实验十六:丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用

【实验名称】：丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用

09救援一班 第三大组 李岚宇 2009222336

室温：25℃

（一）实验目的：1、学习和掌握竞争性抑制作用的特点。

2、观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用。

（二）实验原理：化学结构与酶作用的底物结构相似的物质，可与底物竞争结合酶的活性中心，使酶的活性降低甚至丧失，这种抑制作用称为竞争性抑制作用。琥珀酸脱氢酶是机体内参与三羧酸循环的一种重要的脱氢酶，其辅基为FAD，如心肌中的琥珀酸脱氢酶在缺氧的情况下，可使琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下之氢可将蓝色的甲烯蓝还原成无色的甲烯白。这样，便可以显示琥珀酸脱氢酶的作用。

丙二酸的化学结构与琥珀酸相似，它能与琥珀酸竞争而和琥珀酸脱氢酶结合。若琥珀酸脱氢酶已与丙二酸结合，则不能再催化琥珀酸脱氢，这种现象称为竞争性抑制。如相对地增加琥珀酸的浓度，则可减轻丙二酸的抑制作用。 （三）实验材料与仪器：

1器材 大白鼠、手术剪、镊子、磁盘、匀浆器、量筒、烧杯、纱布、滤纸、试管及试管架、恒温水箱、电热水浴锅

2试剂 0.2mol/L琥珀酸溶液、0.02mol/L琥珀酸溶液、0.2mol/L丙二酸溶液、0.02mol/L丙二酸溶液、1/15mol/L磷酸缓冲液、0.02％甲烯蓝、液体石蜡。

（四）实验步骤:

1、酶提取液的制备：去大白鼠的肝脏、心脏、肾脏，用冷水洗3次，加入1/15mol/L磷酸缓冲液pH 在7.4。在匀浆器中进行匀浆，然后用纱布过滤，用干净的烧杯收集过滤的备用。 2、取试管6支，编号，在按图步骤操作，

各管溶液立即混均匀，沿试管壁加入液体石蜡，约0.5cm，各管置于37℃的水浴中保温，切勿摇动试管，随时观察比较各试管颜色的变化，记录褪色时间。

（五）实验结果记录：

表1

（六）实验讨论：

1、酶提取液中有琥珀酸脱氢酶活性，表1所示，在试管1中没有抑制剂，但琥珀酸依然能脱氢，使得甲烯蓝反应得甲烯白。

2、各管的褪色有明显的时间差别，褪色时间随[I]/[S]逐渐增大，而增大。

3、丙二酸对琥珀酸脱氢酶抑制作用的类型是竞争性抑制，其特点：最大反应速率Vmax不变，米氏常数Km增大，竞争性抑制可以通过增大底物浓度来减轻抑制程度。

4、本实验中5号、6号试管的作用是做对照，5号试管和1号试管做对照，说明酶提取液中有琥珀酸脱氢酶的存在，6号试管中的酶提取液在100℃的水浴加热煮沸过，所以琥珀酸脱氢酶是失活的。

【注意事项】 ：

1、酶提取液的制备应操作迅速，以防止酶活性降低。

2、加入液体石蜡的作用是隔绝空气，以避免空气中的氧气对实验造成影响，因此加石蜡时试管壁要倾斜，注意不要产生气泡。

3、37℃水浴保温过程中，不能摇动试管，避免空气中的氧气接触反应溶液，使得还原型的甲烯白重新氧化成蓝色。

4.、37℃水浴保温过程中，要注意随时观察各试管的褪色情况。

5、实验结果结束后，一定要洗干净试管内的液体石蜡。

20xx年10月9号

 

第二篇：琥珀酸脱氢酶作用的实验

琥珀酸脱氢酶作用的实验

1 实验目的

探究生物体内琥珀酸脱氢酶的催化反应；探究不同温度对琥珀酸脱氢酶活性的影响。 2 实验原理

琥珀酸脱氢酶是生物体内有氧呼吸中三羧酸循环的一个重要的脱氢酶，可催化琥珀酸脱氢，生成延胡索酸，并将脱下的氢交给氢受体（FAD）。在无氧条件下，可以用甲烯蓝作为氢受体，氧化型的甲烯蓝（蓝色）接受了氢、被还原生成还原型甲烯蓝（无色），又叫甲烯白。其反应如下： 脱氢酶 琥珀酸 + MB 延胡索酸 + MB·2H 无氧条件下 甲烯蓝（蓝色） 甲烯白（无色）

3 实验器材与试剂

剪刀、研钵、试管、恒温水浴锅、冰箱、烧杯、胶头滴管、天平、鸽子。

生理盐水： 0.9% NaCl。

0.1 M 琥珀酸溶液：1.8 g琥珀酸加少量蒸馏水溶解后，用0.2 N NaOH调节pH至7.4，再用蒸馏水配成100 ml溶液。（0.2 N NaOH：4 g NaOH配成250 ml溶液。）

pH7.4磷酸缓冲液：0.2 M NaH2PO4 19 ml与 0.2 M Na2HPO4 81ml混合而成。

（0.2 M NaH2PO4溶液：1.56 g NaH2PO4加蒸馏水配成50 ml溶液；

0.2 M Na2HPO4溶液：14.32 g Na2HPO4·12H2O 加蒸馏水配成200ml溶液。）

0.01% 甲烯蓝溶液：0.01 g甲烯蓝加蒸馏水配成100 ml溶液。

4 实验操作

4.1 处死鸽子（剪断鸽子的颈总动脉），剪开胸脯处皮肤，取胸脯处肌肉约3 g。剪碎。加4～5 ml生理盐水，研磨均匀，得到肌肉匀浆。

4.2 按下表操作

试管

肌肉匀浆（滴）

缓冲液（滴）

甲烯蓝（滴）

琥珀酸（滴）

反应条件 1 2 3 20 20 10 30 0℃ 20 20 20 20 10 10 30 30 摇匀混合液，各试管迅速加少量液体石蜡 40℃ 100℃

3分钟后观察并记录颜色变化

振荡试管，观察颜色变化；静置，观察颜色变化。