脓汁和粪便标本中病原菌的检测

年级专业：20##级

学号：3110403018

姓名： 林健

1.实验目的：

（主要写脓汁和粪便标本中病原菌的检测，另外附加一些辅助实验的目的，如了解并熟悉微生物实验操作方法，实验方法等等）

2.实验器材：（还没有写完）

 接种针、接种环、油性笔、打火机、试管架…………

3.实验方法与步骤：

3.1培养基的制备

培养基制备的一般程序：

3.2空气、手指皮肤的细菌学检查

3.3细菌的分离与培养：

采用平板划线分离法，取脓汁标本在普通平板表面划线，取粪便标本在伊红美蓝固体培养基表面划线，使之分散成单个细菌，在37℃培养18～24h ，从而分离出单个菌落。

3.4细菌的纯培养：

取脓汁标本在普通平板上的黄色、白色单菌落，粪便标本在伊红美蓝平板上的紫黑色、淡粉红色单菌落接种在四个斜面培养基，标记，在37℃培养18h。

3.5细菌的形态学检查

3.5.1革兰染色法观察细菌形态

涂片  →  干燥   →  固定→染色。涂片：取一玻片在玻片的左右两侧上加生理盐水3～4ul，2滴，分别取黄色和紫黑菌菌苔少许（1mm小菌落的半量）与左右两侧盐水混匀，涂成1cm2。干燥：在空气中放置至干燥。固定：在酒精灯上来回横穿2到3次对其进行固定。染色：结晶紫 → 初染1分钟→水洗→卢戈碘液→媒染1分钟→水洗→95％乙醇→脱色约20秒钟→水洗稀释→复红→复染1分钟→水洗→吸干,镜检。

3.5.2取另一玻片，取白色和粉红色菌苔，操作与上述同。

3.6细菌的生化试验 

3.6.1糖发酵试验

用接种针分别挑少许紫黑和粉红色的细菌接种到葡萄糖发酵管和乳糖发酵管中，在37℃下，培养24小时，观察其产酸产气情况。

3.6.2细菌药物敏感性试验 

接种环分别取黄、白、紫黑、粉红色四种菌液3～6ul×2环，各自在四个平板上，作平板密集划线接种细菌（纱窗样）。设计三点，三点之间等边三角距离，点距离平皿边缘约15mm。作标记：青、链、庆。镊子火焰消毒，夹取相应的药物纸片，平贴在已设定的位置上，按压，最后镊子火焰灭菌。37℃18～24小时培养，观察结果。

3.6.3血浆凝固酶试验 

取二滴兔血浆置于洁净的玻片上，分别用接种环取白色和黄色菌苔(2～3个菌落的菌量)与血浆研磨混合，涂匀呈云雾状，立即观察结果。

3.6.4半固体接种法  

接种针斜面取四种不同颜色的细菌，各自接种进四个半固体培养基，从半固体培养基中心，垂直刺入，到达培养基底部4/5处，再循原来的路线，退出接种针。 在37℃下,培养24小时，观察结果。

3.6.5 痢疾血清玻片凝集反应 

取载玻片1张，滴加痢疾血清和生理盐水各15ul，2滴。用接种环挑取少许紫黑色菌落和粉红色菌落，各自与上述混合液液滴混匀，观察结果。

4.结果观察，记录，分析讨论

4.1结果观察

(注：凡是有实验现象的都记录下来，可以放图片，最好和实验记录相对应，有怎样的实验观察就有对应的实验记录)

4.2实验记录（我只提供部分的记录表格，也可以用文字记载，有一些需要大家自己作表格；另外，里面的表格有一些是附表，不是实验记录表）

4.2.1

  

4.2.2手指的细菌学检查

………………………

4.2.3

4.2.4

4.2.5血浆凝固酶实验记录

………………

4.2.6痢疾血清实验记录

………………

由上述实验结果可得脓汁和粪便标本细菌检测结果如下表：

4.3实验结果与讨论

4.3.1

4.3.2………………………………

 

第二篇：微生物观察实验报告

实验题目: 湖塘水体和沉积物中微生物的观察

姓    名：                学    号：           

班    级：                组    别：

指导教师：

实验（1）湖塘水体和沉积物中微生物的观察和计数

1.实验概述

1.1实验目的及要求

水体和沉积物是水生生物繁衍生息的基本场所。本实验通过实地调查和实验室观察实验，对湖塘水体和沉积物中微生物观察和定性，初步了解湖塘水体和沉积物中微生物的种类和分类；了解其对水体净化的正面和负面的影响。

1.2实验原理

（1）显微镜的原理

  （2）血球计数板的结构和计算方法。

   血球计数板是一块比较厚的特制玻片。玻片中央刻有4条槽，中央两条槽之间的平面比其他平面略低，中央有一个小槽，槽两边的平面上刻有9个大方格，中间的一个大方格为计数室，其长和宽均为1mm，深度0.1mm，体积0.1m³。计数室的规格是把大方格分成16个中方格，每一个中方格有分成25个小方格，总共有400个小格。

   血球计数板的计算方法是：先求得每个中方格中微生物的平均值，乘以中格数，即为一个大格中的总微生物数，再乘以10000，即为稀释后的溶液中的总微生物数。如要换成原液中的微生物总数，乘以稀释倍数即可。

   为简化计，通常取4个角上的4个中格进行计数，取其平均值，作为每个中格中微生物的平均值。

   计算公式：微生物数（mL）=（100个小格内的微生物数/100）*400*10000*稀释倍数

2.实验内容

2.1实验方案设计

选择一个池塘，对湖塘和水体和沉积物采样，观察其中微生物并计数。要求手绘观察图像，计算微生物数量。

2.1.1实验设备和材料

   （1）实验设备

       显微镜、血球计数板、载玻片、盖玻片、滴管、移液管

   （2）实验材料

       校园池塘的水体和沉积物

2.2实验过程（实验步骤、记录、数据、分析 ）

（1）用压滴法制作表本片

       取一块洁净的载玻片置于实验平台上，用滴管吸取湖水或含有沉积物的混合液，滴加在载玻片中央，用干净的盖玻片覆盖在滴液上，不要有气泡，即制成标本片。

   （2）用显微镜观察标本片上的微生物。

   （3）加被测样品到血球计数板

   取干净的血球计数板，用盖玻片盖住计数室，用细口滴管吸取少量已经充分摇匀的湖水和沉积物的混合液，滴于盖玻片边缘，微生物自行深入计数室，静止5-10min，待微生物自然沉降稳定后计数。

   （4）计数

   先用低倍镜寻找大方格网的位置（视野不要太亮），找到计数格后，换用40倍物镜观察计数。

2.3结论

手绘观察到的微生物的形状，相对大小(见附图)

   计算样品微生物数量

2.4 建议（如果有）

实验（2）湖塘水体和沉积物中微生物的革兰氏染色和定性

1.实验概述

1.1实验目的及要求

水体和沉积物是水生生物繁衍生息的基本场所。本实验通过实地调查和实验室观察实验，对湖塘水体和沉积物中微生物观察和定性，初步了解湖塘水体和沉积物中微生物的种类和分类；了解其对水体净化的正面和负面的影响。

1.2实验原理

微生物细胞由蛋白质、核酸等两性电解质及其它成分组成，表现出两性电解质的性质。细菌的等电点pI在2-5之间，所以当pH>5时，细菌带负电荷，容易与带正电荷的碱性染料结合而被染色。微生物体内的不同结构和染料的结合能力不同，故可用不同染料对微生物的不同结构分别染色。

2.实验内容

2.1实验方案设计

对池塘水体和沉积物中得细菌进行革兰氏染色和定性，进行微生物形态图的绘制。

2.1.1实验设备和材料

（1）       实验设备

显微镜、接种环、载玻片、酒精灯。

（2）    试剂

草酸铵结晶紫染液、革兰氏碘液、95%乙醇、番红

（3）    实验材料

校园池塘的水体和沉积物

2.2实验过程（实验步骤、记录、数据、分析 ）

（1）涂片

取干净的载玻片于实验台上，在正面边角作记号，滴一滴无菌蒸馏水在玻片中央，灼烧接种环，冷却后取样品，与玻片上水滴混匀，在玻片上涂布成一层均匀的薄层，涂布面不宜过大。

（2）固定

即干燥，干燥过程最好在空气中晾干。为加速干燥，可在微小火焰上烘干，烘干后在火焰上方快速通过3-4次，使菌体完全固定在载玻片上。不宜长时间高温烘烤，易致急速失水使菌体变形。

（3）初染

滴加草酸铵结晶紫染色液染色1-2min，水洗。

（4）媒染

滴加革兰氏碘液，染1-2min，水洗。

（5）脱色

滴加95%乙醇，洗约45s，接着水洗。或滴加95%乙醇，将玻片摇晃几次即倾倒乙醇，如此重复2-3次后水洗。

（6）复染

滴加番红，染2-3min，水洗并干燥。

（7）镜检

显微镜观察。

2.3结论

观察颜色，并判断是G（紫色）还是G（红色）。手绘观察到的微生物图像，标明颜色。

2.3.1注意事项：

（1）涂片所用载玻片要洁净无油渍。

（2）细菌不宜多，涂片不宜厚，宜薄而均匀。

（3）染色过程中勿使染色液干涸。用水洗后，应该甩去玻片上残水以免染色液被稀释而影响染色效果。

（4）革兰氏染色成败的关键是脱色时间是否合适。如脱色过度，G易被误认为G。而脱色时间过短，G易被误认为G。脱色时间长短还受涂片厚薄，脱色时玻片晃动程度影响。

2.4 建议（如果有）

2.      思考题

（1）涂片为何要固定？固定时要注意什么？

答：原因有三1、固定细菌，防止冲掉2、变形蛋白易染色3、杀死细菌，防止感染。实验中固定是用酒精灯烘干水样，应注意控制温度，控制时间，防止将菌体烧成灰烬，无法染色。固定时用载玻片背面靠近火源，而不是直接烘载玻片正面。

（2） 革兰氏染色如果只做1-4步，不用番红复染，能否分辨革兰氏染色结果？为什么？

答：能。在酒精脱色后，不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋），被酒精脱色为革兰氏阴性菌。最后一步用番红染液复染，是为了让结果更清楚。

（3）革兰氏染色在微生物学中有何实践意义？

指导教师评语及成绩：

成绩：             指导教师签名

                  

                    批阅日期