幽门螺杆菌分型检测芯片

幽门螺杆菌分型检测芯片

概述

幽门螺杆菌分型检测芯片是与幽门螺杆菌分型检测设备(生物芯片诊断系统)匹配使用的部件,采用基因工程表达、天然提纯和人工合成待测微生物的特异性抗原(抗体),将抗原或者抗体以微矩阵形势固定于硝酸纤维素膜(NC膜)上,待检样本中的特异性抗体与之发生特异性免疫结合反应,并在NC膜上形成抗原—抗体免疫复合物,再用金标记或酶标记的二抗与该复合物特异性结合,直接显色或者催化相关底物显色,最终产生生物芯片阅读仪可捕捉和分析的信号。

优势

幽门螺杆菌分型检测芯片产生的信号通过图像采集、光电模数转换和量化后形成数字化的图像文件,实现对生物信号定性和定量的分析。

生物芯片诊断系统可以同时读取6张芯片数据,可一直连续不断读取芯片,自动一键式采样分析和出具检测报告,大大缩短检测时间。

芯片适用范围

1、普通人群筛检

2、HP感染血清流行病学调查,特别适合青少年HP感染状况的调查

3、急慢性胃炎(慢性浅表性胃炎、慢性肥厚性胃炎、慢性萎缩性胃炎)、胃溃疡、十二指肠球部溃疡、胃癌等多种消化道疾病患者的辅助诊断。

4、HP清除效果观察。

芯片操作要点

1、芯片检测的样本为人体的血清或血浆标本。血清标本按常规方法由静脉采集,采血后,室温静置1-2小时,待血液凝固、血块收缩后,再于3000转/分钟,离心15分钟,吸取血清待用。

2、7天内检测的血清样本可放置4℃冰箱保存。标本放置在-20℃冰箱可保存3个月。

3、标本应避免溶血或反复冻融。

4、浑浊或有沉淀的标本应8000转/分钟离心后取上清检测。需要保存的血清在采集,保存过程中应注意无菌操作。

5、一次幽门螺杆菌分型检测芯片操作过程一般在5-10分钟左右完成。

芯片报告的阅读

幽门螺杆菌分型检测芯片

幽门螺杆菌分型检测芯片

芯片报告示例1

检测结果一栏的减号代表阴性,即未感染;加号代表阳性,即为感染。根据该位女士的分型检测报告来看:第一项细胞毒素相关蛋白A(CagA)和第二项细胞空泡毒素蛋白酶A(VacA)为阴性表示未感染致病力较强的幽门螺杆菌;第三项尿素酶(Ure)为阳性表示感染了的幽门螺杆菌;第四项热休克蛋白60(Hsp60)阴性表示感染的HP不致癌也不会造成严重的胃炎;第五项氮素还原酶(RdxA)阴性表示没有产生甲硝锉类药物的耐药性。所以我们根据这份分型检测报告可以得出结论该女士感染的幽门螺杆菌为非致病菌,感染后一般只是引起轻度慢性浅表性胃炎,利用清幽咀嚼片清除幽门螺杆菌后做好日常预防感染工作即可。

芯片报告示例2

幽门螺杆菌分型检测芯片

比尔夫专家根据该位男士的分型检测报告来看:第一项、第二项、第三项内容均为阳性表示感染了幽门螺杆菌,并且为致病力较强的幽门螺杆菌;第四项、第五项为阴性有说明虽然感染的幽门螺杆菌毒性较强,但还不会带来胃癌和严重胃炎的困扰。所以我们根据这份分型检测报告可以得出结论该男士的感染症状应该引起重视,并且积极的开展清幽工作,正确清除幽门螺杆菌后就能彻底恢复健康。

 

第二篇:幽门螺杆菌分型检测90例临床分析

幽门螺杆菌分型检测90例临床分析

自从19xx年warren和marshall从人胃黏膜中分离培养出幽门螺杆菌(hp)后,20多年的研究表明幽门螺杆菌感染是慢性活动性胃炎的主要致病菌,消化性溃疡的重要致病因素,是胃癌重要的诱发因素,世界卫生组织将其列为一类致癌物。最新的研究表明hp的致病性与菌型差异、敏感的年龄及机体的反应性有关[1]。作者采用免疫印迹法检测90例hp感染者血清中多种hp抗体,并依此对hp进行免疫分型,探讨不同血清分型hp与慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡和胃癌的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取20xx年1月至20xx年6月本科门诊及住院病人90例。男52例,女38例;年龄21~58岁,平均37.7岁。均经胃镜检查诊断确诊为hp阳性;其中内镜下胃十二指肠无病变者为对照组,共15例,其余75例为病例组,并依据病理诊断分为慢性胃炎(cg) 31例,胃溃疡(gu) 12例,十二指肠溃疡(du) 23例,胃癌(gca) 9例。

1.2 方法 幽门螺杆菌免疫印迹检测试剂盒选用深圳××有限公司。抽取待检者静脉血1.5~2 ml,分离血清,按说明书操作。将提取的hp全菌体抗原(含有caga、vaca和尿素酶a、b亚单位等)用聚丙烯酰胺凝胶电泳按分子量大小不同依次分开,电转印至印迹膜上,与待检者血清反应,如果被检血清中含有hp抗体,会与印迹膜上相应hp抗原结合,加入酶联第二抗体和显色剂,hp抗原位置即出现显色带,与hp抗体标准区带比较,即可判断出何种hp感染。

1.3 hp感染判断标准 hp i型:免疫印迹技术显示caga和/或vaca抗体阳性;hp ii型:免疫印迹技术显示仅尿素酶抗体阳性,caga和vaca抗体阴性;hp阴性:caga、vaca和尿素酶抗体均阴性。

1.4 统计学处理 采用χ2检验。

2 结果

在90例确诊的hp感染者中,免疫印迹检测hp抗体阳性88例,阳性符合率97.78%。病例组中hp i型阳性率在慢性胃炎(cg),胃溃疡(gu),十二指肠溃疡(du),胃癌(gca)中分型结果见表1。

表1 90例hp感染者免疫印迹分型结果(n,%) 略

3 讨论

近年来对hp生物学特性、分型和致病作用等进行了较深入的探讨,在hp致病因素中,空泡形成毒素(vaca)、细胞毒素相关蛋白(caga)起重要作用。国外研究将hp分为两型[2],i型hp菌株能产生空泡毒素(vaca)和细胞毒素相关蛋白(caga),可破坏细胞顶端连接复合体的结构及功能。caga不仅能够破坏顶端连接,而且干扰上皮细胞分化,降解基膜,使上皮细胞失去极性及细胞黏附性,伸出迁移伪足,具有侵袭性[3];因此i型hp能导致广泛的组织炎症,促使溃疡病的发生发展。ⅱ型hp为不产生细胞毒素菌株,即caga和vaca阴性株,

这一类hp菌株毒性较小,感染后一般只是引起轻度慢性浅表性胃炎而无明显临床症状。

作者检测了90例确诊的hp感染者血清中caga、vaca和尿素酶抗体,其中对照组为内镜下胃十二指肠无病变,共15例,病例组75例又根据病理诊断结果分为cg 31例,gu 12例,du 23例及gca 9例。免疫分型是指采用免疫学方法,利用抗原抗体反映检测hp感染者血清中针对hp特异抗原的抗体进行检测[4]。作者应用免疫印迹技术显示血清中其免疫活性蛋白区带,细胞毒素相关蛋白(caga)与128、116和110kd区带有关,空泡毒素(vaca)蛋白与95和91kd区带有关。因此通过免疫印迹试验,可成功检测出细胞毒素相关蛋白a(vaca)和空泡毒素相关蛋白a(vaca)抗体的情况,从而将hp分为i型及ⅱ型。

本结果显示,胃、十二指肠疾病病人(病例组)血清hp i型的阳性率73.33% (55/75),而对照组仅为20.00%(3/15),差异有显著性(p<0.01),说明i型hp能产生vaca和caga,有较强的致病力,是胃、十二指肠疾病的主要致病因素。其中hp i型阳性率在cg,gu,du,gca中分别为58.06%,83.33%,86.96%,77.78%,提示i型hp感染更易导致较严重的消化道疾病。而ii型hp可能多数引起慢性胃炎,很少引起严重的消化道疾病。

免疫印迹法检测幽门螺杆菌抗体结果分析

【摘要】 目的 评价免疫印迹法检测ⅰ型和ⅱ型幽门螺杆菌抗体的价值。 方法 采用免疫印迹法对门诊随诊患儿227例进行分型检测。 结果 检出hp阳性85例,阳性率为37.44%,其中ⅰ型58例,占68.23%;ⅱ型27例,占31.76%。 结论 免疫印迹法检测幽门螺杆菌抗体具有较高的敏感性和特异性。方法简单,时间短,对临床治疗有重要的指导意义。

【关键词】 幽门螺杆菌 免疫印迹法 空泡毒素 细胞毒素相关基因a

幽门螺杆菌(helicobacter,简称hp)是慢性胃炎﹑消化性溃疡和非溃疡性消化不良的重要因素,是胃癌的危险因子。hp在全球人群的感染率超过50%,而且随着年龄的增加有递增趋势[1]。表达空泡毒素(vaca)蛋白和细胞毒素相关基因a(caga)的hp菌株致病力强。本文对患儿血清用免疫印迹法进行检测并分型,探讨不同型别hp与患者的关系,及时指导临床治疗。

1 材料与方法

1.1 样本 于20xx年8月~20xx年8月到我院门诊患儿,抽血2ml,留取血清待查。

1.2 试剂与方法 采用免疫印迹法进行分型,试剂盒由上海元谷科技发展有限公司提供。本试剂原理是先将幽门螺杆菌的混合抗原用sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳,按分子量大小不同分开,再将其转移至硝酸纤维膜,如果被检血清有相应抗体,应用酶联免疫吸附反应,就会在抗原的相应位置出现显色区带,即可判断hp感染类型。

1.3 抗体判断 将印迹膜上端起始线与标准带起始线对齐,在对应位置出现带型既可判断为相应的抗体:①128kd﹑116kd出现显色带或128kd单独出现,可同时伴有110kd

显色判断为caga(+)抗体;②95kd﹑91kd出现显色或95kd单独出现,可同时伴有87kd显色带判断为vaca(+)抗体;③66kd出现显色带判断为尿素酶b(ureb)(+)抗体;④30kd出现显色带判断为尿素酶a(urea)(+)抗体。

1.4 分析结果 ①caga或vaca抗体同时阳性或任意一种阳性,为ⅰ型hp感染;②仅出现尿素酶a和尿素酶b抗体阳性,为ⅱ型hp感染;③caga, vaca及ureas三种抗体阴性,既为hp抗体阴性。

2 结果

2.1 227例患儿 hp感染85例,阳性率为37.44%,其中ⅰ型58例,占68.23%;ⅱ型27例,占31.76%,见表1。

表1 227例患儿hp感染结果(略)

2.2 不同年龄段hp感染情况 见表2。

表2 1~14岁不同年龄段hp感染情况(略)

3 讨论

目前临床上根据hp菌株及是否表达相应蛋白将hp分为两种类型:ⅰ型为产细胞毒素hp菌株,能产生空泡毒素和细胞毒素相关蛋白,其致病力强,能导致广泛的炎症,ⅱ型为不能产生细胞毒素的hp,不含细胞毒素相关基因a(caga),不表达vaca毒素和caga蛋白,这类菌株毒性小,感染后一般仅引起轻度慢性浅表性胃炎而无明显的临床症状[2]。据文献[3,4]报道,caga蛋白是ⅰ型hp致病性的标志物,现已确认hp是慢性活动性胃炎﹑消化性溃疡﹑胃黏相关淋巴组织(malt)淋巴瘤和胃癌的致病因素。19xx年世界卫生组织/国际癌症研究机构(who/iarc)将幽门螺杆菌定为ⅰ型致癌原。hp作为胃癌的ⅰ类致癌因子,其中caga与 vaca是在致癌过程中关键的毒力因子。hp穿透粘液层在胃上皮细胞表面定居,对胃上皮细胞和胃粘膜屏障等造成破坏作用,刺激上皮细胞增殖,改变增殖与凋亡的关系。vaca可使上皮细胞空泡样变性﹑损伤﹑坏死及溃疡,caga本身无细胞毒性,但与vaca的转录等功能有关。另外,我国hp成人感染率已达60%~80%[5],血清学检查绝大部分均为阳性,因此,hp进行分型检测特别重要,能及时指导临床治疗。本文通过免疫印迹法对227例患儿进行caga、vaca、urea、ureb抗体检测,结果显示:hp感染85例,阳性率为37.44%,略低于成人感染率[5],而且hp感染率随着年龄增加而增加,与文献[1]报道基本一致。免疫印迹法是一种可靠的诊断hp感染的非入侵性方法,它的特异性和敏感性都较高且方法简单,且能定性分析蛋白质各组分,与其它方法相比,具有操作简单易行不需要昂贵的仪器,安全准确等优点,特别适合不适宜进行胃镜检查或不需要胃镜检查的患者,病人易于接受,及时指导临床治疗并且可用于流行病学调查。

幽门螺杆菌分型检测90例临床分析

【关键词】 幽门螺杆菌

自从19xx年Warren和Marshall从人胃黏膜中分离培养出幽门螺杆菌(HP)后,20多年的研究表明幽门螺杆菌感染是慢性活动性胃炎的主要致病菌,消化性溃疡的重要致病因素,是胃癌重要的诱发因素,世界卫生组织将其列为一类致癌物。最新的研究表明HP的致病性与菌型差异、敏感的年龄及机体的反应性有关[1]。作者采用免疫印迹法检测90例HP感染者血清中多种HP抗体,并依此对HP进行免疫分型,探讨不同血清分型HP与慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡和胃癌的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取20xx年1月至20xx年6月本科门诊及住院病人90例。男52例,女38例;年龄21~58岁,平均37.7岁。均经胃镜检查诊断确诊为HP阳性;其中内镜下胃十二指肠无病变者为对照组,共15例,其余75例为病例组,并依据病理诊断分为慢性胃炎(CG) 31例,胃溃疡(GU) 12例,十二指肠溃疡(DU) 23例,胃癌(GCa) 9例。

1.2 方法 幽门螺杆菌免疫印迹检测试剂盒选用深圳××有限公司。抽取待检者静脉血1.5~2 ml,分离血清,按说明书操作。将提取的HP全菌体抗原(含有CagA、vacA和尿素酶A、B亚单位等)用聚丙烯酰胺凝胶电泳按分子量大小不同依次分开,电转印至印迹膜上,与待检者血清反应,如果被检血清中含有HP抗体,会与印迹膜上相应HP抗原结合,加入酶联第二抗体和显色剂,HP抗原位置即出现显色带,与HP抗体标准区带比较,即可判断出何种HP感染。

1.3 HP感染判断标准 HP I型:免疫印迹技术显示CagA和/或VacA抗体阳性;HP II型:免疫印迹技术显示仅尿素酶抗体阳性,CagA和VacA抗体阴性;HP阴性:CagA、VacA和尿素酶抗体均阴性。

1.4 统计学处理 采用χ2检验。

2 结果

在90例确诊的HP感染者中,免疫印迹检测HP抗体阳性88例,阳性符合率97.78%。病例组中HP I型阳性率在慢性胃炎(CG),胃溃疡(GU),十二指肠溃疡(DU),胃癌(GCa)中分型结果见表1。 表1 90例HP感染者免疫印迹分型结果(n,%) 略

3 讨论

近年来对HP生物学特性、分型和致病作用等进行了较深入的探讨,在HP致病因素中,空泡形成毒素(VacA)、细胞毒素相关蛋白(CagA)起重要作用。国外研究将HP分为两型[2],I型HP菌株能产生空泡毒素(VacA)和细胞毒素相关蛋白(CagA),可破坏细胞顶端连接复合体的结构及功能。CagA不仅能够破坏顶端连接,而且干扰上皮细胞分化,降解基膜,使上皮细胞失去极性及细胞黏附性,伸出迁移伪足,具有侵袭性[3];因此I型HP能导致广泛的组织炎症,促使溃疡病的发生发展。Ⅱ型HP为不产生细胞毒素菌株,即CagA和VacA阴性株,这一类HP菌株毒性较小,感染后一般只是引起轻度慢性浅表性胃炎而无明显临床症状。

作者检测了90例确诊的HP感染者血清中CagA、VacA和尿素酶抗体,其中对照组为内镜下胃十二指肠无病变,共15例,病例组75例又根据病理诊断结果分为CG 31例,GU 12例,DU 23例及GCa 9例。免疫分型是指采用免疫学方法,利用抗原抗体反映检测HP感染者血清中针对HP特异抗原的抗体进行检测[4]。作者应用免疫印迹技术显示血清中其免疫活性蛋白区带,细胞毒素相关蛋白(CagA)与128、116和110KD区带有关,空泡毒素(VacA)蛋白与95和91KD区带有关。因此通过免疫印迹试验,可成功检测出细胞毒素相关蛋白A(VacA)和空泡毒素相关蛋白A(VacA)抗体的情况,从而将HP分为I型及Ⅱ型。

本结果显示,胃、十二指肠疾病病人(病例组)血清HP I型的阳性率73.33% (55/75),而对照组仅为

20.00%(3/15),差异有显著性(P<0.01),说明I型HP能产生VacA和CagA,有较强的致病力,是胃、十二指肠疾病的主要致病因素。其中HP I型阳性率在CG,GU,DU,GCa中分别为58.06%,83.33%,86.96%,77.78%,提示I型HP感染更易导致较严重的消化道疾病。而II型HP可能多数引起慢性胃炎,很少引起严重的消化道疾病。

在作HP根除治疗时,可先行HP分型,测定毒力菌株,可指导用药,减少治疗费用以及耐药菌株的产生。因此临床上检出HP后应进一步对HP检测分型,有助于对胃十二指肠疾病的正确诊断和治疗。

【参考文献】

1 张万岱,徐智民. 幽门螺杆菌免疫分型的研究. 世界华人消化杂志, 2002, 10(5): 509~512.

2 Telford JL, Covacci A, Ghiara P, et al. Unravelling the pathogenic role of Helicobacter Pylori in peptic ulcer: potential new therapies and vaccines. Trends biotechol, 1995, 12: 420~426.

3 Amieva MR, Vogelmann R, Covacci A, et al. Disruption of the epithelial apical- junctional complex by Helicobacter pylori CagA. Science, 2003,300: 1430~1434.

4 余悠悠,沈霞. 免疫印迹法检测幽门螺杆菌及其分型的临床应用. 现代免疫学, 2004, 24 (6): 511~513.

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