实验6小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象观察

姓名：李思露

学号：131140040

一、     实验目的

1.       通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活动的观察,加深理解细胞吞噬作用的过程；

2.       了解巨噬细胞吞噬能力检测的形态学方法

二、     实验原理

吞噬作用也称为胞吞作用（cellular eating），指细胞通过质膜内陷形成内吞泡的方式吞入不能渗透过膜的较大固体物质（直径一般大于250mm）的过程。许多原生动物通过吞噬作用摄取营养；高等动物体内的巨噬细胞和嗜中性粒细胞的吞噬作用成为动物体非特异性免疫的重要组成部分。不同动物来源的巨噬细胞或同一动物来源的不同巨噬细胞吞噬功能强弱不同，个体吞噬细胞的平均吞噬能力是机体非特异性免疫功能强弱的重要反映。

吞噬细胞细胞膜上有识别某些病原体相关分子及凋亡细胞磷脂酰丝氨酸等配体的受体，可以使巨噬细胞识别结合病原体、凋亡细胞及其它异物，引起受体胞内区活化，进而导致与其相连的细胞骨架重排引发吞噬作用。

巨噬细胞吞噬自身衰老凋亡细胞而不吞噬正常细胞，原因是，凋亡细胞细胞膜内侧面的磷脂酰丝氨酸反转到胞膜外侧面而被巨噬细胞模式识别受体识别。

吞噬功能一般用吞噬百分率和吞噬指数两个指标反映。

吞噬百分率＝吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数/巨噬细胞总数×100％

吞噬指数＝吞噬的鸡红细胞总数/吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数              

三、     实验材料、试剂及器材

（一）材料：

1.   健康小白鼠：6-8周龄健康小白鼠，实验前1~2天，每只腹腔注射4％淀粉肉汤1mL。

2.   抗凝鸡血

（二）试剂:

1.   4%淀粉肉汤

2.   D-Hanks液

3.   0.85％生理盐水

4.   180IU/mL肝素钠生理盐水溶液

（三）用品

普通光学显微镜、 10mL低速离心机、托盘天平、水浴箱（37℃）、5mL一次性注射器、 10mL玻璃离心管、试管架、胶头滴管等

四、     实验操作

1.   巨噬细胞收集：脱颈处死小鼠；腹腔注入2mL生理盐水，揉匀；剪开腹部皮肤，暴露腹膜；用带针头的注射器插进腹腔吸取腹腔液。

2.   体外吞噬。0.3mL腹腔液+0.3mL鸡红细胞悬液，37℃吞噬。

3.   制片及观察。 分别在0min、15min、30min、45min 制备细胞混合液临时装片，观察现象并作图。

五、     实验结果

图1 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞装片（不染色）

表1 巨噬细胞吞噬鸡红细胞过程各个阶段

     巨噬细胞吞噬物的变化亦具有与时间相关的特点，巨噬细胞吞噬物在形态上易于观察和检测，这些特征使得巨噬细胞在损伤时间推断过程中具有重要的法医学意义。

六、     作业与思考题

1.         画图显示巨噬细胞吞噬鸡红细胞过程各个阶段。

答：如表1.

2.         在体外吞噬实验中，为什么随着吞噬时间延长，制片中出现的巨噬细胞数量减少？

答：巨噬细胞（Macrophages）能够吞没、破坏受损伤组织，有助于启动康复过程。虽然它们在损伤位点发挥关键作用，但一旦任务完成，就需要尽快撤离，结束炎症反应，为再生过程开路。继续存在的巨噬细胞不利于组织恢复。

3.         如不预先洗涤鸡红细胞会影响实验结果吗？为什么？

答：会。D-hanks液是一种平衡盐溶液，用于洗涤鸡血红细胞，如果不洗涤则鸡血红细胞含有钙镁离子，会破坏巨噬细胞溶酶体水解酶的活性，影响吞噬过程的进行。

七、     反思与改进

1.         注射时注意不要注入皮下或将针头插进小鼠内脏。进针部位选在下腹部，距离生殖器约1cm处腹中线两侧，针头与皮肤保持约30度到45度角，针头进入皮肤约1cm；可用一只手的拇指和食指将下腹部皮肤及腹膜夹起，然后将针头插入空腔。

2.         要注意计时，不同阶段细胞的形态不同。

 

第二篇：巨噬细胞吞噬现象的观察

巨噬细胞吞噬现象的观察

一、实验目的

1. 观察巨噬细胞的吞噬活动。

2. 掌握小鼠腹腔注射给药和脱颈椎处死方法。

二、实验原理

高等动物具有大小两类吞噬细胞(即巨噬细胞和嗜中性粒细胞)，专司吞噬作用，为非持异免疫功能的重要组成部分。

小鼠腹腔腹腔注射 淀粉肉汤液，可诱导巨噬细胞。

三、实验用品

1．器材

显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、注射器、吸管、吸水纸

2．试剂

生理盐水、Alsever溶液、4％台盼蓝染液

3．材料

小白鼠、1%鸡血红细胞。

四、实验步骤

实验前一天取小白鼠腹腔注射6％淀粉肉汤液(含台盼蓝)1毫升（连续注射三天效果较好）。

1．小鼠腹腔注射1％的鸡红细胞悬液1ml，轻揉腹部使鸡细胞分散。 2 ． 15～20分钟后，用颈椎脱臼法处死小鼠。

3 ．将小鼠置于解剖盘中，剪开腹腔，把内脏推向一侧，用吸管吸取腹腔液，滴在载玻片上，加盖玻片。显微镜下观察。

五、作业

绘制小鼠巨噬细胞吞噬鸡血红细胞的过程图。