实验一、药理学实验的基础知识和药理学总论实验
一、实验动物的基本技能和实验技术基础
1、 实验动物的标记
大、小鼠和白色家兔的标记常用3~5%黄色苦味酸溶液涂于皮毛上标号。常用的方法:
1号 --- 左前腿
2号 --- 左腰部
3号 --- 左后腿
4号 --- 头部
5号 --- 正中
6号 --- 尾根部
7号 --- 右前腿
8号 --- 右腰部
9号 --- 右后腿
10号 ---不标记
2、实验动物的捉持(大、小鼠)
(1)小鼠的捉持 用右手提起鼠尾,放在粗糙物(如鼠笼盖)上面,向后轻拉鼠尾;用左手拇指和食指捏住其两耳颈背部皮肤,将小鼠固定在掌中,使其腹部朝上,然后以无名指和小指夹住鼠尾或小鼠的左后肢。
(2)大鼠的捉持 捉持和固定方法基本同小鼠,无经验者可戴上防护手套,并应动作轻柔。用右手捉住鼠尾,放在鼠笼盖上,向后轻拉鼠尾;左手掌面向鼠背,食指和中指压住鼠的头顶,拇指和无名指分别从鼠的两腋下插入,将鼠的两前肢卡住;或拽紧鼠后颈及后背皮肤即可。
3、实验动物的给药方法(大、小鼠)
(1)小鼠的给药方法
灌胃(ig):将小鼠固定后,使颈部拉直,右手持装有灌胃针头的注射器,自口角插入口腔,压其头部,使口腔与食道成一直线,沿上腭壁向鼠口腔的后下方轻轻插入食道。如遇阻力,可将针头抽出再插,以免刺破食管或误入气管。一般给药量为0.1-0.3ml/10g(体重)。
皮下注射(H或sc):常在背部皮下。轻轻捏起背部皮肤,将注射针头刺入皮下,稍稍摆动针头,若容易摆动则表明针尖位于皮下。然后注入药液。一般给药量为0.1-0.20ml/10g(体重)。
腹腔注射(ip):左手固定动物,右手持注射器,从下腹部外侧,呈45度角刺入腹腔,进针约3~5mm(注意:进针不宜过深,以免伤及肝脏和脾脏。注药前回抽一下,无回血时再注药)。一般给药量为0.1-0.3ml/10g(体重)。
肌内注射(im):多注射于后肢股部肌肉,一般每侧不超过0.1ml。
尾静脉注射(iv):将小鼠置于固定筒内,使尾部露在外面,用70%~75%的乙醇棉球擦尾部,或将鼠尾浸入45~59ºC温水中,待尾部左右侧静脉扩张后,左手拉尾,右手进针。一般给药量为0.1-0.2ml/10g
(2)大鼠的给药方法
均同小鼠。一般情况下,灌胃剂量为1~2ml/100g,皮下注射、尾静脉注射<1ml / 只,腹腔注射为1.5ml /只,肌内注射为0.1~0.2ml/只。此外大鼠尚有舌下静脉给药的方法。
4、实验动物给药量的计算
(1)药物浓度的表示方法
溶液的质量(g)
百分浓度(%)= ————————— ×100%
溶液的体积(ml)
(2)实验动物给药剂量一般按mg/kg(或g/kg)计算。为了方便,大鼠和豚鼠可按每100g计算,小鼠可按每10g计算。
给药剂量=药物浓度×给药体积
(3)给药容量的计算:从已知药的浓度和已知给药剂量算出相当于每1kg体重应给药的毫升数(ml)。
例:小鼠体重22g,腹腔注射盐酸吗啡10mg/kg, 药物浓度为0.1%, 应注射多少毫升?
已知:药物浓度:0.1%=0.1g/100ml=100mg/100ml=1mg/ml
给药剂量:10mg/kg=10ml/kg
小鼠体重:22g=0.022kg
则:10ml/kg×0.022kg=0.22ml
或换算成ml/10g来计算较为方便:10ml/kg=0.1ml/10g。这样再计算其他小鼠的给药量就很方便。
5、实验动物的处死方法
实验结束后,常须将动物处死,常用的处死方法有:
(1)颈椎脱臼法 此法常用于小鼠。用左手拇指、食指或镊子用力压住小鼠的后头部,同时用右手抓住鼠尾用力向后上方牵拉,使之颈椎脱臼,鼠立即死亡。
(2)空气栓塞法 此法常用于家兔的处死。用注射器将空气快速注入静脉,可使动物立即死亡。
(3)击打法 适用于较小的动物,如家兔、大鼠和小鼠等。提起动物的尾部,用力敲击动物头部,或用要木锤打击头部,致使动物死亡。
(4)断头法 此法适用于蛙、蟾蜍、小鼠和大鼠。用剪刀将动物头部剪断,由于脊髓娄离且大量出血,动物很快死亡。
二、实验记录的内容和实验报告的写作
1、 实验记录
实验记录是将实验内容如实地记录下来,长期保存备用。其基本原则是真实、及时、准确、完整,实验过程中应认真做好实验记录。内容一般应包括:
(1)时间、天气、温度;
(2)实验标本:动物的种类、体重、标记和标号及如何分组等。
(3)实验药物:药物的来源、批号、剂型、浓度、剂量及给药途径。
(4)实验进程、步骤和方法的详细记录。
(5)观测指标的变化和原始的描记图纸。
2、实验报告的写作
实验报告要实事求事地反映实验的基本过程,并要对实际所得结果进行整理、计算、统计学处理,然后进行科学地分析讨论,进一步阐明实验的目的和意义。一般包括以下内容:
[实验目的]
[实验材料] 包括仪器、药品和动物。要尽可能详细、具体、明确。
[实验方法] 可简明扼要地叙述,但关键环节或步骤必须写清楚。
[实验结果] 应根据实验获得的数据进行整理,并可对一个教学实验小组或全实验室的数据进行整理、归纳、分析和对比,尽量总结出图表。尤其有观察时效关系的,描出时效曲线,一目了然。数据须进行统计学处理,选择的统计学方法要恰如,检验效率要高。
[讨论]和[结论] 讨论与结论是报告的核心,应包括对实验结果的分析、思考题的探讨、实验、实验方法及实验中出现异常现象的分析、认识、体会和建议等。
三、药理学总论的实验
1、药物剂量对药物作用的影响
[实验目的] 了解药物剂量与药物作用的关系。
[实验材料] 小白鼠、鼠笼、注射器及针头、小烧杯、天平、0.05%、0.4%和1%的戊巴比妥钠溶液。
[实验方法] 取小鼠3只,分别称重,标记,观察其一般活动状态和痛觉反应。然后分别腹腔注射不同浓度的戊巴比妥钠溶液:1号鼠5mg/kg (即0.05%的戊巴比妥钠溶液0.1ml/10g);2号鼠40mg/kg (即0.4%的戊巴比妥钠溶液0.1ml/10g);3号鼠100mg /kg (即1%的戊巴比妥钠溶液0.1ml/10g);给药后随时观察各鼠的反应,注意其不同点。
2、给药途径对药物作用的影响
[实验目的] 比较硫酸镁口服给药和注射给药的不同药理作用。
[实验材料] 小白鼠、鼠笼、注射器、小鼠灌胃针头、小烧杯、10%硫酸镁溶液等。
[实验方法] 取小鼠2只,称重,标记,观察小鼠的一般活动情况。1号鼠肌内注射10%硫酸镁溶液0.1ml/10g;2号鼠灌胃给10% 硫酸镁溶液0.1ml/10g。观察两只小鼠给药后行为活动等有何变化并记录之。
3、药物的拮抗作用
[实验目的] 观察药物的拮抗作用。
[药品材料] 小白鼠、鼠笼、小鼠灌胃器、1ml注射器、10%硫酸镁溶液、5%氯化钙溶液等。
[实验方法] 取小白鼠2只,观察正常活动情况,腹腔注射给10%硫酸镁溶液0.1ml/10g ,1号鼠迅速由腹腔注射5%氯化钙溶液0.1ml/10g ,继续观察小鼠反应有何变化。
[报告要点]
药物剂量与药物作用的关系
[思考题]:不同的给药剂量和不同的给药途径对药物作用的影响。
[注]
1、 小鼠的一般活动状况可通过观察翻正反射:提起小鼠尾巴,将小鼠腹部朝上放于台面上,小鼠立即翻正过来,说明翻正反射存在。如翻正反射减弱或消失说明小鼠的活动状况差。
2、观察小鼠的痛觉反应:以手掐鼠尾,如痛觉反应存在可有挣扎或竖尾反应。
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