细菌的生理生化反应实验报告

【实验目的】 

了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。 了解生理生化反应在鉴别细菌中的意义。 

【实验原理】 

通过测定微生物校内某些酶类的有无、对某些第五的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物带血的多样性。某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛发生反应，形成红色的玫瑰吲哚，为吲哚反应阳性。 微生物发酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性条件下与肌酸类物质反应，生成红色化合物为V.P.反应阳性。有些细菌发酵糖类产生有机酸较多，使发酵液的pH下降到4.2以下，当加入甲基红试剂后，时发酵液变红色，为甲基红反应阳性。某种微生物能以某种糖类为碳源，产酸产气，则判断为发酵这种糖。

 【实验材料和用具】

1.       菌种：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌。

2.       培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂

3.       仪器：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液枪、滴管、杜氏小管。

【实验方法】

（一）V-P反应

1.试管标记 取5只装有葡萄糖蛋白胨水培养基的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。

2.接种培养 以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。空白对照不接种。置37度恒温培养箱中培养24-48h。

3.观察记录 去除以上培养物，分别取出2ml培养液加入另外5支相应编号的空试管中，加入与培养液等量的V-P试剂，充分震荡2min。放置37度恒温培养箱中培养30min观察记录结果。

（二）甲基红实验

于V-P实验留下的培养液中，分别加入2-3滴甲基红指示剂，立即观察培养液的颜色变化

（三）吲哚实验

1.试管标记 取5只装有蛋白胨水培养基的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。

2.接种培养 以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。空白对照不接种。置37度恒温培养箱中培养24-48h。

3.观察记录 在培养基中加入乙醚1-2ml，经充分振荡使吲哚萃取至乙醚中，静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面，此时沿试管壁缓慢加入5-10滴吲哚试剂。观察记录结果

（四）糖发酵试验

1.试管标记 取分别装有葡萄糖、蔗糖、乳糖发酵培养液试管各4支，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌和空白对照。

2.接种培养 以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。空白对照不接种。置37度恒温培养箱中培养24-48h。

3.观察记录

【实验结果与分析】

（一）V-P

产气肠杆菌结果为阳性，其余为阴性。

（二）甲基红

大肠杆菌、产气肠杆菌、枯草芽孢杆菌结果为阳性，变形菌为阴性。

（三）糖发酵

大肠杆菌可以利用葡萄糖和乳糖，并且产气；普通变形菌可以利用葡萄糖、乳糖和蔗糖并且在蔗糖中产气。

（四）吲哚实验

大肠杆菌和普通变形菌结果为阳性，其余为阴性。

（五）抗生素

抑菌圈大小

氯苯青霉素对两种细菌的药性最强。抗生素对金黄葡萄球菌的药性强弱依次为氯苯青霉素、卡那霉素、氯霉素和链霉素。而对大肠杆菌则是链霉素、氯霉素和卡那霉素、氯苯青霉素。

 

第二篇：实验十二细菌常用生理生化反应实验结果观察

实验十二　细菌常用生理生化反应实验结果观察

一 结果观察

１　葡萄糖发酵实验

直接观察试管, 试管变黄者为葡萄糖发酵阳性菌,不变者为阴性菌.

左边为恶臭假单胞菌，有气泡并变为黄色；右边为大肠杆菌,

２　 V. P. 反应和甲基红试验:

将培养好的液体培养基分装于两个干净的小试管中,在一管中滴入2-3滴甲基红试剂, 溶液变红的为甲基红阳性菌,不变的为甲基红阴性菌.  在另一管中加入V. P. 试剂,在37℃保温15分钟, 变红者为阳性菌,不变者为阴性菌.

VP，图为右边为大肠杆菌，溶液变红，为阳性菌。

３吲哚实验

在培养好的液体培养基中加入1厘米高的乙醚,振荡,静置分层,加入2-4滴吲哚试剂,在掖面交界出现红色者为吲哚反应阳性菌,不变者为阴性菌.

左边为大肠杆菌，出现红色阳性菌；右边为产气杆菌，颜色不变，阴性菌。

４　硝酸盐还原实验

在点滴板上滴入革里斯试剂 A液和B液，如过溶液变红说明有亚硝酸盐，为硝酸盐还原阳性菌，如果不变色需要再倒出部分培养基在另外的小孔中再滴如耳苯胺试剂，如果变蓝，说明此菌为阴性菌；如果不变色，说明此菌为硝酸盐还原强阳性菌．

右下方恶臭假单胞菌，加入革里斯试剂A、B后不变色，再加入二苯胺试剂后变蓝，为阴性菌；左上方大肠杆菌为红色。

５　柠檬酸盐实验

直接观察斜面，斜面变兰色者为柠檬酸盐利用阳性菌，不变者为阴性菌．

左边产生蓝色，产气杆菌 阳性；右边为大肠杆菌，阴性。

６　明胶水解

向培养好的明胶培养基中加入酸性氯化汞或三氯乙酸溶液，并铺满平板，菌落周围出现透明圈的菌为明胶水解阳性菌，没有透明圈的菌为阴性菌．

左边为大肠杆菌，出现透明圈，阳性；右边为枯草杆菌，阴性菌。

7 淀粉水解实验

向培养好的淀粉培养基平板上加入碘液，并铺满平板，菌落周围出现透明圈的菌为淀粉水解阳性菌，没有透明圈的菌为阴性菌．

左边枯草杆菌，出现透明圈，阳性；右边大肠杆菌，无透明圈，阴形。

8 硫化氢产生实验

直接观察培养好的培养基，出现黑色沉淀者为阳性菌，不变者为阴性菌．

左边为变形杆，菌出现黑色沉淀，阳性菌；右边为大肠杆菌，阴性菌。

二 思考题

１　你的实验结果与实验预期是否相同？如果不同试分析原因．

答：与试验预期部分相符。

  不相符的结果多处于大肠杆菌接种处，可能原因—大肠杆菌不足。

２　你认为在做生理生化反应实验中应注意什么问题？

答：1）要严格按照培养基配方配制培养基。

2）观察结果时要注意滴加药量及反应时间