北京市自然科学基金申请书

（青年基金项目）

北京市自然科学基金委员会办公室制

二○一四年

填表说明

一、填报申请书前，请登陆北京市自然科学基金网站（http://www.bjnsf.org），查阅市自然科学基金的有关管理规定。请认真填写申请书各项内容，填写时须注意科学严谨、实事求是、表达明确。外来语应用中文和英文同时表达，第一次出现的缩写词，须注出全称。

二、申请书为A4纸版面，申请书正文要求宋体5号字，双面打印，于左侧装订成册，一式三份（至少一份为原件），报送北京市自然科学基金委员会办公室。

三、简表说明

1、 简表内容：采用国家公布的标准简化字填写。

2、 项目名称：要确切反映研究内容，字数最多不超过30字（60字符）。

3、 单位代码是申请单位在北京市自然科学基金委员会办公室注册并经确认的代码；项目指南代码见项目指南；其余代码使用北京市自然科学基金委员会办公室公布的国家自然科学基金委员会的学科分类目录及代码。

4、 依托单位：须按单位公章填写全称。

5、 依托实验室：系指研究项目将利用的实验室，仅填写国家重点实验室或部、委、北京市批准的部门开放实验室。

6、 申请金额：用阿拉伯数字表示，以万元为单位，小数点后取两位。

7、 起止年月：起始时间为申请的次年1月，项目执行期限最长不超过3年。

8、 参加单位数：指研究项目组成员所在单位数，包括主持单位和合作单位（合作者所在单位），以阿拉伯数字表示。合作单位系指项目进行过程中，在研究内容、方法及目标等方面，进行科技互补和实质性合作的单位，不包括一般的技术性协作单位。

9、 项目组主要成员：指在项目组内对学术思想、研究方案的制订、理论分析及项目的完成起重要作用的研究人员。申请者和参加项目组成员每人须在申请书上亲自签名。

一、简表

二、研究项目组主要成员概况（含申请者）

三、项目经费预算表

单位：万元 

四、申请书正文

参照以下提纲撰写，要求内容详实、清晰，层次分明，标题突出（题目用黑体四号字，正文用宋体五号字）。

（一）立项依据（不超过5000字）

1、研究意义

2、国内外研究现状分析及存在问题

3、应用方向或应用前景

对于基础研究，着重结合国际科学研究发展趋势，论述其可能的应用方向；对于应用基础研究，着重结合学科前沿，围绕首都经济建设和社会发展的重要科技问题，论述其应用前景。

4、参考文献

参考文献格式： 论文：作者，题目，刊名，年份，卷（期），起止页码；

专著：作者，书名，出版者，年份。

（二）研究内容（不超过1500字）

1、研究目标

列举出项目实施的总体目标，目标一般不超过3个。

2、主要研究内容

此部分是专家评审的重要依据，请详细阐述。

3、拟解决的关键问题

指该项目研究的瓶颈问题，一般对应项目目标，请详细阐述如何解决这些关键问题。

（三）项目创新点（不超过500字）

可以从以下方面对项目创新点进行阐述：

按创新程度来划分，从发现和解决问题的原始性创新和跟踪性创新两方面阐述创新点。

按创新方式来划分，从理论创新、方法创新和技术创新等方面阐述创新点。

（四）研究方案（不超过1000字）

1、研究方法及实验手段

详细说明在项目实施过程中将采用何种研究方法和实验手段，以说明该研究是能够实现的。

2、技术路线及关键技术

以项目实施步骤的形式表达研究项目的技术路线，并予以文字说明，指出其中的关键技术、研究步骤及相应的结果提交形式。

3、可行性分析

对此研究方案的可行性进行分析。

（五）预期研究结果及可考核的验收指标（不超过800字）

1、研究结果指标

（1）专著、论文

明确说明预期发表专著、期刊论文、会议论文（国际、国内）的数量及检索情况（SCI、SSCI、EI、ISTP）。

（2）专利、软件

明确说明专利（国际、国内；申请、批准）的数量及类别、软件的类型及数量。

（3）样品、样机

明确说明预期的样品、样机的主要技术参数和技术指标，并与国内外水平进行对比。

（4）其他

明确说明提交的研究报告等其他预期结果的数量。

2、人才培养指标

（1）研究生培养

明确说明预期培养的研究生（博士后出站、博士生毕业、硕士生毕业）类型及数量。

（2）职称晋升

明确说明预期培养的人才（晋升高级职称、晋升副高级职称）类型及数量。

（六）年度目标和年度研究计划（不超过1000字）

第  年度 （20   年）

1、年度目标

分年度列举出项目实施目标，每个目标用一句话归纳，然后用一段话详细阐述。

2、年度研究计划

详细论述年度研究计划，并说明各年度研究计划之间的联系。

3、年度考核指标

明确各个年度的考核指标和结果提交形式（专著、论文、专利、软件、样品、样机及其他）。

（七）研究基础（不超过1000字）

1、项目申请者所在单位工作基础

列出项目申请者所在单位与本项目相关的研究工作基础和已取得的成果（仅限于项目成员）。

2、合作单位工作基础

列出合作单位与本项目相关的研究工作基础和已取得的成果（仅限于项目成员）。

3、工作条件

列出目前已具备的实验条件（需要进行动物实验者，应注明动物实验室级别）；列出目前尚缺少的实验条件及拟解决途径。

（八）项目成员简介（不超过1000字）

1、列出申请者的学习和研究工作简历，近5年来取得的主要科研成果，获得的学术奖励情况。申请者为近3年（含申请当年）博士或硕士获得者的须注明学位论文名称、导师姓名与工作单位。

2、列出项目组主要成员（3-5人）的学习和研究工作简历，近5年来取得的主要研究成果，获得的学术奖励情况及在本项目中承担的任务。

五、申请者作为负责人正在实施及已完成的国家自然科学基金项目、北京市科技计划课题的情况

六、申请者保证

七、单位审查意见

附件一：推荐意见

不具备高级专业技术职务或博士学位的申请者，须有两名具有高级专业技术职务的同行专家推荐。推荐时，请认真负责地介绍申请者及项目组成员的业务基础、研究能力、科研态度及研究条件等。项目组成员不能作为推荐者。

附件二：导师签字函件

正在攻读硕士或博士学位的科研人员（市基金办接收项目申请截止日期前尚未获得学位）不得作为申请者申请各类项目，但在职人员经过导师同意可以通过受聘依托单位申请青年基金项目，同时应提供导师同意其申请项目并由导师签字的函件。函件中应说明所申请项目与其学位论文的关系，以及承担项目后的工作时间和条件保证等。

附件三：相关证明材料

凡在研究过程中按国家有关规定应履行相关程序的，需提供相关证明材料。（例如：涉及人的生物医学研究，由于研究对象的特殊性，请申请人严格遵守医学伦理和患者知情同意等有关规定，申请时须提供伦理委员会审查意见等书面材料）

 

第二篇：广东省自然科学基金申请书模板

顺 序 号

类 别

申报学科代码10xxxxxxxxxxxx55博士启动项目C010305

自由申请

广东省自然科学基金重　　点

博士启动项目

申 请 书

项 目 名 称: 3-羟基丁酸及其衍生物对痴呆大鼠记忆能力的影响研究申 请 者： 邹湘辉

所 在 单 位：韩山师范学院

邮 政 编 码：521041

通 讯 地 址：广东省韩山师范学院生物系

申请者电话： 136xxxxxxxx

传 真：0768-2525151

电 子 邮 件：zxh11043@gmail.com

申 请 日 期：20xx年03月30日

广 东 省 自 然 科 学 基 金 管 理 委 员 会

二０一０ 年 制

填 报 说 明

一、填写申请书前 ，请先查阅广东省自然科学基金有关项目请办法及规定。申请书各项内容 ，应实事求是，逐条认真填写。表达要明确、严谨，字迹清晰易辨。外来语要同时用原文和中文表达 。第一次出现的缩写词 ，须注出全称。

二、申请书请用A4复印纸，于左侧装订成册。第三页起各栏空格不够时，请自行加页 。一式一份（原件），由所在单位审查签署意见后，按申报通知送广东省自然科学基金管理委员会办公室 。

三、封面右上角"顺序号"由各单位根据广东省自然科学基金管理委员会办公室的要求填写；"项目类别"栏由申请者填写, 申请"省自然科学基金自由申请项目"此栏为"A", "省自然科学基金重点项目"为"C"，"省自然科学基金博士启动项目"为"D"。

-1-

一、简表

名称

A. 自由申请项目类别C. 重点项目

D．博士启动项目

研究项目情况

3-羟基丁酸及其衍生物对痴呆大鼠记忆能力的影响研究

博士启动项目动物行为学生物材料3.00万元

实验室全称

研究期限

研究类型

A. 基础研究B. 应用基础研究

代码1代码220xx年10月至

基础研究C010305C010515

20xx年10月

申报学科

名称1名称2

申请金额所用实验室

实验室类别

A. 国家重点　B. 部门开放C. 省重点实验室

实验室编号

名称代码

汉族1

姓名邹湘辉

讲师013

性别

A. 男B. 女

男43xxxxxxxxxxxx国(地区)名

代码韩山师范学院韩山师范学院生物系

中国156

申

专业名称请

技术者

职务代码情况

所在单位

全称系(所)姓名邹海鹰杨东娟

主要成员（不项

含目

申组

请

情况

者）

王忠合林丽云徐文菊周小朋

A.博士学位B.硕士

C.学士

博士

最终学位授予国

A. 院士　　　　其

B. 博士生导师　他

C. 在站博士后　身份

D. 留学回国人员

身份证号码430290197310

231xxxxxxxxxxxx12

13232X430421197607

026xxxxxxxxxxxx01

07004X420623198308

1680xxxxxxxxxxxx8

232033

专业技术职务

讲师讲师讲师助教助教助教

所在单位全称及代码韩山师范学院 52104101韩山师范学院 52104101韩山师范学院 52104101韩山师范学院 52104101韩山师范学院 52104101韩山师范学院 52104101

项目中的分工记忆相关蛋白表

达检测动物模型的建立

和评估神经递质的检测记忆相关蛋白表

达检测大鼠行为学实验大鼠行为学实验

签章

人员统计

总人数7

高级0

中级4

初级3

在站博士后

在读博士生

在读硕士生

参加单位数

-2-

各种压力及人口老龄化等诸多因素造成人的认知和精神疾病越来越多，这些疾病是由于神经系统的老化或者损伤而导致学习和记忆能力的降低。到目前为止，还没有特别有效的药物来阻止和延缓认知障碍疾病的发生，改善应激反应及大脑退化对学习记忆和情感的影响。有趣的是，本课题组目前进行了3-羟基丁酸甲酯对小鼠的学习记忆行为影响的研究，我们发现该物质提高了小鼠在Morris水迷宫中的学习记忆行为表现以及脑组织中学习记忆相关蛋白的表达。为此，本项目拟在此基础之上全面评估3-羟基丁酸及衍生手性小分子对痴呆大鼠学习记忆行为的研 摘影响，并进一步分析阐明其生物学机制。预计成果将有助于了解人类学习记忆障究 要碍的发病因素，揭示这些手性单体小分子对神经系统的生理作用机制，为寻找认内 知障碍疾病的防疫与治疗以及提高记忆力药物开发提供新的思路和选择。容

和

意

义

（主题词应反映研究内容，主题词数量不多于三个，各主题词之间以逗号分隔）

主3-羟基丁酸，痴呆大鼠，学习记忆

简 表 填 写 要 求

一、简表内容必须逐项认真填写，采用国家公布的标准简化汉字。简表中所有代码，以国家自然科学基金规定的代码为准填写。

二、凡选择性栏目，将相应提示符Ａ、Ｂ等之一填入该栏的右下角。

三、部分栏目填写要求：

项目名称──应确切反映研究内容和范围，最多不超过２５个汉字（包括标点符号）。

基础研究──指以认识自然现象、探索自然规律为目的，不直接考虑应用目标的研究活动。 应用基础研究──指有广泛应用前景,但以获取新原理、新知识、新方法为主要目的的研究。 申报学科──申请项目所属的最基础学科。 如涉及多学科可填写两个，先填写主学科。 申请金额──以万元为单位，用阿拉伯数字表示。

研究期限──从申请的当年１0月算起。终止时间为完成时间的１0月。

所用实验室──系指研究项目将利用的实验室。

留学回国人员--指在国外取得学位或访问学者一年以上的回国人员。

所在单位名称及代码──按单位公章填写全称。首次申请广东省自然科学基金的单位，尚未编入单位代码，其代码应向广东省自然科学基金管理委员会办公室申请后填写。

参加单位数──指研究项目组主要成员所在单位数，包括主持单位和合作单位(合作者所在单位)，以阿拉伯数字表示。

项目组主要成员──指在项目组内对学术思想、技术路线的制订与理论分析及对项目的完成起重要作用的人员，本人应在申请书上亲自签名。

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二、立论依据

请按以下提纲填写：

1、研究意义（对基础研究，着重结合国际科学发展趋势，论述项目的科学意义；对应用基础研究，着重结合学科

前沿、围绕国民经济和社会发展中的重要科技问题，论述其应用前景）

2、国内外研究现状

3、本项目的创新之处

4、主要参考文献及出处（格式：论文--作者．题目．刊名．年份．卷(期)．页码／专著--作者．书名．出版者．

年份）1、研究意义

当今社会的生活与工作节奏日益加快，各种生活和工作压力对人们的大脑产生持续不断的刺激，形成各种不同的应激反应，导致人们认知障碍类疾病逐渐增多，表现为记忆损害，注意力障碍，推理和抽象思维能力减退，语言运用能力下降，视觉空间功能障碍等症状。另一方面随着人类老龄化社会进程的加快，老年人认知障碍逐年增多，造成认知障碍的原因很多，主要为大脑退化的老年失智症，又称为阿兹海默氏症（Alzheimer's disease，简称AD），这是一种原因不明的进行性、神经退化性疾病，以大脑皮质功能的退化最为明显，主要症状为记忆力减退，初期可能只是轻微的忘记表现为轻度认知功能障碍，但记忆力的减退可能逐渐严重，在判断能力、抽象思考及计算能力上均有障碍。3-羟基丁酸是一种产生于肝脏的酮体成分，动物处于长期的饥饿或疾病状态时，3-羟基丁酸能够透过血脑屏障进入神经细胞转变为乙酰辅酶A，为大脑提供重要的能源。大脑中的学习和记忆是一个非常复杂的过程，参与这个过程中的细胞对能源的需求十分苛刻，当向大脑供应一些代谢产物的时候会促进动物的学习和记忆能力。阿兹海默氏症等认知障碍类疾病的预防与治疗已获得人们的普遍关注，人们致力于这些认知疾病的发病机制以及治疗这些疾病的药物开发。但是到目前为止，还没有特别有效的药物来对抗应激反应和大脑退化的不良作用，阻止和延缓认知障碍疾病的发生，改善应激反应及大脑退化对学习记忆和情感的影响。因此对3-羟基丁酸及其类似物作为安全有效的延缓和阻止认知障碍疾病发生药物的研究具有非常重要的经济效益和社会效益，另外研究3-羟基丁酸及其类似物对抗应激反应和预防大脑退化的机制具有重要的理论和实践意义。

2、国内外研究现状

学习与记忆相关认知疾病极其治疗

目前有许多疾病会降低患者的学习和记忆能力，从而造成记忆障碍或衰退，对人们的日常生活带来极大的影响，这类疾病包括：脑部各种变性病、脑外伤和拳击手痴呆；皮质下动脉硬化性脑病、脑梗塞和脑出血等脑血管病后遗症；脑炎后遗症；一氧化碳中毒等脑缺氧后遗症；营养缺乏性脑病[1]；酒精中毒和生化代谢障碍性脑病；精神疾病患者等。

这些疾病中以发生于老年和老年前期的阿尔茨海默氏病最为严重，该病由德国神经科医生 Alois Alzheimer首先发现，是一种进行性认知障碍和记忆力损坏为主的中枢神经系统退行性疾病[2]，随着年龄的增长而增加，据统计65 岁左右的老人中 AD 发病率为 4~12%，85 岁以上的老年人中发病率为 20~40%[3]。记忆障碍或者衰退是一个复杂的病理过程，凡是引起额叶、颞叶、海马回、丘脑、扣带回、间脑和中脑网状结构等脑部异常均会降低患者的记忆力[4]。目前尚无有效的方法治疗记忆障碍，虽然卵磷脂食品、神经递质的前体、利他林、双氢麦角碱类的扩血管药等药物有一定的疗效，同时记忆功能的训练也有一定帮助[5]，但是还不能达到人们期待得理想效果。随着人们生活水平的改善和平均寿命的增加，世界上老年人口日益增多，社会也随之进入老龄化社会，因此对这些疾病及其治疗的研究显得至关重要。同时人们在学习任何科学知识时，都离不开记忆，而学习的最大障碍莫过于记忆力差。增强记忆力能够迅速地、准确地、持久地掌握学习过的知识和技能，也能比较好理解、运用这些知识和技能。

延缓和阻止认知障碍疾病相关药物的开发情况

在遗传学家和神经科学家对人类基因、大脑结构和神经化学物质的研究取得突破的基础上，通过某一措施人为提高智力来延缓和阻止认知障碍疾病将成为可能。目前，世界上有不少“提高记忆力药物”正处于临床实验中，一些能改善记忆的认知增强剂已经在市场上出现，这些认知增强剂也被称作为“聪明药”，如由Warner

Lambert公司研制的中枢神经性可逆AchE抑制剂他克林[6]；同时一些供记忆障碍患者使用的药物，经临床实践证明也可以增强健康人群的智力，很多人服用这类药物来改善因衰老而引起的健忘，如加兰他敏[7]和美曲磷脂[8]；利他林一类治疗精神疾病的药物也可用于增强某些有规律性的大脑功能，它能够提高患好动症儿童的学习成绩，对正常儿童也有类似的效果[9]。

美国哥伦比亚大学教授埃里克.坎德尔（Eric Kandel）是记忆增强剂研究的先行者，他通过对海蛞蝓的研究，找到记忆的奥秘，而获得诺贝尔奖[10]。他发现学习通过若干方式发生在两个神经元之间的突触上：当神经细胞内的CREB蛋白（cAMP response element binding protein，AMP反应要素结合蛋白）被激活时，该突触便被强化，并且CREB蛋白也在果蝇和大鼠的记忆形成中发挥作用。在一个神经元自然地增加CREB之前，神经细胞膜上的NMDA（N-methyl-D-aspartate，N-甲基-D-门冬氨酸）通道必须打开，让正离子能通过NMDA通道流入该神经细胞，然后这些正离子触发一连串导致CREB激活的级联反应，增加大鼠海马区中NMDA受体的数量，会导致大鼠在一种空间记忆实验中取得更好的成绩[11]。

在记忆增强药物研制成功之前，还有许多困难，比如在动物实验中取得成功的记忆增强药物，在临床实验中则没有取得理想的效果[9]；另外记忆增强药物可能会产生一些有害的副作用[12]。虽然经过一些动物实验研究，发现某些药物能改善记忆或很好地完成一些特殊任务，但是这些药物能否对人类产生作用，则还需要人体临床实验来证明。

-4-

3-羟基脂肪酸的生理功能

聚羟基脂肪酸酯（Polyhydroxyalkanoates，简称PHA）的结构单元具有多样性，目前已经发现PHA聚酯有至少125种不同的单体结构，并且新的单体被不断地发现出来；碳链长度在4－14个碳之间的PHA结构单元也已经可以用化学方法来合成，并且可以修饰支链上的基团。由于PHA的降解方法不同，可以得到更多种类的单体结构以及衍生物，丰富了这些产物在生物学方面的研究应用，其中3-羟基丁酸（3-HB）作为生物有机代谢产物酮体的一部分，它的各方面生理功能得到广泛的研究[13, 14]。

酮体是脂肪酸分解代谢过程中的产物，仅在肝内形成，它包括3-羟基丁酸、乙酰乙酸和丙酮，其中3-羟基丁酸含量较多。肝含有合成酮体的酶体系，故能生成酮体，但缺乏利用酮体的酶，因此不能氧化酮体，产生的酮体需经血液运输到肝外组织进一步氧化分解。肝脏输出酮体为肝外组织提供了能源，对低血糖时保证脑的供能，以维持其正常生理功能方面起着重要作用[15]。

利用3-HB和其它代谢前体作为药物组合，可以增强心肌效率从而提高心脏的葡萄糖利用效率[16]；也可以为糖尿病和抗胰岛素疾病的病人提供能源[17]；这些组合药物还能够延缓或阻止与记忆相关的脑部损害[18]。3-HB单体及其衍生物具有非常特别的优点：3-HB单体及其衍生物无色透明，且具有轻微的芳香味，可以制成大多数食品的添加剂，也适合口服[19]；肝脏中没有3-HB的代谢酶，所以作为正常饮食的添加剂，被吸收后不会被肝脏代谢，而是直接运输到能够利用它的肝外组织中，从而快速产生作用；它们能够直接穿越血脑屏障，直接到达于大脑神经组织，提供营养并且可以保护和延缓神经细胞的衰老和死亡[20, 21]。

我们的前期研究工作中，已经进行了3-羟基丁酸及其衍生物对正常小鼠的学习和记忆力提高的初步研究研究，3-羟基丁酸甲酯对PUMA-G 和连接蛋白 36在海马组织中表达的上调作用表明它们是新的突触形成至关重要的部分。沉默的神经突触具有很高的可塑性，能作为间隙连接相关的轴突扩展目标，电突触型间隙连接形成的电流有利于诱导长时程记忆的形成，3-羟基丁酸甲酯能够激活沉默的神经突触，增强神经的兴奋性并提高新形成记忆的储存[22]。目前，项目组成员已经解决了大规模高质量高纯度生产这种PHA单体手性小分子的技术，也已经进行了一系列的小鼠水迷宫实验，清楚地证明了该小分子对小鼠记忆力产生的重要影响。

综上所述，目前对3-HB的研究侧重于其作为生理代谢替代物以及在动物处于某些疾病或者饥饿状态下提供能源方面的研究，虽然也有研究表明3-HB作为代谢前提药物组合能够延缓和阻止记忆相关疾病，但是没有研究来说明3-HB及其衍生物影响动物记忆行为的相关生物学机制。本项目希望能够在我们前期的研究基础上，观察分

析3-HB及其它PHA手性单体或衍生物对学习记忆障碍老年大鼠学习记忆行为的影响，并从与其相关的神经递质变化及脑组织中学习记忆相关蛋白的表达研究入手，研究分析3-HB对大鼠学习记忆影响的可能机制。预计成果将有助于了解人类学习记忆障碍的发病因素，揭示PHA手性单体小分子对神经系统的生理作用机制，为寻找认知障碍疾病的防疫与治疗以及提高记忆力药物开发提供新的思路和选择。

3、本项目的创新之处：

（1）本研究按照由现象到本质的研究思路进行实验方案设计，而国内外对3-HB的研究侧重于其作为生理代谢替代物影响动物记忆行为以及在动物处于某些疾病或者饥饿状态下提供能源方面的研究，且没有研究来说明3-HB及其衍生手性小分子影响动物记忆行为的相关生物学机制。这些设计与国内外同期研究相比具有独创性。

（2）目前国内外预防和治疗学习记忆障碍药物研究已成为药物研究热点，本研究紧跟这一热点研究领域，观察3-HB及其衍生手性小分子对学习记忆障碍大鼠的影响，在分析学习记忆相关神经递质浓度变化以及MAPK信号传导通路的研究基础上，分析其提高大鼠学习记忆的神经生物学机制，为防治学习记忆障碍药物的开发奠定基础，其研究内容具有新颖性。

4、主要参考文献：

1.Reuler JB, Girard DE, Cooney TG. Current concepts: Wernicke’s encephalopathy. N Engl J

Med, 312 (1985):1035-1039.

2.Muhamamad F, Siddiqui, Allan JL. Cholinegic therapies in Alzheimer’s disease. Drugs Fut ,24 (1999):417-424

3.施安国, 费艳秋, 安富荣. 老年痴呆症的药物治疗进展. 药学进展, 6 (2000):338

4.Andrew E, Budson MD, Bruce H, Price MD. Memory Dysfunction. N Engl J Med, 352

(2005):692-699

5.Wilson BA, Evans JJ, Emslic H et al. Evaluation of Neuro Page: a new memory aid. J NeurolNeurosurg Psychiatry, 63 (1997):113-115

6.Patocka J, Jun D, Kuca K. Possible role of hydroxylated metabolites of tacrine in drug

toxicity and therapy of Alzheimer's disease. Curr Drug Metab, 9 (2008):332-335

7.Burns A, Bernabei R, Bullock R et al. Safety and efficacy of galantamine (Reminyl) in

severe Alzheimer's disease (the SERAD study): a randomised, placebo-controlled, double-blindtrial. Lancet Neurol, 8 (2009 ):39-47

8.Cui YM, Ao MZ, Li W et al. Effect of glabridin from Glycyrrhiza glabra on learning and

memory in mice. Planta Med, 74 (2008):377-380.

9.焦鹏涛, 金恒善, 付立晶. 利他林和感觉统合训练对儿童多动症的远期疗效研究. 国际医药卫生导报,

08(2006):78-79

10.Kandel ER. The Molecular Biology of Memory Storage: A Dialog between Genes and Synapses.

Science, 294 (2001):1030-1038

11.Arumugam H, Liu XH, Colombo PJ, Corriveau RA, Belousov AB. NMDA receptors regulate

developmental gap junction uncoupling via CREB signaling. Nature Neuroscience, 8

(2005):1720-1726

12.Amara G, Saada W, Ben Nasr S, Ben Hadj Ali B. Cholinesterase inhibitors and depression inthe elderly. Encephale, 36 (2010):77-81

13.Chen GQ, Wu Q. Microbial Production and Applications of Chiral Hydroxyalkanoates. Appl

Microbiol Biotechnol, 67 (2005):592 -599

-5-

14.Zou XH，Chen GQ. Metabolic Engineering for Microbial Production and Applications of

Copolyesters Consisting of 3-Hydroxybutyrate and Medium-Chain-Length 3-Hydroxyalkanoates.Macromolecular Bioscience, 7 (2007):174-182

15.Balietti M, Casoli T, Di Stefano G, Giorgetti B, Aicardi G, Fattoretti P. Ketogenic diets:An historical antiepileptic therapy with promising potentialities for the aging brain. AgeingRes Rev. 2010 Feb 24. [Epub ahead of print]

16.Cross HR, Clarke K, Opie LH, Radda GK. Is lactate-induced myocardial ischaemic injury

mediated by decreased pH or increased intracellular lactate. J Mol Cell Cardiol,

27(1995):1369-1381

17.Haimoto H, Sasakabe T, Umegaki H, Wakai K. Acute metabolic responses to a

high-carbohydrate meal in outpatients with type 2 diabetes treated with a low-carbohydratediet: a crossover meal tolerance study. Nutr Metab (Lond)., 6 (2009):52

18.Reger MA, Henderson ST, Hale C, Cholenon B, Baker LD, Watson GS, Hyde K, Chapman D, CraftS. Effects of β-hydroxybutyrate on cognition in memory-impaired adults. Neurobiology ofAging, 25(2004):311-314

19.Plecko B, Stoeckler-Ipsiroglu S, Schober E, Harrer G, Mlynarik V, Gruber S, Moser E,

Moeslinger D, Silgoner H, Ipsiroglu O. Oral β-Hydroxybutyrate Supplementation in Two

Patients with Hyperinsulinemic Hypoglycemia: Monitoring of β-Hydroxybutyrate Levels in Bloodand Cerebrospinal Fluid, and in the Brain by In Vivo Magnetic Resonance Spectroscopy.

Pediatric Research, 52 (2002):301-306

20.Tieu K, Perier C, Caspersen C, Teismann P, Wu DC, Yan SD, Naini A, Vila M, Jackson-LewisV, Ramasamy R, Przedborski S. D-beta-hydroxybutyrate rescues mitochondrial respiration andmitigates features of Parkinson disease. J Clin Invest, 112 (2003):892-901

21.Daikhin Y, Yudkoff M Ketone bodies and brain glutamate and GABA metabolism. Dev Neurosci,20(1998):358–364.

22.Zou X H, Li H M, Wang S, Leski M, Yao Y C, Yang X D, Huang Q J, Chen G Q. The effect of3-hydroxybutyrate methyl ester on learning and memory in mice. Biomaterials, 30 (2009):1532–1541

-6-

三、研究方案

１. 研究目标、研究内容和拟解决的关键问题

1、研究目标

1.1、提高和改善痴呆老年大鼠的学习和记忆能力；

1.2、在激素和蛋白质水平上阐明这种手性小分子提高和改善大鼠学习记忆力的神经生物学机制；

2、研究内容

本项目拟从PHA单体手性小分子（3-HB）及其衍生物（3-羟基丁酸甲酯Methyl 3-HB和3-羟基丁酸乙酯Ethyl3-HB）对痴呆老年大鼠学习记忆行为的影响为切入点，系统深入地探索这些小分子大鼠学习记忆行为影响的神经生物学机制，证明PHA单体手性小分子对实验动物具有提高记忆力的作用，开发出具有较强抑制和延缓老年痴呆性疾病的药物。

2.1、3-HB、Methyl 3-HB和Ethyl 3-HB对痴呆大鼠学习记忆行为的影响

2.1.1、实验性老年痴呆大鼠模型的制备：

通过大鼠海马内注射β淀粉样蛋白（Aβ 1-40）模拟Aβ损伤制作大鼠AD模型。

2.1.2、大鼠学习记忆行为能力检测：

学习记忆障碍大鼠的学习记忆能力分别采用Morris水迷宫法和穿梭逃避实验测定。开场实验测定大鼠的情绪状况变化。

2.2、3-HB、Methyl 3-HB和Ethyl 3-HB对学习记忆及情绪能力影响的神经生物学机制

2.2.1、对脑内单胺类神经递质的影响

单胺类神经递质去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）和5-羟色胺（5-HT）在学习记忆及情绪过程中起重要作用。大脑的学习记忆与单胺类神经递质NE、DA和5-HT密切相关，它们之间处于一种相互制约的平衡状态，NE对大脑的记忆保持起重要作用，这种对记忆的改善和保持与促进DA释放紧密联系，5-HT系统则参与调节情绪、动机和食欲等。在正常生理状态下，大脑内神经系统的神经递质分泌保持在恒定的水平，并且它们相互之间的比例协调，从而维持神经系统功能的稳定。随着机体的老化或外界条件的应激作用，会引起脑内单胺类神经递质的代谢亦发生紊乱，NE、DA、5-HT含量会下降相互之间的平衡遭到破坏，从而表现出学习记忆能力的下降。通过改善中枢神经递质的代谢则可显著改善学习记忆的障碍。本研究测定大脑皮质、海马和下丘脑等部位的上述单胺类神经递质的含量，观察3-HB、Methyl 3-HB和Ethyl 3-HB对学习记忆和情绪异常大鼠单胺类神经递质的影响。分析这些手性小分子增强学习记忆功能的神经化学机制。

2.2.2、对海马学习记忆信号通路中细胞外信号调节蛋白激酶(Extracellular Regulated protein Kinase,ERK2)和环腺苷酸反应要素结合蛋白(cAMP Response Element Binding Protein, CREB)表达的影响

海马作为中枢神经系统的关键组成部分，在情绪应激、学习和记忆过程中扮演重要角色。丝裂素激活的蛋白激酶(Mitogen-Activated Protein Kinase，MAPK)信号系统作为真核细胞内各种信息传递的最后通路和共同通路，能够将细胞外的各种刺激信息转移到细胞核内，是海马发生一系列可塑性变化的分子基础。MAPK与长时记忆MAPK级联途径的各组成份在分裂后的神经元内大量表达。它位于神经元胞体和树突，参与突触可塑性。MAPK

中ERK/MAPK通路是目前研究最广泛也是最经典的参与学习、记忆和各种可塑性变化的通路。在长时程易化中，蛋白激酶A(Protein Kinase A, PKA)启动该诱导机制的开关，使MAPK重整并与之一起移位于核内，并在核内

使cAMP反应元件结合蛋白磷酸化，磷酸化的CREB可激活CREB调控的基因，表达产生长时记忆所需的蛋白质，参与长时记忆的形成。因此，深入的研究MAPK信号通路在海马可塑性变化中的作用是揭示海马参与学习、记忆及应激调节功能作用机制的根本切入点。实时荧光定量PCR技术于19xx年由美国Applied Biosystems公司推出，是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量，并据此推断目的基因的初始量，不需要取出PCR产物进行分离。由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前已被广泛地应用于分子生物学研究的各个领域。本项目拟采用实时荧光定量PCR法测定3-HB、Methyl 3-HB和Ethyl 3-HB手性小分子对大鼠海马组织中ERK2和CREB蛋白表达的影响，以分析其增强学习记忆功能的神经信号传导机制。

3、拟解决的关键问题

本项目的主要研究内容是研究3-HB及Methyl 3-HB和Ethyl 3-HB手性小分子对学习记忆障碍大鼠的影响及其作用机制。故本项目拟解决的关键问题主要包括如下两点：

3.1、学习记忆行为测定的稳定可靠性：观察分析3-HB及Methyl 3-HB和Ethyl 3-HB手性小分子对学习记忆障碍大鼠的影响是本研究的基础，通过Morris水迷宫和穿梭逃避实验两种方法研究3-HB、Methyl 3-HB和Ethyl 3-HB对正常大鼠学习记忆的影响，实验结果更加稳定可靠。

3.2、神经递质含量及记忆相关蛋白表达的检测：3-HB及Methyl 3-HB和Ethyl 3-HB手性小分子提高和恢复大鼠的学习记忆能力机制是本研究的核心，拟采用HPLC-电化学法检测单胺类神经递质含量以及实时荧光定量PCR法检测海马组织中学习记忆相关蛋白ERK2和CREB的表达。

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２. 拟采取的研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析

本项目希望能够在我们前期的研究基础上，通过药物注射建立老年大鼠学习记忆障碍模型大鼠学习记忆障碍模型，对这些学习记忆障碍大鼠灌喂3-HB及Methyl 3-HB和Ethyl 3-HB手性小分子一定的时间后，运用Morris水迷宫、穿梭逃避试验和开场试验检测这些手性小分子对大鼠学习记忆行为及情绪的影响。并从与其相关的神经递质以及脑组织中学习记忆相关蛋白ERK2和CREB的表达研究入手，研究分析3-HB及Methyl 3-HB和Ethyl 3-HB对大鼠学习记忆影响的可能机制。

2、技术路线和实验方案

2.1、技术路线

详情请见附件

2.2、实验方案

2.2.1、3-HB、Methyl 3-HB和Ethyl 3-HB对老年痴呆大鼠学习记忆及情绪能力的影响

老年痴呆SD大鼠模型制备：大鼠海马内注射β淀粉样蛋白采用立体定位仪进行注射β-淀粉蛋白立体定向微注射于大鼠的右侧海马区。单笼饲养至大鼠完全清醒后备用。

老年痴呆SD大鼠模型（180～200 g）制备后随机分为对照组和实验组，灌胃针灌喂给样，实验组大鼠灌喂3-HB、Methyl 3-HB和Ethyl 3-HB，阴性对照组用生理盐水灌喂，阳性对照组用左旋乙酰肉毒碱灌喂，连续灌喂30 d。SD大鼠的学习记忆能力测定分别采用Morris水迷宫（MWM）法和穿梭逃避实验测定。

Morris水迷宫法：水迷宫为一直径160 cm，高50 cm的圆形水池，池壁上标有东南西北四个入水点，它们将水池等分为四个象限，分别称SW、NW、SE及NE象限，在SW象限正中离池壁33 cm处放一个直径为9 cm，高29 cm的圆形平台，平台顶端低于水面1 cm。迷宫上方安置由计算机控制的带有显示系统的摄像机，同步记录大鼠的游泳轨迹，实验时水温保持在26±2℃，平台、池壁均染成黑色以隐蔽平台，实验过程中水池及周围环境保持不变。Morris水迷宫实验包括定位航行、空间探索和记忆保留等实验。

定位航行实验用于测量大鼠在水迷宫中的学习能力，训练时，每天游泳训练4次,训练时随机选择一个入水点，将大鼠面向池壁放入水中，观察并记录：a、大鼠寻找并爬上平台的路线图；b、大鼠入水到找到水下隐蔽平台并立于其上所需时间(潜伏期，Escape Latency，EL)；c、游泳速度。

空间探索实验用于测量大鼠学会寻找平台后，对平台空间位置记忆的能力。定位航行试验第5天后撤去水平台，然后任选一个人水点将大鼠面向池壁放入水中，分三次进行测量数据：a、120 s内穿越原平台位置的次数；b、120 s内搜索平台的路线图。

空间探索试验结束的48 h后，所有大鼠进行记忆保留试验。分三次进行，间隔5 min。大鼠从背对平台的固定位置入水，以120 s为时限计从入水到爬上平台的时间为EL。大鼠爬上平台后迅速将其移走至笼中，直至下一个试验。

穿梭逃避实验：分别以蜂鸣音响和足底电击作为刺激，由红外摄像机记录动物的运动轨迹，计算机分析回避反应的次数和潜伏期。实验大鼠3-HB、Methyl 3-HB和Ethyl 3-HB灌胃（对照组：生理盐水）30天，灌喂结束后第3天开始进行穿梭逃避实验训练。通过上述两种方法研究3-HB、Methyl 3-HB和Ethyl 3-HB对正常大鼠学习记忆的影响，不但结果更可靠，由于结合测定方法的不同，采用了连续7天给药和连续30天给药两种方式，因此更有利于观察3-HB、Methyl 3-HB和Ethyl 3-HB对正常大鼠学习记忆的影响。

SD大鼠情绪能力的测定：采用开场试验法，应用计算机控制的开场实验仪检测。实验大鼠3-HB、Methyl

3-HB和Ethyl 3-HB灌胃（对照组大鼠：生理盐水）7天，自用药第2天开始进行开场试验。方法简述如下：开场实验在黑暗的观察箱内进行，观察箱的体积为 45 cm×45 cm×65 cm，开场分为9个象限。动物的活动情况通过红外摄像系统和视频合成器由计算机记录大鼠的运动轨迹，并由计算机分析和评定下列行为改变：休息时间、活动时间、线性度、总路程、速度、中央区域活动时间及路程、四周活动时间及路程。以灌喂生理盐水对照组大鼠的上述行为作为正常对照，描述大鼠服用3-HB、Methyl 3-HB和Ethyl 3-HB后的行为改变，探讨3-HB、Methyl3-HB和Ethyl 3-HB对大鼠情绪能力的影响。

2.2.2、3-HB对学习记忆及情绪能力影响的神经生物学机制

a、对脑内单胺类神经递质的影响

单胺类神经递质测定：痴呆大鼠进行行为学检测后继续稳定饲养一周，取一半数量大鼠进行此实验测定，乙醚麻醉下断头取脑，在冰上分离大脑皮质、海马和下丘脑等部位，称重量后液氮快速冷冻保存。匀浆后，HPLC-电化学法检测单胺类神经递质5-HT、DA、NE的含量。

b、学习记忆信号通路中记忆蛋白ERK2和CREB表达的影响

实时荧光定量PCR法测定记忆蛋白ERK2和CREB表达的表达：痴呆大鼠进行行为学检测后继续稳定饲养一周，取一半数量大鼠进行此实验测定，乙醚麻醉下断头取脑，在冰上分离海马，称重量后液氮快速冷冻保存。RNA的提取：RNA提纯试剂盒（SV Total RNA Isolation System，Promega），Eppendorf AG 22331 Hamburg 分光光度计测定RNA的含量和纯度。CREB和ERK2引物和探针由ABI（Applied Biosystems Inc）公司设计并合成，以GAPDH为内参照。其它实验步骤按实时定量PCR仪的操作说明进行。

3、可行性分析

3.1、理论上具有可行性：3-羟基丁酸作为生物有机代谢产物酮体的一部分，它产生于肝脏组织并被输出到肝外组织为其提供能源，特别是在低血糖时保证脑的供能，以维持其正常生理功能。本项目是在课题组通过不同方法降解PHB获得Methyl 3-HB和Ethyl 3-HB手性小分子化合物，与3-HB具有相似的分子结构，能够自由透过血脑屏障作用于神经细胞，影响大鼠的学习记忆行为能力。在此基础之上，研究分析这些手性小分子提高学习记忆能力的神经化学和神经信号传导机制，在理论上符合目前认识生命本质的“现象-本质”的研究模式。

3.2、研究技术比较成熟：项目主持人自20xx年至今，对PHA生物材料的生物降解以及降解产物在小鼠神经系统中

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的作用有着深入的研究。本项目涉及的核心实验技术和方法，如Morris水迷宫等动物行为学实验、HPLC测定神经递质、实时荧光定量PCR等，均已在我们的前期研究和相关工作中全面实施，这为本项目的研究奠定了扎实的技术基础。

3.3、硬件条件具备：本实验室为韩山师范学院学科建设重点支持实验室，加上汕头大学多学科研究中心及精神卫生中心的支持，已基本拥有与本项目所需要的仪器设备，这为本项目的研究奠定了物质基础。

3.4、本研究是申请者近年来研究工作的继续和深入，具有扎实的前期研究工作基础：在项目的立项依据和研究基础中进行了介绍，在此不在赘述。

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3. 年度研究计划及预期进展

1、研究计划：

20xx年10月-20xx年8月

老年痴呆大鼠模型的制备；

学习记忆与情绪行为学检测：Morris水迷宫实验和穿梭逃避实验联合检测大鼠学习记忆行为能力； 开场试验法测定大鼠情绪行为。

20xx年9月-20xx年5月

单胺类神经递质浓度的测定：HPLC-电化学法检测大脑皮质、海马和下丘脑中单胺类神经递质含量。

学习记忆信号通路相关蛋白表达的检测：实时荧光定量PCR法测定海马组织中记忆相关蛋白ERK2和CREB表达的表达

20xx年6月-20xx年10月

数据整理，论文撰写，专利申请，项目总结和结题。

2、预期进展：

1)阐明3-HB及衍物等生手性小分子影响痴呆大鼠学习记忆行为的生物学机制；

2)在国内外核心以上刊物发表论文2-3篇，其中SCI收录期刊1篇以上；

3)培养青年教师2-3人，本科毕业生4-6人，联合培养硕士研究生2-3人。

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四、研究条件与基础

１.已取得的研究工作成绩及与本项目有关的研究工作积累（对于自由申请项目，请着重填写申请人近期的主要工作业绩；对于重点项目，请着重填写本课题组与本项目相关的研究工作积累和近五年的主要研究业绩）1、工作基础

申请者前期工作中发现3-羟基丁酸及其衍生物（3-羟基丁酸甲酯和3-羟基丁酸乙酯）能够促进神经胶质细胞进入分裂周期，提高其增殖能力并阻止细胞的凋亡和死亡。首次在小鼠大脑组织中发现了γ干扰素上调蛋

白PUMA-G的表达，该蛋白为3-羟基丁酸特异受体，并且观察到灌喂3-羟基丁酸甲酯能够促进该受体在海马等大脑组织中的表达。同时也检测到3-羟基丁酸甲酯提高了小鼠脑组织中磷酸化ERK2的含量。通过Morris水迷宫行为学实验对小鼠学习与记忆行为学的测定，发现灌喂3-羟基丁酸甲酯组小鼠具有非常优秀的学习记忆行为表现。现有的工作基础包括：

a.已经掌握3-HB以及其它PHA降解产物等手性小分子的制备方法。

b.已经完成了小鼠水迷宫实验，取得了十分明显的效果，Methyl 3-HB显著增强了小鼠的学习和记忆能力。c.掌握了多种应激动物模型的制备：母鼠剥夺、不可预料慢性应激所致的行为性抑郁和学习记忆障碍模型。

d.初步建立了学习记忆行为学检测方法：检测实验动物的学习和记忆功能的Morris水迷宫和穿梭逃避试验；检测情绪的开场试验；跟踪神经药物作用的行为追踪方法等。

除此之外，几年来本课题组在实验室建设经费，实验场地和科研人员的配置上得到了学校和生物系领导的大力支持，目前实验室运作正常，有能力承担与本项目相关的研究工作。所有这些基础都为本项目的研究打下了坚实的基础，为本项目的实施提供了强有力的理论和技术保障。

2、申请人简介：

邹湘辉，广东省韩山师范学院生物系，副教授。20xx年于湖南师范大学生命科学学院获得学士学位，20xx年于广东省汕头大学生物系获得生化及分子生物学硕士学位，2004-20xx年于广东省汕头大学生物系担任助教工作，2008于广东省汕头大学多学科研究中心获得生物化学与分子生物学博士学位。本人参加了多项国家自然科学基金项目的研究：《利用位点特异性重组酶构建用于基因治疗的基因载体》和《基于loloation C的新型抗菌肽的设计合成及抗菌机理研究》；同时也参与了973项目《生物炼制细胞工厂的科学基础-代谢功能的环境应答和适应机制》和863项目《用反向TCA 高效生产PHA生物塑料》的研究。现主持韩山师范学院青年基金项目和潮州市科技计划项目各1项。在国内外核心期刊发表科研及会议论文10余篇，申请国际专利1项。

3、已发表（或待发表）与本项目有关的主要论文如下：

（1）Zou XH，Chen GQ. Metabolic Engineering for Microbial Production and Applications of

Copolyesters Consisting of 3-Hydroxybutyrate and Medium-Chain-Length 3-Hydroxyalkanoates.

Macromolecular Bioscience. 2007, 7: 174-182

（2）Zou XH, Li HM, Wang S, Leski M, Yao YC, Yang XD, Huang QJ, Chen GQ. The effect of

3-hydroxybutyrate methyl ester on learning and memory in mice. Biomaterials. 30 (2009): 1532–1541

（3）Dai ZW, Zou XH, Chen GQ. The Application of

Poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyhexanoate) as an Injectable Implant System for Preventionof Post-Surgical Tissue Adhesion. Biomaterials. 30 (2009): 3075–3083

（4）Yang XD, Zou XH, Dai ZW, Luo RC, Wei CJ, Chen GQ. Effects of oligo 3-Hydroxyalkanoateson the viability and insulin secretion of murine beta cells. J BIOMAT SCI-POLYM E. 20 (2009):1729–1746

（5）Yang XD, Chen M, Zou XH, Zhu LY, Wei CJ, Chen GQ. Enhanced Insulin Production from

Murine Islet Beta Cells Incubated on Poly (3-Hydroxybutyrate-co-3-Hydroxyhexanoate). J BIOMEDMATER RES A. 92 (2010): 548–555

（6）Yao YC, Zhang J, Zou XH, Wang ZH, Xiong YC, Chen J, Chen GQ. A specific drug targetingsystem based on polyhydroxyalkanoate granule binding protein PhaP fused with targeted cellligands. Biomaterials. 2008, 29: 4823-4830

（7）Zou XH, Chen GQ. Effect of Ethyl-3-Hydroxybutyrate on Cell Proliferation. InternationalSymposium on Recent Advances in Molecular, Clinical and Social Medicine, December 3-5, 2005,Shantou University, Guangdong, China

（8）Zou XH, Chen GQ. 3-Hydroxyalkanoate Monomers and Its Application in Neuron Science.

International Symposium on Biological Polyesters (ISBP 2006). August 27-31, 2006, Universityof Minnesota, Mineapolis, USA

（9）Zou XH, Chen GQ. 3-Hydroxyalkanoate Monomers as Memory Enhancer. 2nd Cross-Strait PHAConference. May 1-5, 2007, Taiwan, China.

（10）Yang XD, Li HM, Zou XH, Zhu LY, Wei CJ, Chen GQ. PHBHHx as a Pancreatic Tissue

Engeering Material. International Symposium on Biological Polyesters (ISBP 2008). November23-27, 2008, Massey University, Auckland, New Zealand

（11）Zou XH, Wu YY, Zhuang DH, Zhou XP, Dai ZW, Yang XD, Leski M, Takai O, Chen GQ.

3-Hydroxybutyrate methyl ester improves learning and memory in mice. Nint International

Symposiumon on Biomimetic Materials Processing, January 22-24, 2009, Japan.

（12）Zou XH, Li LH, Yang DJ, Wu YY. Biocompatibility of Self-assembled Monolayers

Modified-Polyhydroxyalkanoate Film. Tenth International Symposium on Biomimetic Materials

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Processing, January 26-29, 2010, Japan.

（13）邹湘辉，庄东红，吴云影等。实时荧光定量PCR检测小鼠脑组织中3-羟基丁酸受体基因PUMA-G的转录表达。广东医学，2010，31：58-60

（14）发明专利：陈国强, 邹湘辉. 一种提高记忆能力的小分子药物. 国际专利申请:PCT/CN2007/000815(2007)

4、参加科研项目的情况：

（1）《利用位点特异性重组酶构建用于基因治疗的基因载体》，国家自然科学基金（30571071）, 2006-2008，主要参与人。

（2）《基于loloation C的新型抗菌肽的设计合成及抗菌机理研究》，国家自然科学基金（30672560）,2007-2009，主要参与人。

（3）《应用脂肪间充质干细胞分化的睾丸间质细胞和生物材料支架构建雄激素分泌组织》，国家自然科学基金（30870650），2009-2011，主要参与人。

（4）《对虾血蓝蛋白抑菌作用的分子机制研究》，国家自然科学基金（30871939）， 2009-2011，主要参与人。

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２.已具备的实验条件,尚缺少的实验条件和拟解决的途径(包括利用国家重点实验室和部门 开放实验室的计划与落实情况)

已经具备的实验条件：

标准细胞培养场地和系统、洁净动物饲养房、高效液相色谱系统、Thermo气套式二氧化碳细胞培养箱、奥林巴斯荧光显微镜、实体解剖显微镜、Eppendorf冷冻高速离心机，生物安全柜及超净工作台、全自动高压灭菌锅、超低温冰箱、液氮罐、Sartorius精密电子天平（1mg）、微量分光光度计、PCR仪、酸度计、雪花制冰机、纯水制备系统、蛋白和核酸电泳系统、蛋白和核酸杂交实验系统、凝胶成像系统等。

尚缺少的实验条件和拟解决的途径：

本项目主要缺少动物行为学测定和基因转录分析相关仪器设备。我们拟充分利用邻近的汕头大学多学科研究中心、和精神卫生中心的相关实验设备，如实时荧光定量PCR仪和动物学习记忆行为学测定仪器来进行这些研究。

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五、经费预算

项 目

合计：

1、科研业务费合计

（1）实验用动植物的购置、种植和养殖费 （2）计算、测试、分析费 （3）国内调研和学术会议费 （4）业务资料、报告、论文印刷费 （5）临时用工劳务费 （6）其他 2、实验材料费合计

（1）原材料、试剂、药品等消耗性物品购置费 （2）标本、样品采集加工费 （3）运杂包装费 （4）其他

3、仪器设备购置费合计 （1）专用仪器设备的购置费 （2）运杂包装费 （3）安装费

（4）自制专用仪器设备的材料、配件和外协加工费 （5）其他 4、实验室改装费

金 额

3.001.60

0.80大鼠的购买和饲养0.50色谱分析，行为学测定0.20参加学术会议及相关费用0.10论文发表，资料检索等0.000.001.15

1.00试验试剂盒，分子生化药品0.000.000.150.000.000.000.000.000.000.00

管等

备 注

5、协作费0.00

6、管理费0.15

7、生活补贴费0.10 注：开支范围详见《广东省自然科学基金资助项目财务管理办法》

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六、以往基金课题完成情况

对申请者负责的前一个已结题广东省自然科学基金资助项目(项目名称及顺序号)完成情况、后续研究进展及与本申请项目的关系加以详细说明。另附该已结题项目已发表主要相关论文首页复印件(限三篇)。

七、申请者承诺

我保证上述填报内容的真实性。如果获得资助，我与本项目组成员将严格遵守广东省自然科学基金委员会的有关规定，切实保证研究工作时间，按计划认真开展研究工作，按时报送有关材料。

申请者（签章）

年 月 日-15-

八、申请者所在单位及合作单位的审查与保证1. 合作单位的审查意见与保证

本单位同意参加合作研究，保证对参加合作研究人员给予时间及工作条件的支持、督促其按计划完成所承担的任务。以下为需要说明的其它问题：

合作单位１ (公章)合作单位2 (公章)合作单位3 (公章)

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2. 申请者所在单位领导的审查意见与保证

已对申请书内容进行了审核,申请书填报内容属实并保证在项目获得资助后做到以下几点:

(１)保证对研究计划实施所需的人力、物力和工作时间等条件给予支持；

(２)严格遵守广东省自然科学基金管理委员会有关资助项目管理和财务管理的各项规定；

(３)督促项目负责人和本单位科研管理部门按广东省自然科学基金管理委员会的规定及时报送有关报表和材料。 需要说明的其它问题:

单位负责人 (签章) 单位(公章) 年 月 日

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