生物化学实验报告

姓    名：                

学    号：                      

专业年级：   20##级生物信息学 

组    别：      第8实验室      

生物化学与分子生物学实验教学中心

一、实验目的

1、掌握Folin-酚试剂法测定蛋白质含量的原理及其实验操作技术。

2、掌握制作标准曲线的要领和通过标准曲线求样品溶液中待测定物质含量的方法。

3.熟悉分光光度计的用法。

二、实验原理

1.在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与碱性铜试剂中的Cu²⁺作用生成紫红色的蛋白质- Cu²⁺复合物。

2.蛋白质- Cu²⁺复合物中所含的酪氨酸或色氨酸残基还原酚试剂中的磷钼酸和磷钨酸，生成蓝色的化合物。

3. 在一定浓度范围内，蓝色的深浅度与蛋白质浓度呈线性关系，故与同样处理的蛋白质标准液比色即可求出蛋白质的含量。

三、材料与方法

1.实验材料

（1）样品

健康人血清（300倍稀释）；正常人血清蛋白质含量：60~80 g/L

（2）试剂

  牛血清白蛋白标准液（200μg/ml）；碱性硫酸铜溶液（现配现用）；Folin-酚试剂

（3）仪器与器材

  V-1100分光光度计；恒温水浴箱；试管6支、试管架；加样枪、加样枪架；坐标纸

2.实验步骤

（1）图示

（2）取6支试管做好标记，再按下表加样：（1作空白对照，2-5作标准，6为待测样品）

（3）加样时按横向顺序加样，并在加入碱性硫酸铜时：于1号试管加入碱性硫酸铜溶液2ml后等待1分钟再往下一支试管加入等量的碱性硫酸铜溶液，摇匀。以此类推。

（4）在全部试管加完碱性硫酸铜试剂之至距第一支试管加样10分钟后，于第1支试管立即加入0.20mL Folin-酚试剂，并于2s内摇匀。1分钟后第2支试管加入0.20mL Folin-酚试剂，2分钟后加第3支试管，以此类推。

    （5）加样完毕后将各试管每隔1min按1-6顺序放一只试管入水浴箱，分别40℃水浴10min后取出冷却至室温。

（6）以500nm波长比色，以1号管作空白对照，按2-6顺序每隔一分钟测定一支试管内溶液吸光度并重复测三次，记下读数，求出平均值，记录数据并计算结果。    

四、结果与讨论

1.实验现象记录

（1）在向试管中加入2ml碱性硫酸铜溶液并摇匀后，溶液澄清，无明显现象；

（2）在向试管中加入0.20mL Folin-酚试剂并立即摇匀时观察到：溶液由浅绿立即先变黄后变浅蓝，且蓝色随时间延长而有所加深。

2.实验数据记录

（对照组实验数据均为0）

2.绘制标准曲线

将测得样品管吸光度0.233代入标准曲线公式y=0.0023x中，得出样品浓度为101.30µg/ml。

即：  C_{（未稀释蛋白含量）} = C_{（稀释后蛋白质含量）}×2×300

                = 101.30µg/ml×600

                = 60780µg/ml

= 60.78g/L

正常人血清蛋白浓度参考范围为：60~80g/L

以上依赖所得实验数据分析得出的待测蛋白浓度落在正常范围内，可认为本次实验成功。

3.讨论

（1）本次实验中操作严格按照实验要求进行，故所测样品结果61.62g/L落在正常范围内，故可认为本次实验成功。

4.误差分析

（1）在使用加样枪移液过程中可因试液未完全放入试管而有少许残留于移液枪头导致操作误差。

（2）在使用分光光度计测吸光度时，因未能及时将溶液转移至比色皿而导致分别测定2-6试管时各组测定时间的时间间隔不一致导致误差。

 

第二篇：folin酚法测定蛋白质含量

生物化学实验报告

姓    名：        

学    号：     

专业年级：    

组    别：    第一实验室  

生物化学与分子生物学实验教学中心

一、 实验室规则

1．实验前应认真预习实验指导，明确实验目的和要求，写出预实验报告。

2．进入实验室必须穿白大衣。严格遵守实验课纪律，不得无故迟到或早退。不得高声说话。严禁拿实验器具开玩笑。实验室内禁止吸烟、用餐。

3．严格按操作规程进行实验。实验过程中自己不能解决或决定的问题，切勿盲目处理，应及时请教指导老师。

4．严格按操作规程使用仪器，凡不熟悉操作方法的仪器不得随意动用，对贵重的精密仪器必须先熟知使用方法，才能开始使用；仪器发生故障，应立即关闭电源并报告老师，不得擅自拆修。

5．取用试剂时必须“随开随盖”，“盖随瓶走”，即用毕立即盖好放回原处，切忌“张冠李戴”，避免污染。

6．爱护公物，节约水、电、试剂，遵守损坏仪器报告、登记、赔偿制度。

7．注意水、电、试剂的使用安全。使用易燃易爆物品时应远离火源。用试管加热时，管口不准对人。严防强酸强碱及有毒物质吸入口内或溅到别人身上。任何时候不得将强酸、强碱、高温、有毒物质抛洒在实验台上。

8．废纸及其它固体废物严禁倒入水槽，应倒到垃圾桶内。废弃液体如为强酸强碱，必须事先用水稀释，方可倒入水槽内，并放水冲走。

9．以实事求是的科学态度如实记录实验结果，仔细分析，做出客观结论。实验失败，须认真查找原因，而不能任意涂改实验结果。实验完毕，认真书写实验报告，按时上交。

10．实验完毕，个人应将试剂、仪器器材摆放整齐，用过的玻璃器皿应刷洗干净归置好，方可离开实验室。值日生则要认真负责整个实验室的清洁和整理，保持实验整洁卫生。离开实验室前检查电源、水源和门窗的安全等，并严格执行值日生登记制度。