授课对象:06级检验1-5班 课 时:2学时
血清总胆固醇(TCH)测定
目 标:1.掌握酶法测血清TCH的基本原理及注意事项。
2.熟练操作步骤。
3.了解TCH测定的主要临床意义。
实验用品:总胆固醇酶试剂盒(3v),,721型分光光度计,YZ-602稀释器,血
清等。
内 容: 原理:
胆固醇酯酶
??胆固醇 + RCOOH 胆固醇酯 + H2O ????
?? Δ 4 -胆甾烯酮 + H2O2 胆固醇 + O2 ?????
胆固醇氧化酶
??醌亚胺染料 + H2O H2O2 + 4 – AA + 酚 ????
在500 nm 波长下比色测定,可求得标本内总胆固醇的含量。
操作步骤:
加入物 血清(μl) 标准液(μl) 蒸馏水 酶工作液(ml)
R 15 — — 1.5
S — 15 — 1.5
B — 15 1.5
过氧化物酶
混匀,置37℃水浴6~10分钟。 以B管校“0”,500 nm波长比色,取A值。
结果计算:
TCH (mmol/L) = AR / AS × 5.17
结果报告:
TCH: mmol/L
正常参考值: 2.33~5 .69mmol/L
临床意义:
TCH↑:常见于动脉粥样硬化等。
TCH↓:甲亢、严重贫血、急性感染等。
注意事项:
1.试剂与样品的用量可按其比例放大缩小,计算公式不变。
2.溶血标本胆红素引起正偏差,维生素C、谷胱甘肽、氟化物引起负偏差。
3.样品中的总胆固醇>15.5mmol/L, 用生理盐水稀释后再重新测定,结果乘以稀释倍数。
课后小结:
血清总胆固醇(TCH)测定 及临床意义
【正常参考值】
人群血脂水平主要取决于生活因素,特别是饮食和营养,所以各地区调查所得参考值高低不一,以致各地区有各自的高TC划分标准。现在国际上以显著增加冠心病危险的TC水平(医学决定水平)作为划分界限。在方法学标准化的基础上,采用共同的划分标准,有助于避免混乱。
我国《血脂异常防治建议》提出的标准为:
理想范围:<5.2 mmol/L(<200 mg/dL)
边缘升高:5.23~5.69 mmol/L(201~219 mg/dL)
升 高:≥5.72 mmol/L(≥220 mg/dL)
美国胆固醇教育计划(NCEP),成人治疗组提出的医学决定水平如下:
理想范围:<5.2 mmol/L(<200 mg/dL)
边缘升高:5.2~6.2 mmol/L(200~239 mg/dL)
升 高:≥6.21 mmol/L(≥240 mg/dL)
【临床意义】
影响TC水平的因素有:①年龄与性别:TC水平往往随年龄上升,但到70岁后有所下降。中青年期女性低于男性,50岁以后女性高于男性。②长期的高胆固醇、高饱和脂肪和高热量饮食,可使TC增高。③遗传因素。④其它:如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使TC升高。
增高:高总胆固醇是冠心病的主要危险因素之一,有原发和继发两种,原发常由遗传因素引起如家族性高胆固醇血症(低密度脂蛋白受体缺陷)、家族性apoB缺陷
症、多源性高TC、混和性高脂蛋白血症等。继发的见于肾病综合征、甲状腺功能减退、糖尿病、胆总管阻塞、粘液性水肿、妊娠等。
减少:低总胆固醇也有原发和继发两种,前者常由遗传因素引起如家族性的无或低β脂蛋白血症,后者如甲状腺功能亢进、营养不良、慢性消耗性疾病、恶性贫血、溶血性贫血等。
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