《培养基的制备与消毒灭菌》 实验报告

实验目的

1.学习和掌握配制培养基（以牛肉膏蛋白胨培养基的配制为例）的一般方法和原理。

2.了解消毒和灭菌的原理，掌握常用灭菌方法的操作步骤。

实验原理

培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。在自然界中．微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多。但是，不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。不同微生物对PH要求不一样．雷菌和酵母的培养基的pH一般是偏酸性的，而细菌和放线菌的培养基的pH一般为中性或微碱性的(嗜碱细菌和嗜酸细菌例外)。所以配制培养基时，都要根据不同微生物的要求将培养基的pH调到合适的范围。此外，由于配制培养的各类营养物质和容器等含有各种微生物，因此，已配制好的培养基必须立即灭菌．如果来不及灭菌，应暂存冰箱内，以防止其中的微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养的酸碱度所带来不利的影响。

高压蒸气灭菌是将持灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀．继续加热，此时由于蒸气不能道出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。

牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供作微生物生长繁殖之用。基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂，琼脂在常用浓度下96℃时溶化，实际应用时，一般在沸水浴中或下而垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。

由于这种培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀碱将其PH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。

牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：

牛肉膏 3.0g

蛋白胨 10.0 g

NaCl 5.0g

水 1000ml

pH 7.4—7.6

实验仪器与药品

1.溶液或试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol／L NaOH、1mol／L HCl。

2.仪器或其他用具：试管、三角瓶、1000ml烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）、量筒、玻棒、培养基分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸（pH 5.5-9.0）、普通棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布等。

实验步骤

（一）牛肉膏蛋白胨培养基的制备

1.称量（假定配制1000ml培养基）

按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）中．牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接放人水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。

2.溶化

在上述烧杯中先加入少于所需要的水量（如约700ml），用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积（1000ml）；如果配制固体培养基时，将称好的琼脂放人已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。

3.调pH

在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸．用滴管向培养基中逐滴加入1mol／LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其PH，直至pH达7.4-7.6。反之，用1mol／LHCl进行调节。

4.过滤

趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利某些实验结果的观察。可以省去(本实验勿需过滤)。

5.分装

液体分装

分装高度以试管高度的1／4左右为宜。分装三角瓶的虽则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的一半为宜，如果是用于振荡培养用，则根据通气量的要求酌情减少；有的液体培养基在灭菌后，需要补加一定量的其他无菌成分，如抗生素等，则装量一定要准确。

固体分装

分装试管，其装量不超过管高的1／5，灭菌后制成斜面。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。

半固体分装

一般以试管高度的1／3为宜，灭菌后垂直待凝。

6.加塞

培养基分装完毕后，在试管口或三角瓶口上塞上棉塞(或硅胶塞、金属或高温塑料试管帽等)，以阻止外界微生物进入培养基内面造成污染，并保证有良好的通气性能(棉塞制作方法附本实验后面)。

7.包扎

加塞后，将全部试管放入铁丝筐或用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、配制日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、配制日期。

8.灭菌

将上述培养基以0.103MPa，l21℃，20min高压蒸气灭菌。

9.摆斜面

将灭菌的试管培养基冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太多)，将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜

l0.无菌检查

将灭菌培养基放入37℃的恒温箱中培养24-48h．以捡查灭菌是否彻底。

注意事项

1.蛋白胨很容易吸湿，在称取时动作要迅速，另外，称量时严防药品混杂．一把牛角匙用于一种药品．或称取一种药品后，洗净——擦干——再称职另一药品——瓶盖也不要盖错。

2.在琼脂溶化过程中．应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦，制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基中，影响细菌生长。

3.对于有些要求PH较精确的微生物，其PH的调节可用酸度计进行(使用方法、可参考有关说明书)。pH不要调过头，以避免回调而影响培养基内各离子的浓度。配制pH低的琼脂培养基时．若预先记好PH并在高压蒸汽下灭菌，则琼脂因水解不能凝固。因此，应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合，或在中性pH条件下灭菌，再调整pH。

4.分装过程中，注意不要使培养基沾在管(瓶)口上，以免沾污面塞而引起污染。

（二）高压蒸汽灭菌法步骤

1.加水

使用前在锅内加入适量的水，加水不可过少，以防将灭菌锅烧干，引起炸裂事故。加水过多有可能引起灭菌物积水。水面与三角架相平为宜

2.装料

将灭菌物品放在灭菌桶中，不要装得过满。

3.加盖

盖好锅盖，按对称方法旋紧四周固定螺旋，打开排气阀。

4.加热排气

加热后水蒸气与空气一起从排气孔排出，待锅内沸腾并有大量蒸汽自排气阀冒出时，排出的气流很强并有嘘声时，维持2—3min以排除冷空气。如灭菌物品较大或不易透气，应适当延长排气时间，务必使空气充分排除，然后将排气阀关闭。

5.加压

将排气阀关闭

6.保压

当压力升至0.1MPa时，温度达121℃，此时应注意观察，控制热源。保持压力稳定，维持20-30min后，切断热源。

7.自然降压

当压力表降至“0”处，稍停，使温度继续降至100℃以下后，打开排气阀，旋开固定螺旋，开盖，取出灭菌物。注意：切勿在锅内压力尚在“0”点以上，温度也在100℃以上时开启排气阀，否则会因压力骤然降低，而造成培养基剧烈沸腾冲出管口或瓶口，污染棉塞，以后培养时引起杂菌污染。压力降到“0”时，方可打开排气阀。

8.保养

灭菌完毕取出物品后，将锅内余水倒出，以保持内壁及内胆干燥，盖好锅盖。

9.培养基无菌检查 五、关键步骤及注意事项

1.要严格按配方配制。

2.调pH不要过头。

3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70?C以下放物、取物。

4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。

5.过滤除菌要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可太猛太快，滤膜要注意清洗保存。

陕西师范大学远程教育学院

生物学实验报告

报告题目 《培养基的制备与消毒灭菌》

姓 名 学 号

专 业

批次/层次

指导教师 学习中心 实验报告

 

第二篇：植物组织培养实验报告

植物组织 培养

实验报告

学院：生命科学技术学院

班级：11生物技术(制品)

学号：   2011192017   

姓名：     李鹏      

植物组织培养实验报告

实验一植物组织培养母液的配制

一 、实验目的

1.了解植物组织培养基本培养基的组分及其作用。

2.学习掌握植物组织培养MS培养基的配制方法。

二 、实验原理

培养基是植物组织培养中离体组织赖以生存和发育的条件。大多数培养基的成分是有无机盐、有机化合物（碳源、维生素、肌醇、氨基酸等）、生长调节物质、水分和其他附加物等五大类物质组成。

无机盐类由大量元素和微量元素组成。大量元素中，氮类化合物主要以硝酸类和铵类化合物的形式存在，但在培养基中多用硝酸类，也可以将硝酸类和铵类混合使用；磷和硫常用磷酸盐和硫酸盐来提供；钾是培养基中主要的阳离子；钙、钠、镁的需要量较少。微量元素包括碘、锰、铜、锌、钴、铁。培养基中的铁离子，大多数以螯合物的形式存在，即硫酸亚铁与乙二胺四乙酸二钠的混合。

有机化合物包括碳源、维生素、肌醇、氨基酸等。培养中的植物组织和细胞的光合作用较弱，因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物物来提供营养需要。培养基中的碳水化合物通常为蔗糖。蔗糖除了作为培养基的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起着重要的作用。在培养基中加入维生素有助于细胞的分裂和增长。一般包括VB₁、B₆、烟酸、生物素、叶酸、泛酸钙、VC。肌醇在糖类的相互转化、维生素和激素的利用等方面具有重要的催进作用。

常用的植物生长调节物质包括以下三类：①生长素类：吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、二氯苯氧乙酸（2,4-D）②细胞分裂素：玉米素（ZT）6-苄基嘌呤（6-BA）和激动素（KT）。③赤霉素：组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸（GA₃）。

培养基中的其他附加物包括人工合成和天然的有机物附加物。其中最为常见的为酵母提取物。琼脂作为培养基的支持物，也是最常用的邮寄附加物，他可以是培养基呈固体状态，以利于组织和细胞的培养。

植物组织培养是否成功，在很大的程度上取决于培养基的选择之上。目前普遍使用的是MS培养基。MS固体培养基可用于诱导遇上组织，或用于胚胎、茎段、茎尖及花药的培养等。MS培养基的硝酸盐、钾和铵的含量略高于其他的培养基，也是它被普遍使用的原因之一。

三 、实验材料、试剂、配方和仪器设备

1．试剂

NH₄NO₃ ,KNO₃,KH₂PO₄ ,CaCl₂·2H₂O ,MgSO₄·7H₂O,FeSO₄·7H₂O Na₂-EDTA,MnSO₄·4H₂O,ZnSO₄·7H₂O,H₃BO₃,KI,Na₂MoO₄·2H₂O

CuSO₄·5H₂O,CoCl₂·6H₂O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇， 烟酸，蒸馏水。

2.仪器设备

 电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml）量筒（1000ml、100ml、25ml） ， 容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，移液管（10ml，5ml，1ml）试剂瓶，玻璃棒数支，药匙，称量纸等。

3、培养基配方

各种母液的吸取量

MS培养基大量元素母液配制

MS培养基微量元素母液配制

MS培养基铁盐母液配制

MS培养基有机物质母液的配制

MS培养基钙盐和镁盐母液的配制

四、 实验步骤

1 、计算：计算各化学成分所需要的量。大量、微量和盐类按扩大50倍，定容500ml的配制计算。有机和肌醇按扩大100倍，定容200ml的配制计算。计算后制成配方表。

2、制定标签：裁取适当大小的牛皮纸，用铅笔写上MS，种类，并标明此类母液所含物质，质量，定容体积，扩大倍数吸取量，制备人，制备日期以大量为例如图：

 

3、大量元素母液的配制 ：先用量筒量取300ml蒸馏水放入 500ml 烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取： NH₄NO₃ ,KNO₃ , KH₂PO₄ , 待第一种化合物完全溶解后再 加入第二种化合物，溶解过程用玻璃棒搅拌，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液转移至 500ml 容量瓶中，并用蒸馏水将烧杯和玻璃棒洗涤3次，每次约50ml，而后用蒸馏水定容至 500ml，然后转移至细口试剂瓶中，贴上标签，并置于冰箱中低温保存备用。

4、微量元素母液的配制按照配方表中用量用电子天平依次称取 MnSO₄·4H₂O, ZnSO₄·7H₂O， H₃BO₃, KI, Na₂MoO₄·2H₂O。CuSO₄·5H₂O和 CoCl₂·6H₂O先稀释后用移液管吸取,按制备母液 I 的方法逐个溶 解，转移至容量瓶中，洗涤烧杯，然后定容至 500ml，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明 母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。

5、 铁盐母液的制备 把 FeSO4·7H2O 和 Na2-EDTA 分别置于适量蒸馏水中，加热搅拌使之完全溶解，保持加热，把 FeSO₄ 倒入 Na2-EDTA 溶液中并搅拌，接近沸腾时停止加热，冷却后调 PH 到 5.5，将溶液转移至 500ml 容量瓶中，洗涤后用蒸馏水定容至 500ml，转入细口试 剂瓶中，用力振荡 1～2min，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期， 配制人，并置于冰箱中保存备用。

6、 有机化合物母液的制备按配方表中用量依次称取：盐酸硫胺素,盐酸吡哆醇，烟酸, 甘氨酸，用蒸馏水溶解后，定容200ml转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人， 并置于冰箱中保存备用。

7、植物生长物质母液制备 NAA 母液:准确称取 10mg,用少量 1mol/L NaOH 溶解后加蒸馏水定容至 100ml,即 配制成 0.1mg/ml 的 NAA 母液，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称， 放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。 6–BA 母液配制方法相似，浓度为 2mg/ml

五、试验结果分析及注意事项

1、配制母液时注意药品只能出不能进。

2、制作标签时只能能用铅笔写，防止油性笔字迹在高压灭菌后模糊不清。
实验二、培养基的制备与灭菌

一 、 实验目的

1、学习母液法配制培养基。

2、学习用牛皮纸包三角瓶口的防污染方法。

3、学习并熟悉自动化灭菌锅的操作和保护。

二 、 实验原理

为防止组织培养各物质发生反应所以把微量和铁盐混在一起，为了避免物质的反应，所以要迅速倒入沸腾的蒸馏水中，琼脂应慢慢倒入，并边搅拌边倒入。组织培养所用的培养基含有植物生长所必需的各类营养物质， 同时也是微生物繁殖的极好场所，因此必须对培养基灭菌处理，以确保无菌操作的顺利进行。

三 、 实验材料、试剂和仪器设备

1.试剂： 琼脂，蔗糖，蒸馏水，1mol/L NaOH,各类母液

2.仪器设备：电子天平，烧杯，量筒，移液管，玻璃棒，药芍，称量纸，PH 试纸，锥形瓶，牛皮纸，棉塞等。

四、 实验步骤

1.准备 将所需的各种母液按顺序放好，将洁净的各种玻璃器皿放在指定置。

2 .大量的量取 取 50ml量筒一个，将大量、有机、肌醇、镁盐，钙盐、按配方表中的用量依次称取并倒入500ml烧杯中。

3 .微量铁盐的量取 取 50ml 量筒一个，将微量和铁盐按配方表中的用量称取并倒入100ml烧杯中。

4.培养基配制 取瓷盆一个，加入 1.5L 蒸馏水，置于电磁炉上加热，将称量好的所有母液倒入瓷盆中，用玻璃棒不断搅拌。再称量琼脂 16 克，白砂糖 60 克，依次倒入瓷盆中，边倒入边搅拌，待琼脂和白砂糖完全溶解后，，并定容至 2L。
5、调PH 用 1mol/L NaOH 和1mol／L HCl调 PH 至 6.0。

6、 分装 把培养基分装到三角瓶中，每瓶约50ml，用棉塞塞好再用牛皮纸，细绳包扎好，待灭菌。

7、灭菌 将所有的三角瓶整齐的放在灭菌锅的铁丝篮中，将温度调为121℃灭菌20min。灭完后摆放在水平的实验桌上勿动。

五、 试验结果分析及注意事项

1、配制培养基前先大致估计一下药品数量，不够时提前配制。

2、三角瓶灭菌时注意要放干净冷空气。

3、加的药品种类较多，切忌加错。

4、注意把三角瓶用棉塞塞好和用牛皮纸包好。

5、灭完菌的三角瓶勿动，等待培养基冷却凝固。

6、琼脂不可加太快，以防加太快琼脂结块。
                 实验三 无菌植株的建立

一 、 实验目的

1、通过实验，初步掌握外植体材料的消毒。

2、学习超净工作台灭菌方法和操作要求。

3、学习掌握无菌接种操作技术。

二 、 实验原理

植物细胞具有全能型，其外植体接种在无菌的人工培养基上，给予适当的条件能长成完整的无菌植株。

三 、 实验材料、试剂和仪器设备

豌豆，1% 84消毒液，0.5％升汞溶液，超净工作台、培养基，镊子，酒精灯，喷雾器。

四、 实验步骤
1.准备 打开超净工作台，将镊子酒精灯放如超净工作台中，用

紫外灯照 20min后关闭紫外灯，同时将豌豆种子用自来水冲20min

关闭紫外灯后在台上点燃 2 个酒精灯，用棉球将镊子烧4次，超净

作台少2次。将灭菌溶液，无菌水， 豌豆，大烧杯等放入超净工作

台。

2.灭菌 在超净工作台上取经浸泡处理的豌豆，先用酒精倒入种子瓶中约2／3消毒一次（1-2s）接着用无菌水冲洗一次。再用84 消毒液摇晃清洗清洗 3 次，每次 5 分钟，清洗完后用无菌水冲洗一次。而后用 0.5%HgCI 泡8min，处理 2 次，每次 5 分钟。后用无菌 水摇晃清洗 4-5次。

3.接种 将所要用的三角瓶用75％的酒精喷湿，接着把手喷湿并把三角瓶带入超净工作台。接着将灭菌处理好的材料在超净工作台上用镊子靠近酒精灯的外焰放入向下倾斜的锥形瓶杯中，每个瓶内装 4 粒豌豆，接种过程中锥形瓶应一直保持向下倾斜，直到接种完毕盖上棉塞。

4.标记 接种完毕后，用棉线绑好用铅笔在牛皮纸标上制作人，日期和“陇豌一号”，放入有光的培养架上。

五、 试验结果分析及注意事项
1.豌豆在自来水下不能冲洗太长，以免影响发芽率。

2.在豌豆灭菌时注意升汞、酒精灭菌时间应严格注意， 过长会对种子活性造成影响。

3.升汞有剧毒，操作要小心。

4.接种时瓶口一定要在酒精灯火焰上方，瓶口要朝下以减少污染率。

实验四 脱分化培养基的制备

一、    实验目的

1、     学习脱分化培养基的制备。

2、     熟悉MS培养基与脱分化培养基的异同。

二、    实验原理

   脱分化所用到的化学物质与MS培养基最大的区别是需要激素诱导。所以脱分化培养基需要在MS培养基的基础上添加激素进行愈伤诱导。

三 、实验材料、试剂和仪器设备

   MS培养基的大量，微量，钙盐，镁盐，铁盐，有机，肌醇和0.1mg/ml 的 2，4-D，0.1mg/ml的6-BA，琼脂，糖，1mol／L的NaOH，1mol／L的HCl，三角瓶，棉塞，牛皮纸，烧杯，量筒，移液管，玻璃棒，PH试纸。

四、实验步骤

1.准备 将所需的各种母液按顺序放好，将洁净的各种玻璃器皿放在指定置。

2 .大量的量取 取 50ml量筒一个，将大量、有机、肌醇、镁盐，钙盐、按配方表中的用量依次称取并倒入500ml烧杯中。

3 .微量，铁盐的量取 取 50ml 量筒一个，将微量和铁盐按配方表中的用量称取并倒入100ml烧杯中。

4.激素的量取 用移液管量取6ml 0.1mg／mL的6-BA ，用量筒量取30ml 0.1mg／L的2，4-D一并到入50ml的小烧杯中。

4.培养基配制 取瓷盆一个，加入 2L 蒸馏水，置于电磁炉上加热，将称量好的所有母液倒入瓷盆中，用玻璃棒不断搅拌。接着把激素加入，边倒入边搅拌再称量琼脂 15克，白砂糖 90克，依次倒入瓷盆中，边倒入边搅拌，待琼脂和白砂糖完全溶解后，，并定容至 3L。
5、调PH 用 1mol/L NaOH 和1mol／L HCl调 PH 至 6.0。

6、 培养基分装 把培养基分装到60个三角瓶中，每瓶约50mL，用棉塞塞好再用牛皮纸，细绳包扎好，待灭菌。

7、灭菌 将所有的三角瓶整齐的放在灭菌锅的铁丝篮中，将温度调为121℃灭菌20min。灭完后摆放在水平的实验桌上勿动，等待凝固。

五、试验结果及注意事项 注意事项

1、三角瓶灭菌时注意要放干净冷空气。

2、加的药品种类较多，切忌加错。

3、注意把三角瓶用棉塞塞好和用牛皮纸包好。

4、灭完菌的三角瓶勿动，等待培养基冷却凝固。

5、琼脂不可加太快，以防加太快琼脂结块。

实验五 豌豆茎、叶愈伤组织的建立

一 、实验目的

1、学习组培接愈伤操作技术。

2、了解最佳接愈伤的植物组织部位。

3、通过诱导豌豆茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法。二 、实验原理

植物细胞具有全能性，已经分化的植物细胞在适宜条件下可脱分化形成愈伤组织。

三 、实验材料、试剂和仪器设备

超净工作台、无菌豌豆苗、培养基、剪刀、镊子、喷雾器、酒精灯。

四、实验步骤

1.器具灭菌 把酒精灯、剪刀、镊子放入超净工作台中，打开紫外灯照射20min后点燃酒精灯，用沾有酒精的棉球点着，把剪刀和镊子烧3次。

2.材料入台 取5瓶无菌豌豆苗和4瓶培养基用75％的酒精用喷雾器喷湿，并把手喷湿后把无菌豌豆苗和培养基放入超净工作台中。

3.接种 用灭菌后的弯头剪 刀分别剪取长势良好，无病菌污染的豌豆的根茎、叶每个锥形内各接一种，每种接 2瓶，接种时瓶口要朝下。接完后标记将接种好的锥形瓶标记，写上名字，日期，叶 L,茎 S。标记好后放置在暗处培养。

五、 试验结果及注意事项 注意事项

1、接种根时注意取接近根尖但不能直接是根尖部分

2、接种时总体为接种材料大小越少越好，越有利于愈伤组织的形成。

 3、接种时可以适当按压材料使之更有利于愈伤组织的形成。

实验六 发芽率、感染率的计算及结果展示

一、发芽率的计算

二、导致发芽率低的原因

1、培养条件的温度太低。

2、种子在升汞中泡太久。

3、接种时胚朝下。

4、接种前种子已经死亡。

5、接种时镊子过热导致种子死亡。

三、污染率的计算

三、    导致高污染率的原因

1.  接种时手接触到了棉塞的下半部分。

2.  接种时剪子和镊子反复使用造成染菌的几率大幅提升。

3.  接种仪器已有多人使用，造成染菌可能性增加

           

陇豌一号                       发芽的苗

          

接种叶片                       接种茎