Rf值顺序如何?

实验五苦参生物碱的薄层鉴定

一、实验目的和要求

1、掌握硅胶板的制作方法和注意问题。

2、学习苦参生物碱的薄层鉴定方法。

二、实验原理

中药苦参是豆科植物苦参(SophoraflavescensAit)的干燥根,有清热燥湿、杀虫、利尿之功效。苦参在临床上用于杀虫、治疗痢疾、肝炎、荨麻疹、湿疹、气管炎等。药理实验证明苦参总生物碱有抗心律失常及抗癌活性等。苦参中主要含生物碱和黄酮类成分。苦参中主要生物碱有:苦参碱(1)、氧化苦参碱(2)、槐定(3)、槐果碱(4),结构如图1。氧化苦参碱有抗癌、抗衰老等作用。

利用生物碱易溶于有机溶剂的特点,用氯仿进行提取,再通过薄层色谱对提取物进行鉴定。

三、实验原理

1、苦参生物碱的提取:取10g苦参粗粉,用滤纸包好放入索式提取管中,加入200ml氯仿,在70℃水浴条件下提取约3小时,回收氯仿,得到苦参生物碱的提取液。

2、薄层鉴定

吸附剂:硅胶-CMC

样品:总碱氯仿液

展开剂:氯仿-甲醇-水(15:4:0.5);或氯仿-甲醇(9:2)

显色剂:改良碘化铋钾试剂(甲液:0.85g次硝酸铋溶于10mL冰乙酸中,再加水稀释至40mL;乙液:8g碘化钾溶于20ml水中。临用时,取甲、乙两液各5mL,加冰乙酸20mL,水60mL,摇匀即可。)

四、思考题

1. 简述索氏提取器提取原理及特点。

2. 制备性薄层色谱的特点是什么?

实验六茶叶中咖啡因的提取

一、实验目的

1、 学习从茶叶中提取咖啡因的基本原理和方法, 了解咖啡因的一般性质。

2、掌握用索氏提取器提取有机物的原理和方法。

3、进一步熟悉萃取、蒸馏、升华等基本操作。

二、实验原理

茶叶中含有多种生物碱,咖啡因是茶叶中主要的生物碱,对中枢神经具有兴奋作用,质量分数约为1%~5%。茶叶中还含有少量茶碱、可可碱、茶多酚、有机酸、蛋白质、色素和纤维素等成分。咖啡因的化学名称是1,3,7-三甲基-2,6-二氧嘌呤,其结构式如下:

含结晶水的咖啡碱为白色针状结晶粉末,味苦。能溶于水、乙醇、丙酮、氯仿等。微溶于石油醚,在100℃时失去结晶水,开始升华。120℃时升华显著,178℃以上升华加快。无水咖啡碱的熔点为238℃。

从茶叶中提取咖啡因,是用适当的溶剂(氯仿、乙醇、苯等)在脂肪提取器中连续抽提,浓缩得粗咖啡因。粗咖啡因中还含有一些其它的生物碱和杂质,可利用升华进一步提纯。

三、实验试剂

茶叶 95%乙醇生石灰

四、实验步骤和实验流程

1、提取

称取10g茶叶,研细后,放入Soxhlet提取器的滤纸套筒中,在圆底烧瓶中加入80 ml 95%乙醇,用水浴加热,连续提取约2-3h直到提取液为浅色后,停止加热。稍冷,改成蒸馏装置,回收提取液中的大部分乙醇。

2、升华

趁热将瓶中的粗提液倾人蒸发皿中,拌入4g生石灰粉,在蒸气浴上蒸干,其间应不断搅拌,并压碎块状物。将口径合适的玻璃漏斗罩在隔以刺有许多小孔滤纸的蒸发皿上,用砂浴小心加热升华。控制砂浴温度在220℃左右。当滤纸上出现许多白色毛状结晶时,停止加热,自然冷却至100

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℃左右。小心取下漏斗,揭开滤纸,用刮刀将纸上和器皿周围的咖啡因

刮下。残渣经拌和后用较大的火再加热片刻,使升华完全。合并两次收集的咖啡因,产量约0.1g。

五、实验装置

Soxhlet提取装置 升华装置

六、操作重点及注意事项

1、滤纸套筒大小要合适,以既能紧贴器壁,又能方便取放为宜,其高度不得超过虹吸管;滤纸包茶叶时要严密,茶叶末不能掉出滤纸套筒,纸套上面折成凹形。

2、瓶中乙醇不可蒸得太干,否则残液很粘,转移时损失较大。

3、生石灰起吸水和中和作用,以除去部分酸性杂质。

4、在萃取回流充分的情况下,升华操作是实验成败的关键。升华过程中,始终都需用小火间接加热。如温度太高,会使产物发黄。注意温度计应放在合适的位置,使正确反映出升华的温度。

5、实验完毕,关好水电。

七、问题讨论

1、你怎样理解索氏提取器的提取高效率?

2、从茶叶中提取出的粗咖啡因有绿色光泽,为什么?

八、主要试剂及产品的物理常数:(文献值)

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附录:

如何铺硅胶板

1. CMC-Na溶液的配置:一般其浓度为0.3~0.5%,根据自己经验而定(我习惯用0.4%的)。具体方法如下:先将预用的水加热至60~70℃,然后加入CMC-Na,边加边搅拌,使之溶解,即得。

2. 与硅胶混合:CMC-Na溶液与硅胶的比例为3:1。具体方法如下:先将CMC-Na溶液倒入自动搅拌器或研钵中,然后加入硅胶,搅匀即可。若是在研钵中研磨,按一个方向研磨,自下而上,然后自上而下,以赶尽气泡为佳。

3. 铺板:但此过程中最关键的是板子边缘铺得好坏,手动铺板一定要将玻璃板边缘硅胶涂匀(我习惯用两头掂法,即板下方的中间垫一物体,两头悬空,两手均匀掂动)。而机械铺板要注意板与板之间平整性,或者由高到低排列。

4. 晾干:自然晾干。

5. 活化:将晾干的板子在105℃烘箱中干燥30min,取出,放入干燥器中,备用。


第二篇:天然药物化学实验指导书 4500字

天然药物化学实验指导书

制药工程专业

生物科学与工程学院

20xx年1月

天然药物化学实验须知

一、每次实验以前,必须预习本实验内容,了解其操作程序和理论要点,切勿盲目进行实验,实验时须准备记录薄一本,随时正确记录每一实验应记的项目。如原料用量,实验时发生的现象,反应结果,产品数量、熔点、沸点、产品纯度等,以作写正式报告的依据。

二、实验所得产品,如不供下一实验用,应交给指导老师,并注明品名、数量、组别、姓名、日期。

三、实验规则

1.实验时不能阅读与本实验无关的书籍,不要高声谈笑,也不能擅自离开,严禁在实验室内吸烟及吃东西。

2.实验室要经常保持整齐清洁,桌上不要乱放无用的仪器与药品。火柴杆、废纸等不要乱抛在地上、废酸、碱液应倒入污水缸中,易燃烧及易挥发的废液应倒入水槽中,并立即用水冲掉。

3.药品、仪器都是国家财产,须节约爱护使用,若有损坏,应填写仪器损坏单,报告指导教师,及时领取,并酌情赔偿。

4.试剂、药品、公用用具,使用后立即放回原处,不可乱放,并应注意不可盖错试剂瓶塞,以免污染试剂。

5.装有易燃性液体的瓶子,不得放在灯火近旁。

6.加热乙醇、乙醚、石油醚、苯等易挥发可燃的液体时,应使用装有冷凝管的烧瓶,在水浴上进行加热,加热前应放入沸石1—2粒,或一端封死的毛细管,防止爆沸冲击,若在加热时未放沸石则应冷却后再加,不可热时追加,添加溶剂时应离开火源,稍冷后再添,并应重新加入沸石。

7.实验过程中,万一遇见溶液着火,应立即用石棉布或其他物品把它盖上,使其隔绝空气而熄灭。

8.实验完毕后,应将用过的仪器洗刷洁净放好,并应指定值班人员将实验室打扫干净,污水缸的废液拿到室外适当地方处理埋掉,离开实验室时,应检查门、窗、水电是否关好。

9.严禁将实验室内的仪器、药品携带室外。

以上须知清严格遵照执行。

实验一 大黄中蒽醌类化合物的预试

大黄为蓼科大黄属植物掌叶大黄(Rheum Palmatum L),唐古特大黄(R.tanguticum Maxim.)或药用大黄(R.officinale Baill)的根茎,主要含蒽醌类化合物,有泻下和抗菌作用,为常用中药之一。

一、实验目的

l、掌握梯度pH萃取法和提取分离大黄中各种蒽醌甙元的原理及实验方法。

2、了解蒽醌类化合物的颜色反应及色谱检查方法。

二、实验原理

1、大黄中主要成分的物理性质:

1)、大黄酸(Rhein)mp321℃

2)、大黄素(Emodin)mp254~6℃

3)、芦荟大黄素(Aloe-emodin)mp223~5℃

4)、大黄酚(Chrysophanol)mp193~6℃

5)、大黄素甲醚(Physcion)mp203~7℃

其甙有大黄酸葡萄糖甙mp 266℃;大黄素葡萄糖甙mp 189℃;芦荟大黄素葡萄糖mp 239℃;大黄酚葡萄糖甙mp245℃;大黄素甲醚葡萄糖甙mp 235℃;番泻甙A、B、C、D、E等。

2.实验原理

本实验是根据大黄中的蒽醌类甙元成分能溶于氯仿的性质,采用氯仿提取,又利用羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同,用pH梯度法进行分离。具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸氢钠溶液;具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸钠溶液,只具有α位酚羟基的蒽醌,酸性弱,只溶于氢氧化钠溶液。通过蒽醌类化合物的颜色反应及色谱检查。

三、实验样品、器材及试剂

1、 样品:大黄

标准品:大黄酸,大黄素,芦荟大黄素,大黄酚,大黄素甲醚

2、器材:恒温水浴锅,1000毫升园底烧瓶,各种烧杯,冷凝回流装置,500mL分液漏斗,抽滤瓶,旋转蒸发仪,硅胶G薄层板(5×10cm),层析缸,纱布,PH试纸,紫外灯。

3、试剂:氯仿、20%H2SO4、5%NaHCO3,5%Na2CO3,0.25%NaOH ,5%NaOH,甲醇,乙醇,乙酸乙酯,丙酮,冰醋酸,醋酸镁。

四、实验内容

(一)大黄中蒽醌甙元的提取分离

1、大黄中蒽醌甙元的提取:取大黄粗粉50克置于1000毫升园底烧瓶中,加20%H2SO4 30毫升,氯仿200毫升,水浴回流一小时,稍冷后过滤,滤出浸液,药渣再加20%H2SO4 30毫升,氯仿200毫升,水浴回流45分钟,滤出浸液,合并所得浸液,残渣弃去,氯仿提取液于分液漏斗中,分出酸水层,得氯仿提取液。回收氯仿至剩余氯仿约l00毫升,用蒸馏水洗至pH6。

2、大黄酸的分离:将含有总蒽醌苷元的氯仿液100ml于500m1分液漏斗中,加5%NaHCO3溶液150m1充分振摇(注意防止乳化,下同),静置至彻底分层,分出碱水层置250m1烧杯中,在搅拌下滴加20%盐酸至pH3,待沉淀析出完全后,过滤,沉淀干燥后,加冰醋酸②10ml加热溶解,趁热过滤,滤液放置析晶,过滤,用少量冰醋酸淋洗结晶,得黄色针晶为大黄酸。

3、大黄素的分离:5%NaHCO3溶液萃取过的氯仿层,再加5%碳酸钠溶液300ml

振摇萃取,静置至彻底分层后,分出碱水层,在搅拌下用20%盐酸酸化至pH3,析出棕黄色沉淀,抽滤,水洗沉淀物至洗出液呈中性,沉淀经干燥后,用15ml丙酮热溶,趁热过滤,滤液静置,析出橙色针晶,过滤后,用少量丙酮淋洗结晶,得大黄素。

4、芦荟大黄素,大黄素甲醚和大黄酚混合物的分离:经Na2CO3提取过的氯仿液,再用5%NaOH溶液提取四次(80、60、40、40毫升),合并NaOH液,用盐酸中和至不再析出沉淀,析出黄色沉淀,抽滤,水洗,70℃烘干,称重。

5、芦荟大黄素的分离:4得沉淀物溶于少量氯仿(约30毫升),用0.25%NaOH溶液提取三次(20、10、10毫升),合并提取液用盐酸中和至中性,析

出棕黄色沉淀,抽滤,70℃烘干,用少量乙酸乙酯重结晶,析出棕黄色针晶为芦荟大黄素,抽滤,烘干,称重。

6、大黄素甲醚和大黄酚混合物的分离:经0.25%NaOH提取过的氯仿液,再用5%NaOH提取三次(20、10、10毫升),合并提取液,用盐酸中和至中性,析出黄色沉淀,抽滤。水洗,70℃烘干,用少量乙酸乙酯重结晶,得大黄素甲醚和大黄酚混合物,抽滤,烘干,称重。

(二)颜色反应及色谱检查

l、取以上各产物少量,分别于试管中,加5%NaOH溶液数滴,观察颜色变化。

2、取以上各产物少量,分别于试管中加浓H2SO4数滴,观察颜色变化。

3、取以上各产物少量,分别于试管中,加少量甲醇溶解,再滴加醋酸镁的甲醇溶液数滴,观察颜色变化。

4、薄层色谱:

吸附剂:硅胶G板,105℃,活化二小时。

展开剂:氯仿—乙酸乙酯—醋酸(4:1:0.2)

检品:各产物的乙醇液

显色:可见光下观察色斑,紫外灯下观察萤光斑点。

四、实验说明及注意事项

1、大黄中蒽醌的存在形式以结合状态为主,游离状态的仅占小部分,为了提高游离蒽醌的得率,在提取过程中采取酸水解和萃取相结合的方法。

2、两相萃取时,不可猛力振摇,只能轻轻旋转摇动,时间可长一些,以免造成严重乳化现象而影响分层,氯仿液用水洗时,尤其易乳化,可加入氯化钠盐析,使两层分离。

五、实验报告

六、思考题

1.大黄中5种羟基蒽醌化合物的酸性和极性大小应如何排列?为什么?

2.pH梯度法的原理是什么?适用于哪些中药成分的分离?

3.大黄蒽醌苷元的纸层析鉴别用什么作展开剂和显色剂?

4.蒽醌类化合物的薄层色谱分析用什么作吸附剂,展开剂和显色剂?

5.蒽醌类与醋酸镁显色反应的必要条件是什么?其颜色反应与羟基所在的位置有何关系?

实验二 从黄连中提取、分离黄连素

黄连为毛莨科植物黄连Coptis chinemsis Franeh、三角叶黄连Coptis deltoidea C.Y.cheng et I-Isiao或云连Coptis tecta wal1.的干燥根茎,为清热类药物,味苦、性寒,具有清热燥湿、泻火解毒等功效。其主要成分是黄连素(berberine,Ber),又名小檗碱。属异喹啉类生物碱,化学结构有分子型和离子型两种,其结构中的季铵氮为整个分子的碱性中心,可以形成盐酸盐和硫酸盐。黄连素在临床中一直作为非处方药用于治疗腹泻,一种常用的抗菌药,对菌痢、肠炎、上呼吸道感染等疾病有良好的疗效。现代药理学研究证实,黄连素具有显著的抗心力衰竭、抗心律失常、降低胆固醇、抑制血管平滑肌增殖、改善胰岛素抵抗、抗血小板、抗炎等作用,故临床应用较多。。

一、实验目的

l、了解小檗碱,小檗胺的结构与性质,掌握提取分离方法。

2、了解小檗碱,小檗胺的鉴识反应及薄层色谱鉴别。

二、实验原理

黄连素,又名小檗碱(Berberine)

黄色针晶,能缓缓溶于水(1:20)、乙醇(1:100),易溶于热水及热乙醇,难溶于乙醚、石油醚、苯及氯仿。

本实验的提取分离原理是:小檗碱的硫酸盐易溶于水,小檗碱的盐酸盐难溶于水,因此,将植物原料用稀H2SO4溶液浸泡,然后用石灰乳调至pHl2左右,小檗碱游离而溶于水,并用盐酸调pH8左右时,小檗碱成难溶性的氯化小檗碱而析出。

三、 验样品、器材及试剂

1、样品:黄连

标准品:黄连素(小檗碱)

2、器材: 1000毫升三角瓶,各种烧杯,纱布,抽滤瓶,硅胶G薄层板(5×10cm),层析缸,PH试纸。

3、试剂:碘,碘化铋钾、0.2%H2SO4,30%HCl,甲醇,乙醇,乙酸乙酯,醋酸,醋酸镁,石灰乳,NaCl,氨水,蒸馏水。

三、实验内容

(一)小檗碱的提取分离

取黄连粗粉100克,置1000毫升三角瓶内,加700毫升0.2%(V/V)的H2SO4溶液浸泡24小时,纱布过滤,再用400毫升酸水同法提取一次,合并两次滤液于大烧杯内,搅拌下加人石灰乳至pHl2,静置30分钟,抽滤,滤液中加入计算量(8%W/V)的NaCl,静置,待沉淀完全后,滴加浓HCl至PH8~

8.5,于80℃热水中保温半小时,静置,抽滤,所得沉淀于60℃以下干燥,称重,置100毫升烧杯中,加入30倍量蒸馏水,加热至沸,趁热抽滤,滤液内含小檗碱,沉淀为小檗胺的粗品。

(二)精制:趁热向上述滤液中滴加浓盐酸,调pH至2,静置氯化小檗碱沉淀析出,抽滤,60℃以上干燥,称重,计算得率(不得低于0.2%)

(三)薄层色谱

层析板:硅胶G板,110℃,活化半小时。

展开剂:氯仿—甲醇—氨水(15:4:0.5)

样品:氯化小檗碱乙醇液

氯化小檗碱标准品液

显色:碘蒸汽或改良碘化铋钾

四、实验说明及注意事项:

1、用硫酸浸泡时,硫酸的浓度以0.2%为宜,此时生成的硫酸小檗碱在水中溶解度较大,若加入过量,小檗碱就形成酸式硫酸盐,水中溶解度就降低(1:100),影响小檗碱的提取量。

2、冷浸时间不宜过长,次数也不宜过多,否则浸出的杂质量也相对增加,冷浸一般24小时,可浸出92%的成分,所以浸出两次即可。

3、在pH~8.5时小檗胺沉淀较完全,但不易凝聚,故80℃保温,使凝聚而沉降。

4、小檗碱精制时调pH至2,是为了使小檗胺等叔胺型生物碱留在溶液中除

去,以便得到较纯的小檗碱,操作时若溶液己冷却析出结晶,就应加热成澄明溶液再用盐酸调pH2。

五、实验报告

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