实验五琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制

实验五　琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制

【实验目的】

1、掌握竞争性抑制概念及作用机理。

2、了解在无氧情况下观察脱氢酶作用的简单方法。

【实验原理】

存在于心肌、骨骼肌、肝脏等组织中琥珀酸脱氨酸，能使琥珀酸脱氢而成延胡索酸，脱下氢可使甲烯蓝退色，还原为甲稀白。反应如下：

草酸、丙二酸等在结构上与琥珀酸相似，可与琥珀酸竞争与琥珀酸脱氢酸的活性中心结合。若酶已与丙二酸等结合，则不能再与琥珀酸结合而使之脱氢，产生抑制作用，且抑制程度取决于琥珀酸与抑制剂在反应体系中浓度的相对比例，所以这种抑制是竞争性抑制。本实验通过观察在由不同浓度的琥珀酸与丙二酸组成的反应体系中使等量甲稀蓝退色反应时间，从而验证丙二酸对琥珀酸的竞争性抑制作用。

【实验用品】

1、试剂

（1）0.10mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）:0.1mol/L NaH₂PO₄19ml 加 0.1mol/LNa₂HPO₄81ml。

（2）0.093mol/L琥珀酸钠溶液：取琥珀酸钠1.5g溶于100ml蒸馏水中。

（3）0.10mol/L丙二酸钠溶液：取丙二酸钠1.5g溶于100ml蒸馏水中。

（4）0.02%甲稀蓝溶液。

（5）液体石蜡。

2、器具

（1）0.10mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）：0.1mol/L NaH₂PO₄19ml加0.1mol/LNa₂HPO₄81ml。

（2）0.93mol/L琥珀酸钠溶液：取琥珀酸钠1.5g溶于100ml蒸馏水中。

（3）0.10mol/L丙二酸钠溶液：取丙二酸钠1.5g溶于100ml蒸馏水中。

（4）0.02%甲烯蓝溶液。