药物对抗中枢兴奋药抗惊厥的作用

【试验目的】

学习抗惊厥药的筛选方法，也就是通过观察药物对中枢兴奋药诱发惊厥的影响。本试验是观察苯巴比妥和地西泮（安定）对二甲弗林诱发小鼠惊厥的影响。

【试验原理】

二甲弗林是直接兴奋呼吸中枢的中枢兴奋药，剂量过大可引起整个中枢广泛兴奋，诱发惊厥。镇静催眠药等中枢抑制药均可明显抑制中枢，从而产生抗惊厥的作用。

【试验材料】

器材：注射器，电子称

药品：0.07%二甲弗林，0.5%苯巴比妥钠，0.1%地西泮溶液，生理盐水。

动物：小鼠12只，18-22 g，雌雄不限。

【试验方法】

1、小鼠编号，称重，分三组，4只/组

2、给药：

A组（生理盐水组）：腹腔注射生理盐水，0.1 ml/10g → 30 min后，皮下注射二甲弗林，0.1 ml/10 g

→观察惊厥症状（痉挛、跌倒、强直或死亡）及各症状出现的时间；

B组（苯巴比妥预处理组）：腹腔注射苯巴比妥钠，0.1 ml/10g → 30 min后，皮下注射二甲弗林，0.1

ml/10 g→观察惊厥症状（痉挛、跌倒、强直或死亡）及各症状出现的时间；

C组（地西泮治疗组）：皮下注射二甲弗林，0.1 ml/10 g → 记录惊厥发作（痉挛、跌倒、强直或死亡）及症状出现的时间，惊厥症状出现时立即腹腔注射地西泮，0.1 ml/10g

【试验结果】

【试验讨论】

【注意事项】

① 实验室环境要求安静，避免声、光刺激；

1

② 捉拿小鼠时动作轻柔，避免过度刺激引起小鼠活动增多而影响试验结果； ③ 小鼠禁食6-12小时，以增加觅食活动；

2

 

第二篇：《实验实训指导书》(药理学)

 实验一     药理学实验基本知识和技术

实验目的：1、掌握基本操作，锻炼动手、动脑能力；

2、更好地掌握药理学基本理论知识；

3、培养科学思维。

实验内容：一、药理实验的基本目的与要求

          二、实验动物：

1、动物的选择；

            2、动物的标记与捉拿、固定方法；

3、动物的取血方法（尾尖、眼眶静脉丛、摘眼球、断头）；

4、动物的给药方法（灌胃、腹腔、皮下、尾静脉）；

5、动物的麻醉方法；

6、动物的处死方法。

三、实验设计基本原则。

实验步骤：

一、药理学实验的基本目的与要求

药理学实验课在药理学教学中占有非常重要的地位。药理学实验课的目的在于通过实验验证药理学的基本理论，加深理解与掌握药理学的基本知识和规律；也是了解获得药理学知识的科学途径。同时，培养学生独立思考，独立工作，科学思维的能力；培养学生动手操作、分析问题和解决问题的能力；还应培养学生对科学工作的严肃的态度、严格的要求、严密的工作方法及实事求是的工作作风。

为了达到上述目的，要求做到下列事项：

1.   实验前：预习实验内容并复习相关理论知识；

2.   实验时：

（1） 实验分小组进行，实验前分工明确，实验时密切配合；

（2）确定实验仪器、药品、动物与实验指导相符时，将实验器材妥善安排，正确装置、保管；

（3） 实验操作按步骤进行，仔细观察实验中出现的现象，实事求是地做好记录；

（4）注意爱护动物、节约实验药品；

（5）实验过程中保持 实验室肃静、清洁。

3.   实验后：

⑴ 各组同学将实验动物处死，实验台擦干净，将实验方盘送回准备室；

⑵ 值日生搞好实验室卫生，将死亡动物送至指定场所；

⑶ 整理实验结果，经分析思考作出结论，按要求写出实验报告，按时交给指导老师。

实验报告的书写

1.  题目

2.  目的

3.  原理

4.  材料：实验动物，器材，药品

5.  方法：用自己的语言简单扼要描述出来；

6.  结果：要求真实、清楚；

7.  讨论：将实验结果进行比较、分析；实验中有哪些不足之处；结果异常或失败的原因；

8.  结论：将实验结果进行归纳总结，应带有提示性质。

二、实验动物

1、动物的选择：

药理学实验中常用的动物有青蛙、蟾蜍、小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、猫、狗、猴等。动物对药物的反应具有种属差异性，可根据实验目的和要求选用不同的实验动物。例如：

（1） 小白鼠：适用于需大量动物的实验，如某些药物的筛选，半数致死量的测定。也较适用于避孕药实验、抗炎镇痛药实验、中枢神经系统药实验、抗肿瘤药及抗衰老药实验等。

（2）大白鼠：比较适用于抗炎药物实验，血压测定、利胆、利尿药实验，也可用于进行亚急性和慢性毒性实验。

 （3）豚鼠：因其对组胺敏感，并易于致敏，故常被选用于抗过敏药、平喘药和抗组胺药的实验。也常用于离体心脏、心房、肠管实验。又因它对结核敏感，常用于抗结核病药的实验。

（4）家兔：常用于观察研究脑电生理作用，药物对小肠的作用。由于家兔体温变化敏感，也常用于体温实验，用于热原检查。

（5）狗：狗是记录血压，呼吸最常用的大动物。还可利用狗做成胃瘘、肠瘘，以观察药物对胃肠蠕动和分泌的影响。在进行慢性毒性实验时，也常采用狗。

（6）猴  是接近于人类的高级动物。神经系统比较发达，常用于观察药物对行为的影响。猕猴的月经周期和人一样，是研究生殖课题的首选动物。另外，新药临床前毒性评价，也需要使用猴。

2、动物的标记与捉拿、固定方法

（1）动物的标记

狗、兔等较大的动物可用特制的铝质号码牌固定在颈部或耳上。大鼠、小鼠和家兔多用染色法，一般用1％的苦味酸溶液（黄色）或5％中性红溶液（红色）涂于动物体表不同部位的皮毛处，代表不同号码。编号原则是先左后右，自前到后。

（2）动物捉拿、固定方法

 ①小白鼠

右手抓住其尾部放在鼠笼盖铁纱网上，用左手拇指及食指沿其背部向前抓起颈背部皮肤，并以左手的小指、无名指固定其尾部，便可将小鼠固定在手上。

②大白鼠

用右手提起尾部，放在粗糙面上，左手的拇指和食指捉其头部，其余三指夹住背腹部即可固定。

③ 豚鼠

豚鼠性情温和不咬人，用手握住躯干即可。

④家兔

可用一手抓住家兔颈背部皮肤，将兔提起，另一手托其臀部，使兔呈坐位姿势。在进行仰位手术操作时，可用绳带将其四肢仰位捆绑在兔手术台上。头部用兔头固定夹固定。

3、动物的取血方法

（1）小鼠和大鼠

①颈静脉或颈动脉取血：麻醉动物，背部固定，颈部去毛，碘酒消毒，切开皮肤，分离出动脉或静脉，将注射针平行刺入血管，慢慢回抽针栓即可取血。动脉取血时，亦可将远心端结扎，用动脉夹夹住近心端，在动脉中央剪一小口，插入聚乙烯管，然后放开动脉夹，血液可自动流出。兔和豚鼠也常用此方法取血，手术操作与大鼠相似。

②尾尖取血：将鼠固定在铁丝笼或特别筒内，使鼠尾露在外面。剪掉鼠尾（小鼠1mm～2mm；大鼠5mm～10mm），用拇指和食指由尾根向尾尖按捏，血液即从尾尖流出。小鼠每次可采血0.1ml，大鼠每次可采血0.5ml。注意：只剪去尾尖，如剪去过多组织，反而流血少。下次取血时，只需将尾尖血痂剪掉即可。

③眼球取血：左手持鼠，使眼球突出，并使头向下。右手持弯曲镊，钳夹一侧眼球根部，将眼球摘除。血液即可从断裂的眼眶动物、静脉涌出，血量约为鼠体重的4％～5％，适用于一次性取血。

④眼眶后静脉丛取血：固定鼠头部皮肤，轻轻向后压迫颈部两侧，使头部静脉回流受阻，眼球充分外突，用内径1～1.5mm的毛细血管 刺入下眼睑与眼球之间，轻轻向眼底部方向移动，血即可流入玻璃管内，一般两眼可各取一次。

⑤断头取血：用剪子剪断鼠头，立即将鼠颈部向下，提起动物，并对准已准备好的容器，可接取所需血液。小鼠可取血约1ml，大鼠可取血约8ml。

（2）家兔

①心脏取血：将家兔背位固定，在胸骨左缘3mm，第3～4肋间隙，触及心跳最明显部位，以8号针头刺入，即可有血流入注射器内，亦可抽取，如没刺入心脏，一定要将针提到 皮下改变方向，再重新刺入。

②耳缘静脉取血：将耳根部压紧，拔去耳缘毛，用酒精涂擦使血管扩张明显，以6～7号针头，针尖向离心方向刺入，缓慢抽取血液。

③股动脉、静脉取血：将家兔麻醉、背位固定，手术分离出股动脉或静脉，插入套管即可根据需要量取血。

4、动物的给药方法

  （1）小鼠、大鼠

①灌胃法(i.g.)：以左手固定鼠后，使其腹部朝上，颈部伸直。右手持配有灌胃针头的注射器，自口角插入口腔，再从舌面沿上腭进入食道。

②腹腔注射(i.p.)：以左手固定鼠，方法同灌胃，右手持注射器，取30度角将针头从下腹部向头端刺入腹腔。进针部位不宜过高，刺入不宜太深，以免伤及内脏。

③皮下注射(s.c.)：用左手固定鼠后，右手持注射器于拇指和食指捏起的皮肤处进针即可。

④静脉注射(i.v.)：将鼠置于特制的固定筒内或倒置的大漏斗下，让其尾部露出。用酒精或二甲苯涂擦尾部，或将鼠尾在50℃热水中浸泡半分钟使血管扩张。左手拉尾端，右手持注射器将针头刺入尾静脉，推入药液。

（2）家兔

①灌胃：需两人合作进行。一人取坐位用两腿夹持兔身，左手握家兔双耳，右手抓住两前肢。另一人将木制开口器横插家兔口内，压住舌头并固定之。取8号导尿管从开口器中部小孔插入食道。插管时如误入气管会出现动物的挣扎和呼吸困难。也可将导尿管的外端浸入水中，如有气泡吹出，表示插在气管内，此时应拔管重插。当判明导尿管在食道以内后，用注射器接通导尿管将药液推入。

② 皮下、腹腔注射：给药方法基本上同小鼠，唯针头可稍大，给药量可稍多。皮下与肌内为0.5～1.0/mg，腹腔为1.0～5.0ml/mg。

③静脉注射：将家兔置固定箱内，拨去耳壳外缘的毛，选择一条比较明显的耳缘静脉，用酒精棉球涂擦皮肤，使血管显露。用左手拇指和中指捏住兔的耳尖部，食指垫在兔耳注射处的下面，右手持注射器，将针头从近耳尖处刺入，当确认针头在血管中后，将药液推入。

5、动物的麻醉方法

（1）局部麻醉：常采用2％普鲁卡因做皮下浸润注射，可用于局部手术。

（2）全身麻醉：

①吸入麻醉：可将乙醚蘸在棉球上放入玻璃罩内，利用乙醚挥发的性质，经肺泡吸收，作用较快，适用于小鼠、大鼠短时间麻醉。

②注射麻醉：常用戌巴比妥钠和乌拉坦。

注意事项：

配制注射用麻醉剂，一般用蒸馏水，也可用生理盐水。

静脉麻醉时，剂量要准确、浓度要适中，注射速度要缓慢，均匀。冬季作实验时，应将药液加温到动物体温水平。

密切观察动物眼睑，角膜及趾反射，避免麻醉过深引起动死亡。一旦麻醉过量，尽早采取人工呼吸等措施。

6、动物的处死方法

（1）小鼠和大鼠

常采用颈椎脱臼法，即用左手拇指和食指将其头部紧按在硬的物体上，右手捏住鼠尾，用力向后牵拉，使颈椎脱位，鼠可瞬间死亡。大鼠也常用断头法处死。

（2）家兔

   空气栓塞法：用50～100ml注射器，往静脉内迅速注入空气，动物因血管气栓致死。家兔注射空气量为10～20ml。

三、实验设计基本原则

1、随机原则

使每一实验对象都有同等的机会抽到实验组或对照组中，除处理因素外其他因素尽可能均衡一致，从而抵消非实验因素的影响。

2、 对照原则

（1）组间对照：指在实验中设立若干平行组，如空白对照（等量的生理盐水）和标准品对照（等量典型药物）。实验时注意实验组和对照组例数相等。

（2）自身前后对照：指在同一个体观察给药前后某些指标的变化，或者两种药物一前一后的交叉比较，这样既可减少个体差异，还节约了动物（尤其是大动物），两种药物交叉比较时，间隔时间应参考药物的半衰期。

3、重复原则

即实验过程需多次重复进行。它包含二个含义，即重复数和重现性。重复数即动物的个数，统计学上叫“样本数”；重现性即在动物、药品、器材及环境因素等相同条件下，实验结果可靠稳定地重复出来。

实验提示:

学生通过本次实验学习要求熟悉、掌握药理学实验中动物的选择、标记、捉拿、固定以及常用取血、给药、麻醉、处死的方法。为后续的实验操作打下良好的基础。

实验思考：如何设计实验可以减少实验误差。

实验二   不同给药途径对药物作用的影响

实验目的：观察不同给药途径对硫酸镁作用的影响。

实验内容： 实验器材、药品和动物的准备

器材：鼠笼、天平、lml注射器、小鼠灌胃针头。

  药品：15%硫酸镁（含水）溶液。

  动物：小白鼠2只，体重18～22g，雌雄不拘。

实验步骤：取小鼠2只，分别称重并标记。一只小鼠腹腔注射15%硫酸镁溶0.1ml/l0g；另一只小鼠用同样剂量的硫酸镁灌胃。分别将小鼠置小笼中，观察其在15分钟内表现有何区别。

将结果填入下表：

不同给药途径对硫酸镁作用的影响

【注意事项】

 1、掌握正确的灌胃操作技术，不要误插气管或插破食管，前者可致窒息，后者可出现如同腹腔注射时的吸收症状，重则死亡。

 2、注射后作用发生较快，需留心观察。

实验提示:不同给药途径，吸收速度有差别，药物反应程度亦有差别。通过本实验使学生验证理论知识。

实验思考：

给药途径不同时，药物的作用为什么有的会出现质的差异？

实验三   药物剂量对药物作用的影响

实验目的：观察不同剂量戊巴比妥钠对小鼠作用的差异。

实验内容： 实验器材、药品和动物的准备

器材：鼠笼、粗天平、lml注射器、小鼠灌胃针头。

  药品：0.1%、0.2%、0.4%戊巴比妥钠溶液。

  动物：小白鼠3只，体重18～22g，雌雄不拘。

实验步骤：取小鼠3只编号并以苦味酸溶液涂毛作不同记号。分别称其体重及观察小鼠正常活动情况。各鼠经腹腔注射不同浓度的戊巴比妥钠溶液0.2m1/l0 g，分别置于小笼中，密切注意先后出现的反应。

将实验结果记录于下表：

                  不同剂量戊巴比妥钠对小鼠作用的差异

【注意事项】

 1、小鼠对戊巴比妥钠可能出现的反应，按由轻到重程度有：活动增加、呼吸抑制、翻正反射减弱、消失、反射亢进、麻醉、死亡等。

2、比较各鼠所出现反应的严重程度和发生快慢。

实验提示:同一药物给药剂量不同，药物反应程度亦有差别。通过本实验使学生验证理论知识和培养学生观察能力。

实验思考：

了解药物的剂量和作用的关系对于进行药理试验和临床用药有何重要意义？

实验四  苯巴比妥钠的抗惊厥作用

实验目的：学习动物惊厥模型的复制方法；观察大剂量尼可刹米的中毒反应；掌握苯巴比妥钠的抗惊厥作用。

实验内容： 实验器材、药品和动物的准备

器材：鼠笼、粗天平、lml注射器3支、小鼠灌胃针头、大烧杯。

  药品：2.5%尼可刹米，0.5%苯巴比妥钠，生理盐水。

  动物：小白鼠4只，体重18～22g，雌雄不拘。

实验步骤：

1.取体重相近的小白鼠4只，称重，编号，随机分组，分为实验组和对照组。

2.实验组小鼠腹腔注射0.5％苯巴比妥钠0.5mg/10g(0.1ml/10g)；对照组腹腔注射等体积生理盐水。

3.15min后实验组和对照组分别腹腔注射2.5%尼可刹米溶液0.2－0.3ml/10g，连续观察20min，详细记录两组小鼠的反应情况。

4.观察用药后小鼠的反应：有无兴奋、惊厥（以后脚伸直为惊厥指标）和死亡。

将实验结果填入下表：

【注意事项】

l.注意观察小鼠给药后的反应，如出现竖尾、洗脸、猛烈地奔跑、撞笼、跳跃等反应即为惊厥前兆。

2.腹腔注射部位要准确，否则会影响实验结果。

3. 给药后应保持室内安静，避免刺激实验动物。

实验提示: 尼可刹米为常用的呼吸中枢兴奋药。主要作用是直接兴奋延脑呼吸中枢，对大脑皮层、血管运动中枢和脊髓也有兴奋作用。过大剂量可引起惊厥，继而发生中枢抑制而死亡。苯巴比妥钠是一种普遍性中枢抑制药，具有良好的抗惊厥作用。通过本实验使学生验证理论知识、培养学生观察和对实验基本机能的掌握程度。

实验思考：

简述苯巴比妥钠的药理作用及临床应用。

实验五  镇痛实验

（一）热板法

实验目的：学习镇痛的实验方法，掌握吗啡或哌替啶的镇痛作用。

实验内容： 实验器材、药品和动物的准备

器材：智能热板仪，小动物电子秤，玻璃罩，小鼠鼠笼，lml注射器，秒表 。

 药品：0.1%盐酸吗啡，生理盐水 。

动物：雌性小鼠，18~22g。

实验步骤:

1．开机

打开智能热板仪电源开关，预热10分钟，至恒温指示灯亮，调节热板温度至55℃±1℃。

2．筛选

将小鼠放于热板仪上，记录痛阈值。痛阈值大于30秒或小于5秒，淘汰不用。痛阈值以小鼠放于热板上至出现添后足所需时间为标准。时间单位为秒。

①取已筛选的小鼠8只，随机分为对照组和实验组，每组4只。

②按“筛选”所示方法，分别测定、记录给药前对照组和实验组的痛阈值。

③对照组ip. 生理盐水0.1ml/10g

实验组ip. 0.1%盐酸吗啡 0.1ml/10g

④测定、记录给药后15 min、30min、45min对照组和实验组的痛阈值，对于痛阈值大于60秒的小鼠，立即取出，以60秒计。

⑤计算给药前后对照组和实验组的平均痛阈值。

注意事项：

1.热板法个体差异大，实验动物应预先筛选，一般以疼痛反应在30s内者为敏感鼠，可供实验用。

2.小鼠应选雌性，因雄性小鼠遇热时阴囊松弛，易与热板接触而影响实验结果。

3.用药后小鼠痛阈值超过60s者，应立即取出，防止足部烫伤而影响实验结果，其痛阈值按60s计算。

4.室温以15℃左右为宜，过低动物反应迟钝，过高则敏感。

5.热板温度应保持在55℃左右。

附：智能热板仪使用SOP

1．开机

打开电源开关，机器自检，电源指示灯亮。

2．设置温度

按下“温度”按钮，进入温度设定，此时光标移动到设定温度值处，系统默认目标温度为55℃。通过“<”或“>”按钮，调节升高或降低所需温度，按“确定”键确认。本实验温度为55℃。

3．设置日期

按下“日期”按钮，进入日期设定，通过“<”或“>”按钮，调节日期和时、分、秒。按“确定”键确认。

4．预热

本仪器需预热10分钟。

5．开始实验

放入动物在热板上的同时，按下外接按钮或“启/停”按钮，系统自动开始计时、编号，等观察到动物舔后足后，再次按下外接按钮或“启/停”按钮，计时结束，此时，可从液晶屏读取痛阈值。

6．查询

先停止实验，再按下“查询”按钮，可查询每个编号动物的痛阈值，用“<”或“>”按钮选择编号。按“确认”按钮，可退出查询状态。

实验提示: 将小鼠置于预先加热到55℃的金属板上，以热刺激小鼠足部可产生疼痛反应，通过测定小鼠痛阈(以出现舔后爪的时间为指标)，比较给药组与对照组小鼠痛阈的差异，给药后痛反应时间延长1倍以上者，视为有镇痛作用。

（二）化学刺激法

实验目的：

观察哌替定与阿司匹林对化学物质刺激致痛的影响。

实验内容： 实验器材、药品和动物的准备

器材：天平，鼠笼，lml注射器3支，5号针头，灌胃器。

 药品：0.7%醋酸溶液，0.2%哌替定溶液，0.4％阿司匹林悬液，生理盐水。

动物：小鼠，体重18～22g，雌雄不拘。

实验步骤：

1.取体重相近的小鼠6只，称重，编号，随机分为甲、乙、丙3组。

2.观察小鼠正常活动。

3.给药：甲组小鼠腹腔注射0.2%哌替定溶液1ml/10g，乙组0.4％阿司匹林悬液灌胃0.15ml/10g、丙组等体积生理盐水腹腔注射，记录给药时间。

4.给药后30min，各组小鼠均腹腔注射0.7%醋酸溶液0.1ml/10g，观察15min内各组出现扭体反应的动物数。

将实验结果记录填写入下表：

注：药物镇痛百分率(P)

给药组无扭体反应的动物－生理盐水组无扭体反应的动物数        ×100％

P=

生理盐水组扭体反应的动物数

注意事项:

1.醋酸应在临用时配制，如放置过久，作用明显减弱。

2.室温不能低于10℃，否则不易发生扭体反应。

3.给药组比对照组减少扭体发生率50％以上才能认为有镇痛作用。

4.小鼠体重轻，扭体反应发生率低。

实验提示：

某些化学物质(如酒石酸锑钾溶液、醋酸溶液、缓激肽等)注入小鼠腹腔内可刺激腹膜引起深部、大面积且持久的疼痛，致使小鼠产生扭体反应，表现为腹部内凹、躯干与后肢伸张、臀部高起等。若实验组与对照组相比，扭体反应发生率减少50%以上者，认为该药物有镇痛作用。

实验思考：

1.阐述哌替啶镇痛作用机制及其临床应用。

2.试述哌替定和阿司匹林作用的异同点？

实验项六   急支糖浆镇咳实验

实验目的：掌握小鼠引咳的病理模型及镇咳作用机制。学习用氨水引咳的方法；观察急支糖浆的镇咳作用。

实验内容： 实验器材、药品和动物的准备

器材：鼠笼、天平、棉花、大烧杯、注射器、灌胃器。

药品：急支糖浆、生理盐水、浓氨水。

动物：小鼠，体重18～22g，雌雄不拘。

实验步骤：取小鼠4只，随机分成2组，分别为急支糖浆0.3ml/10g，以生理盐水为空白对照，灌胃给药后15分钟，置于充满氨气的烧杯中观察小鼠15分钟内咳嗽潜伏及咳嗽次数。

观察并记录结果：

【注意事项】
    1.每只小鼠放入烧杯中时都要换新棉球，而且浓氨水的量要准确。棉球的大小、松紧程度要适中，尽量一致。氨水3~5滴，不可浓度太高。烧杯不必倒扣。

2.观察并记录小鼠咳嗽时,最好要两个人在不同的角度同时进行观察,并且视线要与小鼠的嘴在同一水平,以免漏记。小鼠咳嗽很难听到声音，因此应注意观察，表现为剧烈腹肌收缩并张嘴。 

3.潜伏期即把棉球放入后至第一次咳嗽的时间；

实验提示：引咳刺激最常用的是化学物质刺激、机械刺激和电刺激。由于化学刺激物时作用于呼吸道的感受器反射地引起咳嗽，凡能抑制咳嗽中枢或降低呼吸感受其敏感性的药物均能收到镇咳作用。小鼠吸入氨水后，刺激呼吸道粘膜感受器，反射性地引起咳嗽。

实验思考：

咳嗽发生的原因是什么？除了氨水引咳外，还有什么其他办法？

实验七    耐缺氧实验

实验目的：验证心得安（普萘洛尔）抗心肌缺氧作用。

实验内容： 实验器材、药品和动物的准备

器材：鼠笼、天平、广口瓶、注射器、灌胃器。

药品：心得安，NaOH，Na₂CO₃

动物：小鼠，体重18～22g，雌雄不拘。

实验步骤：

1、分组、称重、标记：取小白鼠4只，分为2组。

2、给药：甲组灌胃心得安0.2ml/10g，乙组灌胃等量生理盐水。

3、15分钟后甲乙两组小鼠分别取一只放入同一广口瓶，记录盖上盖子至小鼠呼吸停止时间。

4、自己设计实验表格记录实验结果。

【注意事项】

1、小鼠在密闭环境中表现如嘴唇发紫，呼吸加促即为缺氧，注意观察。

2、NaOH，Na2CO3加入量不可太多，防止NaOH（苛性钠）烧灼小鼠爪及尾。加入目的是中和小鼠呼吸过程中产生的CO2，防止小鼠CO2中毒。

实验提示：

实验思考：普萘洛尔有哪些药理作用？

实验八  药物对凝血时间的影响

实验目的：观察几种药物缩短或延长凝血时间的作用；学习测定小鼠凝血时间的方法。

实验内容： 实验器材、药品和动物的准备

器材：1 ml注射器、5号针头、毛细玻管（内径lmm）、载玻片、弯头眼科镊子、秒表、鼠笼、棉球。

药品：25g/l止血敏溶液、100u/ml肝素溶液、生理盐水。

动物：小鼠6只， 体重18～22g，雌雄不拘。

实验步骤：

1.毛细玻管法：取小鼠6只，称重后随即分成3组，做好标记。1、2号小鼠腹腔注射止血敏0.5mg/10g（按0.2ml/10g给药）；3、4号小鼠腹腔注射肝素20u/l0g（按0.2ml/10g给药）；5、6号小鼠腹腔注射等容量(0.2m1/10g)生理盐水。30min后，以毛细玻管作眼眶内毗穿刺，获取长约5cm的血柱。然后每隔30s折断毛细玻管一小截，观察有无粘丝状物（凝血丝）出现。记录从毛细玻管采血至出现凝血丝的时间，即为凝血时间。

2.玻片法：作眼眶内毗穿刺取血，分别滴两滴于清洁载玻片的两端（血滴直径约5mm左右）。每隔30s用干燥针头挑动血液一次，有细丝出现为凝血，记录凝血时间（以两滴血的凝血时间均数计算）。

3、综合全班实验结果，分别计算三组小鼠的平均凝血时间，将结果填人下表。

药物对小鼠凝血时间的影响

【注意事项】

    1．本实验宜在15℃一20℃室温进行。温度过低，凝血时间则延长。

2.如不便进行小鼠尾静脉注射，肝素亦可腹腔注射，但剂量须增加4倍。

3.玻片法因混入的组织液较多，加之每次挑动，凝血时间可缩短，故准确性较差。

实验提示：

实验思考：

  酚磺乙胺和肝素对凝血时间各有何影响？作用机制如何？有哪些临床应用。

实验九  药物对肠蠕动的影响

实验目的：测定墨汁在胃肠道内的移动速度，观察药物对胃肠蠕动功能的影响。

实验内容： 实验器材、药品和动物的准备

器材：手术剪、眼科镊、直尺、l ml注射器、小鼠灌胃器、鼠笼。

药品：20%硫酸镁溶液、0.003%甲基硫酸新斯的明溶液、0.02%硫酸阿托品溶液、生理盐水（以上药物每100m1药液中加墨汁2m1)。

动物：小鼠4只， 体重18～22g，雌雄不拘。

实验步骤：取空腹12h的小鼠4只，称重、标记。分别按下列方法灌胃给药：1号鼠20%硫酸镁40mg/10g；2号鼠0.003%甲基硫酸新斯的明0.006mg/10g; 3号鼠0.02%硫酸阿托品0.04mg/10g；4号鼠等容量（0.2m1/10g）生理盐水。给药后40min将小鼠颈椎脱臼处死，立即剖腹，将小肠从幽门至回盲部全段剪下，剔除肠系膜，将肠管拉成直线，放于实验台上，测量墨汁推进距离和小肠总长度。按下列公式计算墨汁推进百分率。

                         墨汁推进距离（cm）   

墨汁推进百分率 ＝                             x 100%                       

小肠总长度（cm）

将所测数据填人下表：

药物对小鼠肠蠕动的影响

【注意事项】

1．给药量必须准确。

2.每鼠灌药与处死时间必须一致。

3．剪取肠管要避免牵拉，否则会影响测量长度的准确性。

4.肠管内墨汁推进可能有中断现象，应以推进最远处为测量终点。

实验提示：

实验思考：

联系实验结果，讨论所用药物对肠道平滑肌的作用及临床用途。

实验十  肝脏功能状态对药物作用的影响

实验目的：观察肝功能损害对戊巴比妥钠作用的影响；学习筛试肝功能保护药的方法。

实验内容： 实验器材、药品和动物的准备

器材：鼠笼、天平、注射器（1ml）、小鼠灌胃器、组织剪。

药品：5%四氯化碳油溶液、0.3%戊巴比妥钠溶液、生理盐水。

动物：小鼠4只， 体重18～22g，雌雄不拘。

实验步骤：

1、取正常小鼠和肝功能已被破坏的（实验前48h皮下注射5%四氯化碳油溶液0.1ml/10g鼠各2只，称其体重。

2、分别由腹腔注射0.3%戊巴比妥钠溶液0.15m1/l0g（45 mg/kg），观察动物反应。记录各鼠的翻正反射消失的潜伏时间（从腹腔注射该药到翻正反射消失的间隔时间）和持续时间

（从翻正反射消失到翻正反射恢复的间隔时间）。小鼠苏醒后，颈椎脱臼处死，剖取肝脏，比较两组动物肝脏大小、颜色及充血程度。

3、将实验结果整理记录下表：

肝功能损害对戊巴比妥钠的影响

【注意事项】

1．如室温在20℃以下，应给麻醉小鼠保暖，否则动物将因体温下降，代谢减慢而不易苏醒。 2.四氯化碳是一种肝脏毒物，其中毒动物常被作为中毒件肝炎的动物模型，用于观察肝脏功能状态对药物作用的影响及筛选和试验肝功能保护药。其油溶液可用植物油配制；亦可用甘油配成5%的制剂，实验前24h皮下注射0.08m1/l0g。

3.四氯化碳中毒小鼠的肝脏比较肿大，有的充血，有的变成灰黄色，触之有油腻感，其小叶比正常肝脏更清楚。

实验提示：

实验思考：

 1．为什么损害肝脏的小鼠注射戊巴比妥钠后作用维持时间延长？

 2．讨论肝功能与临床用药的关系。

实验十一     抗疲劳作用实验

实验目的：

 学习小白鼠游泳抗疲劳实验方法，了解人参蜂王浆抗疲劳作用。

实验内容：实验器材、药品和动物的准备

器材：恒温水浴箱、1g铅块、鼠笼、天平、注射器（1ml）、小鼠灌胃器。

药品：人参蜂王浆口服液、生理盐水。

动物：小鼠4只， 体重18～22g，雌雄不拘。

实验步骤：

  取小鼠4只，体重18~22g，雌雄均可，称重后随即分两组，一组为给药组，灌胃给予人参蜂王浆0.03ml/g，对照组给等容积生理盐水，用药后30min，将小鼠尾附加1g铅块，后将小鼠放入调好的恒温水浴箱中，水温25℃±1℃,水深20cm，观察小鼠放入水中至溺死的时间，最后汇总全部实验结果，进行统计学处理。

【注意事项】

1.       每鼠负重铅块绑缚尾中部，没鼠距尾根部距离要相等。

2.       避免鼠尾绞附一起。

实验提示：以小鼠游泳为抗疲劳指标，补益药等具抗疲劳作用的药物可延长小鼠游泳时间。

实验思考：

1、人参蜂王浆抗疲劳作用如何？

2、解释人身蜂王浆为何具此作用？

实验体会:

实验报告:1、集中全班各组数据进行统计学检验。

         2、设计实验报告表格。

实验十二    传出神经对兔血压的影响

实验目的：

观察传出神经系统药物对血压的影响和该系统药物之间的相互作用。

实验内容：实验器材、药品和动物的准备

器材：注射器、手术台、小剪刀、手术刀、气管套管、粗线、动脉夹、动脉套管、检压剂、心电图机、止血钳、滴定管。

药品：20%乌拉坦、生理盐水、0.01%肾上腺素、0.01%去甲肾上腺素、0.005%异丙肾上腺素、0.5%酚妥拉明、0.1%心得安、0.5%肝素、生理盐水。

动物：家兔。

实验步骤：

1、家兔称重后，以20%乌拉坦5ml/kg麻醉后，将动物仰卧位固定于手术台上。

2、剪去颈部毛，切开颈部正中皮肤，于气管旁分离出一侧颈总动脉，将远心端结扎，在距3—5cm的近心端处，用动脉夹夹住动脉，阻断血流，然后在靠近结扎线处用眼科剪刀剪一小口，将其连于微动力感受器并已充满0.5%肝素钠的动脉套管朝向心方向插入颈总动脉内，并扎紧。

3、缓慢放开动脉夹，描记正常血压，待血压稳定后开始沿耳缘静脉给药，每给一种药物应待前一种药物作用完全消失后，再给下一种药物。

（1）0.01%肾上腺素0.3ml/kg

（2）0.01%去甲肾上腺素0.3ml/kg

（3）0.005%异丙肾上腺素0.3ml/kg

（4）0.5%酚妥拉明0.3ml/kg缓慢注入， 0.01%肾上腺素0.3ml/kg

（5）0.1%心得安0.3ml/kg缓慢注射。

【注意事项】

1、麻醉药不宜超量，且密切注意实验动物的呼吸情况。

2、实验所用药物溶液均应在临用前配制，以确保实验结果。

实验提示：血压的变化主要受每分输出量、外周阻力、体循环血量充盈压三个因素的影响。传出神经系统药物通过拟似或拮抗神经递质，作用于分布在心血管上的肾上腺素受体或胆碱受体，来影响心肌收缩力、血管舒缩程度和循环血量充盈程度进而升高或降低血压。

实验思考：

1、比较拟肾上腺素药对血压、心率的影响有何不同，分析其作用原理。

2、比较拟胆碱药对血压、心率的影响有何不同，分析其作用原理。

实验体会:

实验报告:1、集中全班各组数据进行统计学检验。

         2、设计实验报告表格。