实验七、双向琼脂扩散试验

实验七双向琼脂扩散试验

实验七、琼脂扩散试验

一、实验目的

掌握双向琼脂扩散试验的原理、操作方法及结果判定方法。

二、实验原理

可溶性抗原(如蛋白质、多糖、脂多糖、病毒的可溶性抗原、结合蛋白等)与相应抗体在半固体琼脂凝胶内扩散,二者相遇,在比例合适处形成白色沉淀。抗原和抗体加到琼脂板上相对应的孔中,两者各自向四周扩散,如两者相对应,浓度比例合适,则经一定时间后,在抗原、抗体孔之间出现清晰致密的白色沉淀线。每一抗原与其相对应抗体只能形成一条沉淀线,若同时含有若干对抗原抗体系统,因其扩散速度的不同,可在琼脂中出现多条沉淀线。且根据沉淀线融合情况,还可鉴定两种抗原是完全相同还是部分相同。所以,可用此法来分析和鉴定标本中多种抗原或抗体成份,并用以测定抗原或抗体的效价。

三、材料与试剂

传染性法氏囊病毒标准抗原、传染性法氏囊病毒标准阳性抗体,待测鸡血清,精制琼脂粉,生理盐水、载玻片,打孔器(直径3mm)、湿盒、吸管等。

四、操作步骤

1、将琼脂糖1.0克、NaCl 8.0克、蒸馏水100ml装入三角烧瓶,煮沸,然后用吸管吸取7ml加入平皿内(勿有气泡)使成约3mm厚的凝胶,待冷却凝固后按如下图方式打孔。(注意打孔完毕要封底)

…… …… 余下全文

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