热板法镇痛实验

摘要目的  学习热板法镇痛实验方法，观察麻醉性镇痛药杜冷丁（Dolantin）和非麻醉性镇痛药罗通定（Rotundine）的镇痛效应。方法 通过将筛选合格的3只小鼠标记甲、乙、丙，甲鼠注射0.2% dolantin，乙鼠注射0.2% rotundine sulfate，丙鼠注射生理盐水作为对照组。于15min、30min、60min分别测定其痛阈值，从而观察麻醉性镇痛药杜冷丁（Dolantin）和非麻醉性镇痛药罗通定（Rotundine）的镇痛效应。结果  注射前甲鼠的痛阈为18.25±3.45s,乙鼠为22.25±3.77s,丙鼠为21.63±4.69s。药物注射15min后，甲鼠的痛阈为54.13±10.96s，乙鼠为51.63±16.16s，丙鼠为26.38±14.75。注射药物后甲鼠的痛阈值与注射前相比有高度显著差异（P<0.01），与注射后15min的乙鼠相比无显著差异，与注射后15min的丙鼠相比有高度显著差异（P<0.01）。注射药物后乙鼠的痛阈值与注射前相比有高度显著差异（P<0.01），与注射后15min的丙鼠相比有高度显著差异（P<0.01）。丙鼠与注射前相比无显著差异（P>0.05）。药物注射30min后，甲鼠的痛阈为48.25±17.05s,乙鼠为48.88±14.7s，丙鼠为23±16.06s。此时的甲鼠与注射前相比有高度显著差异（P<0.01），与注射后30min的乙鼠相比无显著差异（P>0.05）, 与注射药物后30min的丙鼠相比有高度显著差异（P<0.01）。乙鼠与注射前相比有高度显著差异（P<0.01），与注射后30min的丙鼠相比有高度显著差异（P<0.01）。丙鼠与注射前相比无显著差异（P>0.05）。药物注射60min后，甲鼠的痛阈为46.25±16.79s，乙鼠为32.5±15.39s，丙鼠为23±16.34s。此时的甲鼠与注射前相比有高度显著差异（P<0.01），与注射后60min的乙鼠相比无显著差异（P>0.05），与注射药物60min后的丙鼠相比无显著差异（P>0.05）。乙鼠与注射前相比无显著差异（P>0.05），与注射药物60min后的丙鼠相比无显著差异（P>0.05）。丙鼠与注射前相比无显著差异（P>0.05）。结论  麻醉性镇痛药杜冷丁（Dolantin）比非麻醉性镇痛药罗通定（Rotundine）镇痛作用强，但镇痛作用没有显著差异性。

1.材料和方法

1.1实验动物  20~25克小鼠，雌性。

1.2药品  0.25% dolantin，0.25% rotundine sulfate， 0.9％NaCl。

1.3 器材  热板（hot plate)(数控超级恒温槽，金属罐)

1.4方法 

1.4.1  热板温度恒定于55±0.1℃。

1.4.2  筛选合格小鼠3只，30秒内有舔后足反应者（对逃避、跳跃者弃之）。并各测定正常痛阈值一次

1.4.3  实验分组 　甲鼠腹腔注射0.25%度冷丁0.1ml/10g，乙鼠腹腔注射0.25%罗通定0.1ml/10g，丙鼠腹腔注射生理盐水0.1ml/10g 

1.4.4  痛阈值（pain threshold）测定  分别在药物注射前和注射后的15、30、60min 各测痛阈值一次，并记录痛阈值。

1.4.5 痛阈提高百分率  按下式计算痛阈提高百分率

1.4.6 数据统计 数据以`x±s表示，显著性差异采用t检验。

2. 观察项目

2.1 将筛选合格的小白鼠3只做好记号为甲、乙、丙，测每只小白鼠的正常痛阈值一次，作为该鼠给药前痛阈值。

2.2 甲鼠i.p. dolantin溶液25mg/kg(0.20%~0.1ml/10g)，乙鼠i.p.rotundine 溶液25mg/kg (0.20%~0.1ml/10g)，丙鼠i.p.生理盐水 0.1ml/10g作为对照。用药后15分、30分、60分各测小白鼠痛阈一次，如果用药后放入铅罐内60秒钟仍无反应，即将小白鼠取出，以免时间太长把脚烫伤，其痛阈可按60秒计算。

2.3  实验完毕，算出全实验室各给药组的用药前后各次的小鼠热痛反应时间(即痛阈值)的平均值，并按下列公式计算痛阈提高百分率。

3. 结果

3.1罗通定、杜冷丁对小鼠痛阈值（s）的影响

注射前甲鼠的痛阈为18.25±3.45s,乙鼠为22.25±3.77s,丙鼠为21.63±4.69s。药物注射15min后，甲鼠的痛阈为54.13±10.96s，乙鼠为51.63±16.16s，丙鼠为26.38±14.75。此时甲鼠的痛阈值与注射前相比有高度显著差异（P<0.01），与注射后15min的乙鼠相比无显著差异（P>0.05），与注射后15min的丙鼠相比有高度显著差异（P<0.01）。注射药物后乙鼠的痛阈值与注射前相比有高度显著差异（P<0.01），与注射后15min的丙鼠相比有高度显著差异（P<0.01）。丙鼠与注射前相比无显著差异（P>0.05）。药物注射30min后，甲鼠的痛阈为48.25±17.05s,乙鼠为48.88±14.7s，丙鼠为23±16.06s。此时的甲鼠与注射前相比有高度显著差异（P<0.01），与注射药物30min后的乙鼠相比无显著差异（P>0.05）, 与注射药物后30min的丙鼠相比有高度显著差异（P<0.01）。乙鼠与注射前相比有高度显著差异（P<0.01），与注射后30min的丙鼠相比有高度显著差异（P<0.01）。丙鼠与注射前相比无显著差异（P>0.05）。药物注射60min后，甲鼠的痛阈为46.25±16.79s，乙鼠为32.5±15.39s，丙鼠为23±16.34s。此时的甲鼠与注射前相比有高度显著差异（P<0.01），与注射后60min的乙鼠相比无显著差异（P>0.05），与注射药物60min后的丙鼠相比无显著差异（P>0.05）。乙鼠与注射前相比无显著差异（P>0.05），与注射药物60min后的丙鼠相比无显著差异（P>0.05）。丙鼠与注射前相比无显著差异（P>0.05）。见表1

注：数据采用x±s表示，采用t检验；**P<0.01

3.2小鼠注射杜冷丁和罗通定痛阈提高百分率

根据表2绘出图1

4.  讨论(discussion)

4.1  杜冷丁（Dolantin）为合成品，是吗啡的代用品，较吗啡的成瘾性轻。与吗啡相似，作用于中枢神经系统的阿片受体而发挥作用，镇痛效力约比吗啡弱10倍。持续时间也比吗啡短。罗通定（Rotundine）结构为四氢巴马汀。镇痛作用比杜冷丁（Dolantin）弱，但无成瘾性。罗通定（Rotundine）阻断脑内多巴胺受体，亦增加与痛觉相关的特定脑区脑啡肽原和内啡肽原的mRNA表达，促进脑啡肽和内啡肽的释放，产生镇痛作用。^[1]

4.2  从表2和图2可以看出杜冷丁（Dolantin）的镇痛效果比罗通定（Rotundine）要好，而且持续时间也较长。但从表1可以看出，在实验过程中，杜冷丁（Dolantin）和罗通定（Rotundine）的镇痛效果没有显著差异。根据已学知识得知，罗通定的镇痛作用虽然比杜冷丁弱，但是罗通定除具有镇痛作用外，还具有催眠作用，^[2]这种作用可能使小鼠对痛觉的反映变得更迟钝，在实验条件下表现出于杜冷丁无显著差异的镇痛作用。

4.3 注射药物后，再次用手抓小鼠尾巴时，对小鼠可能会造成伤痛从而使小鼠的疼痛阈与注射药物之前的疼痛阈出现误差，使实验结果出现偏差。^[3]

5.  参考文献(references)

[1]Lu Yuan,Xia Qiang（陆源, 夏强）﹒生理科学实验﹒杭州：浙江大学出版社，2006.9：P258

[2]Chen Ji-qiang（陈季强）﹒基础医学教程各论（下）﹒北京：科学出版社，2004.9：P357

[3]Yao Pei-zhang（姚培章）﹒热板法镇痛实验存在的问题和对策﹒卫生职业教育﹒2005，22：P78～79

 

第二篇：热板法

用热板法测试颅痛定的镇痛作用

目的：掌握用热板法测试镇痛药物，比较镇痛效价的方法。

原理：小鼠足底无毛，皮肤裸露，所以对热刺激敏感。

材料：

器材：电子天平、1ml注射器、热板仪

药品：0.2%颅痛定混悬液、生理盐水

动物：雌性小白鼠2只

方法：

1. 将温控热板仪调节在55±0.5℃，放入大烧杯固定。以小鼠放入后至舔后足之间的时间为痛觉反应时间。

2.取雌性小白鼠2只，标记，称重。在给药前，先测试两鼠的痛觉反应时间。取痛反应时间在10~30s内小鼠作以下实验用。

3.1#腹腔注射0.2%颅痛定混悬液0.15ml/10g ，2#腹腔注射生理盐水0.15ml/10g。在给药后15、30、45、60各测痛觉反应1次。在测试中，如60秒内无痛觉反应，应立即取出，并以60秒计。观察两鼠给药前后的表现，并仔细记录观察结果，计算痛阈提高百分率=（药后痛觉反应时间-药前痛觉反应时间）/药前痛觉反应时间×100%。完成实验报告。

结果：

表1 用热板法测定颅痛定的镇痛作用结果

 

          图1. 颅痛定和生理盐水对小鼠痛阈值的影响

分析讨论：

作用机制：   颅痛定为四氢巴汀（左旋），具有良好的镇痛作用，并伴有镇静、安定和催眠作用，进入中枢后优先阻滞脑内DA受体最丰富的脑区的D2受体亚型，然后通过这些神经核与下丘脑弓状核发生神经连接，由此与内啡肽中央导水管灰质内源性抗痛系统相联系，加强脑干部位的抗痛功能，并抑制脊髓背角水平的致痛信息进人脑内，增强阿片肽的功能，最终达到镇痛目的。颅痛定阻断脑内DA受体，抑制痛觉传入和痛反应，增加与痛觉有关的特定脑区域脑腓肽原和内腓肽原的mRNA的表达，促进脑腓肽、内腓肽的释放。     

结论：颅痛定能缓解机体疼痛感，提高痛阈值。