实验5  EDTA标准溶液的配置和标定

1.       实验目的

① 配制EDTA标准溶液；

② 用基准标定EDTA标准溶液；

③ 掌握钙指示剂的应用特点。

2.       实验原理

① EDTA可以用基准、基准ZnO等标定，但当EDTA标准溶液被用于滴定水溶液中的时，最适合于标定其浓度的基准物质是；

② 标定反应：

在pH约为12.5的条件下：

3.       实验试剂

EDTA，，钙指示剂，1:1HCl溶液，20%NaOH

4.       实验步骤

① 称约4.5g EDTA至250ml烧杯，加约100ml蒸馏水加热溶解，冷却后转至1000ml试剂瓶，加600ml蒸馏水，摇匀，配制600ml 0.02mol/L EDTA标准溶液；

② 用分析天平称取0.4~0.6g基准至150ml烧杯，滴加少量蒸馏水润湿，盖上表面皿，从烧杯嘴滴加1:1HCl溶液，使全部溶解，加10ml蒸馏水加热微沸赶走，冷却后转移至250ml容量瓶，定容；

③ 用移液管移取25ml上述溶液至250ml锥形瓶，加约100ml蒸馏水及12ml 20% NaOH溶液，再加适量钙指示剂，用待标定的EDTA溶液用酸式滴定管滴定至溶液由酒红色变成蓝色平行实验两次；

5.       实验数据记录与处理

计算公式：

6.       结果讨论与思考

在配位滴定中为什么要控制溶液的pH？在本试验中为什么要控制溶液的pH在12.5左右？

答：①酸度直接影响形成的MY(金属离子和EDTA的配位化合物)的稳定性；②指示剂是弱酸弱碱有色物质，不同酸度其颜色不同，指示剂本身的颜色要与指示剂与金属离子配合物的颜色有明显差异，否则无法指示滴定终点，由此指示剂对溶液酸度有明确的要求，钙指示剂在pH=12～14之间显蓝色；③标定的EDTA过程可用下列反应表示：H2Y+M=MY+2H+，显然，滴定过程是酸度升高的过程。

 

第二篇：溶液配制

组织培养实验有关试剂的配制：

MS培养基储备液的配制

次氯酸纳消毒液：取30ml次氯酸纳溶液，用蒸馏水定容至100ml。现配现用。

75%的酒精：75ml的95%的酒精加水定容至95ml。

0.2％的升汞溶液：称取HgCl₂ 20克，加蒸馏水至4000ml。

1N 盐酸：取8.25ml的浓盐酸，加蒸馏水定容至100ml。

1N NaOH：称8g NaOH，用蒸馏水定容至200ml。

0.1mg/ml的2,4-D溶液：取25mg的2,4-D，加入少量95%的酒精和1N的NaOH溶解，再加蒸馏水定容至250ml。

0.1mg/ml 的6-BA溶液：取25mg的6-BA，用少量1N的盐酸溶解，再加蒸馏水定容至250ml。

遗传转化与GUS基因检测的试剂配制

LB培养基的配制：
将下列组分溶解在0.9L水中：

如果需要用1N NaOH（10～15ml）调整pH至7.0，再补足水至1L

10ml 的10mmol/l的AS（乙酰丁香酮）母液（100x）配制：称19.6mg的AS，先溶于少量甲醇中，然后慢慢加蒸馏水定容至10ml，过滤除菌，分装成200ul/管（每组1管），使用时将200ul的AS母液加入20ml的MS液体培养基中。

50mmol/l的磷酸钠缓冲液（pH 7.0）：A液：取NaH₂PO₄.2H₂O 3.12g溶于蒸馏水，定溶至100ml。 B液：取Na₂HPO₄.12H₂O 7.17g溶于蒸馏水，定溶100ml。取A液39ml与B 液61ml混合，定容至400ml，调PH至7.0。

50mmol/L铁氰化钾母液：称3.295g，用蒸馏水定容至200ml

50mmol/l亚铁氰化钾母液：称4.224g ，用蒸馏水定容至200ml。

0.5mol/l EDTA母液（pH8.0）：

药品             分子量        100ml           500ml

EDTA Na₂ 2H₂O    372.24        18.6g            93.06g

双蒸H₂O                        80ml            400ml

用NaOH调PH至8.0             6g              10g

DdH₂O定容至                   100ml           500ml

GUS检测液的配制：100mgGluc，先溶于1ml的DMF。取80ml 50mmol/l的磷酸钠缓冲液（pH 7.0），加入1ml 50mmol/L铁氰化钾、1ml 50mmol/L亚铁氰化钾和2ml 0.5mol/l EDTA（PH 8.0），再加入已溶解的Gluc，再加20ml的甲醇，混匀。（配制方法参考《现代植物生理学实验指南》p348）

将配好的GUS检测液分装于1.5ml的小管中（1ml/管，1组1管），－20°C保存备用。

鲜花保鲜及超氧物歧化酶活性测定

50mmol/l的磷酸钠缓冲液（pH 7.0）：

A：NaH₂PO₄.2H₂O 3.12g溶于蒸馏水，定溶至100ml。

B液：Na₂HPO₄.12H₂O 7.17g溶于蒸馏水，定溶至100ml。

取A液39ml与B 液61ml混合，定容至400ml。PH7.0。

50mmol/l的磷酸钠缓冲液（pH 7.8）：

取A液8.5ml与B 液91.5ml混合，定容至400ml。PH7.8。

SOD提取液：50 mmol/L磷酸缓冲液 [含0.1mmol/L EDTA；0.3%(w/v) Triton X-100；4%（w/v）聚乙烯聚吡咯烷酮（pvpp,polyvinylpolyrrolidone）, pH7.8]  pvpp比较难溶，多晃动几次，再静置一会，慢慢就会溶解。

14.5 mmol/L dl－甲硫氨酸：即2.163克/L，称2.163g，用蒸馏水定容至1L（较难溶，需稍微加热）。

3umol/L EDTA： 每500ml中加3ul0.5mol/L的EDTA母液，用50 mmol/L磷酸缓冲液配制。

2.25mmol/L NBT（1.84克/L）： 称0.092克，溶于50ml的50 mmol/L磷酸缓冲液磷酸缓冲液中。避光保存，现配现用.

60 umol/L核黄素：称2.25mg溶于100ml的50 mmol/L磷酸缓冲液中，避光保存，现配现用。

10000ppm6－BA：即0.01克/L，称25mg6-BA，先加少量酒精和1mol/L的NaOH溶解。再用蒸馏水定容至250ml。

0.25mg/ml的GA母液：称25mg的GA，先用少量95%的酒精溶解，再用水定容至100ml。

3%的8-羟基奎林（8-HQ）：难溶于水，用柠檬酸溶液配制。生成8-羟基喹林柠檬酸盐（羟基喹林：柠檬酸摩尔数比为3:1），该盐能溶于水。先将所需柠檬酸溶于50ml左右的水中，然后将所需8-羟基喹林溶于其中，不断搅拌10-20min。待溶解后再稀释至所需倍数。

 1mg/ml 2，4－D：取25mg的2,4-D，加入少量95%的酒精和1N的NaOH溶解，再加蒸馏水定容至250ml。

5克/L柠檬酸溶液：称5g 柠檬酸，用蒸馏水定容至1L。

 

阿斯匹林、VitC、蔗糖、葡萄糖、AgNO₃ 、Na₂S₂SO₄、K₂HPO₄、Ca（NO₃）₂、 KAL(SO₄)₂、Nacl、水杨酸（25mg/ml）、硼酸纳、CuSO₄、KNO₃、MgSO₄ 、（NH4）₂SO₄、高锰酸钾、乙醇等试剂，根据学生各自设计的保鲜液需要，由学生自己配制。

叶绿素理化性质的鉴定和含量测定实验试剂

30%KOH-甲醇溶液：用250ml的烧杯称60gKOH，慢慢加入甲醇，在通风厨中进行，沸腾，不断搅拌，待完全溶解后，最后加甲醇至烧杯200ml刻度线即可。该试剂要现配现用。

6N HCl（HCl:H₂O＝1:1）：等量的浓 HCl＋等量的蒸馏水。

10%醋酸：10ml的冰醋酸中加入90ml的蒸馏水。

10%氨水：10ml的氨水中加入90ml的蒸馏水。

NaCl ，石油迷（60-90^。C）、丙酮，MgCO₃、石英砂，醋酸铜Cu(Ac)₂等试剂由学生根据具体情况添加。

植物形态解剖实验的试剂配制

1%的番红水溶液：称1g番红，溶解于100ml的蒸馏水中。

1%的碘－碘化钾溶液：碘、碘化钾各1g溶于100ml的蒸馏水中。

0.02%的硼酸溶液：0.1g硼酸溶解于500ml的蒸馏水中。

10%的蔗糖溶液：10g蔗糖用80ml的蒸馏水溶解，最后用蒸馏水定容至100ml。

土壤全磷分析实验的试剂配制

钼锑储存液：浓H₂SO₄（98%-99%）153ml 缓慢倒入约400ml水中，搅拌，冷却。10g钼酸铵溶解于约60℃的300ml的水中，冷却。然后将浓H₂SO₄溶液缓缓倒入钼酸铵溶中，再加入100ml0.5%的酒石酸锑钾溶液，最后用水稀释至1升，避光储存。此储存液含1%的钼酸铵，5.5mol/l的1/2 H₂SO₄ 。

钼锑抗显色剂：1.5g抗坏血酸溶解于100ml的钼锑储存液中。

二硝基酚指示剂：0.2g 2,6-二硝基酚或2,4-二硝基酚溶解于1000ml水中。

5 ppm P 标准溶液： 0.4390g KH₂PO₄ （二级，105℃烘过2小时）溶解于200ml水中，加入5ml浓H₂SO₄转入1升容量瓶中，用蒸馏水定容。此为100ppm P标准溶液，可以长期保存。取此溶液稀释20倍，即为5ppmP标准溶液，只溶液不宜久存。

浓硫酸（98%-99%）

高氯酸HClO4(70-72%)