实训四   无菌技术

[目的]

1、保持无菌物品及无菌区域不被污染。

2、防止病原微生物侵入或传播给他人，防止交叉感染。

〔评估〕

1、操作项目、目的。
2、操作环境是否整洁、宽敞、安静。
3、无菌物品的存放是否合理，有无过期。
〔计划〕

目标/评价标准：
⑴患者明确无菌操作重要性，愿意配合。
⑵无菌物品、无菌区域未被污染。
⑶无交叉感染。

用物准备：
⑴无菌持物钳：常用无菌持物钳有三叉钳、卵圆钳和长、短镊子四件。
⑵无菌容器：常用的有无菌盒、罐、盘、及储槽等。
⑶无菌包：包内有无菌治疗巾、敷料、器械等。
⑷无菌溶液、启瓶器、弯盘。
⑸无菌橡胶手套。
⑹治疗盘、小手巾、小纸条、签字笔。

〔实施〕

（一）操作步骤：
1、无菌持物钳的使用：用于取用和传递无菌物品。
⑴衣帽整齐、洗手、戴口罩，检查有效日期→将容器盖打开→使钳端闭合垂直取出，使用保持钳断向下→用后闭合钳端，垂直放回容器，浸泡时轴节松开，液体在轴节上2—3CM；并每周更换，使用频率较高，应每天更换一次。
⑵注意事项：A不可在盖孔中取、放持物钳；B不可触及容器上缘及液面上的容器内壁，防止持物钳在空气中暴露过久；C禁忌夹取油纱布，以及用来换药或消毒皮肤。
2、无菌容器的使用：用于盛放无菌物品。
⑴衣帽整齐、洗手、戴口罩，查灭菌日期→取物时，打开容器盖，平移离开容器，内面向上，置于稳妥处或拿在手中，用完后立即盖严→手持无菌容器时，应把住容器底部。
⑵注意事项：A防止盖内面及边缘触及手及任何非无菌区域。
B避免容器内无菌物品在空气中暴露过久。
3、无菌包的使用：
⑴衣帽整齐、洗手戴口罩。A、包扎法：将物品放于包布中央，用包布一角盖住物品左右两角先后盖上，并将角尖向外翻折，盖上最后一角，以“十”字形包扎好，用化学指示胶带贴好。B、开包法：查包的名称、灭菌日期，将无菌包平放在宽敞平坦、清洁、干燥的操作台上，揭开系带，卷刚在包布下，按顺序打开无菌包，用无菌钳夹取所需物品，放在事先准备的无菌区内，如包内物品未用完，按原来的折痕包好，注明开包时间。
⑵注意事项：超过有效期不可使用，不可放在潮湿处，不可跨越无菌面，包开过，所剩物品24小时内可以使用。
4、铺无菌盘：铺无菌盘使之形成一无菌区，以供治疗用。
⑴洗手、戴口罩→取无菌治疗包。
纵折法：治疗巾纵折两次，再横折两次，开口边缘向外。
横折法：治疗巾横折后纵折，再重复一次。
铺盘：单层：打开无菌包→用无菌持物钳取一块治疗巾放在治疗盘内→上手捏住无菌巾一边两角外面轻轻抖开→双折铺于治疗盘上，将上层折成扇形，边缘向外，盘内放入无菌物品，将上层盖上，上下层边缘对齐，开口处向上折两次→两侧下缘分别向下折一次。
双层：取出无菌巾，双手捏住无菌巾一边两角外面，轻轻抖开，从远到近，三折成双层底，上层呈扇形折叠，开口边向外→放入无菌物品，拉平扇形折叠层，盖于物品上，边缘对齐。
⑵注意事项：查无菌包灭菌日期，手不可触及无菌巾内面，铺盘有效时间不超过4小时。
5、取用无菌溶液法：
⑴ 洗手戴口罩→取盛有无菌溶液密封瓶，擦净瓶外灰尘，检查核对无误后用启瓶器撬开瓶盖，用拇指与示指或双手拇指将橡胶塞边缘向上翻起→一手示指和中指套住橡胶塞将其拉出，另一手拿溶液瓶，瓶签朝向掌心，倒出少量溶液冲洗瓶口，再倒出溶液至事先备好的无菌容器中→倒毕塞进皮膏，消毒后盖好。
⑵注意事项：认真核对，切勿使瓶接触容器口周围，不许将棉签伸入无菌溶液瓶口蘸取溶液，倒出溶液不可再倒回瓶内，瓶内溶液未用完，可保存24小时。
6、戴无菌手套：医疗、护理操作时，以及接触患者体液、血液时用。
⑴剪指甲、洗手、戴口招→核对号码、灭菌日期→取滑石粉，涂擦双手→一手掀开手套袋开口处，另一手捏住一只手套的反摺部分，取出后戴上→戴好手套的手指插入另一只手套的反摺内面，取出后同法戴上→双手调整好，将手套的翻边扣套在工作衣袖外面→操作后脱手套时，一手捏住另一手套腕部外面，翻转脱下，再以脱下手套的手插入另一手套内，将其往下翻转脱下→将手套浸泡在消毒液内，洗手。
⑵注意事项：防止手套外面触及任何非无菌物品，无菌操作时，发现手套破裂，立即更换。戴手套手不可触及另一手及手套的内面，未戴手套的手不可触及手套的外面。
（二）健康教育：患者及家属明确无菌操作的重要性，防止发生院内感染，取得配合.。

[评价]

操作中严格执行无菌技术操作原则，动作轻稳、准确、规范，态度认真。

保持无菌区域或无菌物品未被污染。

无菌技术操作评分标准

                                                               ------李囡

 

第二篇：实验四 植物材料的准备与无菌操作技术

实验四 植物材料的准备与无菌操作技术

一、实验目的

1.通过实验掌握选择合适的外植体，并进行科学的体表灭菌，获得无菌植物材料的方法。2.通过在超净工作台上进行无菌操作训练，掌握植物组织培养的无菌操作技术。

二、实验药品与用具

超净工作台、75%酒精、次氯酸钠、MS培养基、接种器械（接种盘、解剖刀、镊子）、酒精灯、植物材料、小型喷雾器。

三、实验方法

（一）外植体消毒

1、外植体处理后在自来水流水下冲洗。（以下的步骤都在超净工作台上进行）

2、放到75%酒精中浸泡30 s，倒掉后用无菌水冲洗。

3、用2%次氯酸钠处理10min后，无菌水清洗数次，备用。

（二）无菌操作技术

1．操作人员进入接种室前必须用水和肥皂洗净双手，换上已消毒的工作服、帽子、口罩、鞋子后方可进入接种室。

2．接种前用70-75%酒精喷雾或擦洗工作台台面，开紫外灯照射20~30min；，在送风15~30min，让过滤空气吹拂工作台面和台壁四周。

3．用75%酒精消毒双手，并用酒精将装有培养基的培养瓶进行消毒后放进工作台上。

4．接种工具用95%酒精浸泡后在酒精灯上灼烧灭菌。，

5．接种时，腰带口罩，不准讲话或对着实验材料或培养容器呼吸。打开瓶塞或瓶盖时注意不要污染瓶口。瓶口在拔塞前灼烧灭菌。手不能接触接种器械的前半部分（及直接切割植物材料的部分），接种操作时（包括拧开或拧上培养瓶盖时），培养瓶、试管或三角瓶应水平放置或倾斜一定角度（45。以下），避免直立放置而增大污染机会。手和手臂应避免在培养基、植物材料、接种器械上方经过。在接种过程中，接种器械要重新灼烧灭菌。

6．切割外植体时，应在预先经灭菌的接种盘或培养皿、牛皮纸上进行。

7．在每次操作之前尽量把操作过程中必须使用器械盒药品先放入台内，不要中

途拿进。同时，台面上放置的东西也不宜太多，特别注意不要把东西迎面堆得太高，以致挡住气流。

四、实验作业

1.将本次的实验内容整理成实验报告。

2.接种一周后，观察接种材料的污染情况，说明污染的类型并分析污染的原因。