琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制

目的与要求： 了解琥珀酸脱氢酶的作用及酶促反应中的竞争性抑制作用实验原理： 肌肉组织中含有琥珀酸脱氢酶，能催化琥珀酸脱氢转变为延胡索酸（三羧酸循环，线粒体）。反应中生成的FADH2可使甲烯蓝还原为甲烯白。 丙二酸是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂，与琥珀酸的分子结构相似，与酶的亲合力高。丙二酸与酶结合后，酶活性受到抑制，则不能催化琥珀酸的脱氢反应。 本实验以甲烯蓝为受氢体，在隔离空气条件下，以甲烯蓝褪色程度来观察、判断丙二酸对琥珀酸脱氢酶活性的抑制作用。操作步骤： 酶提取液的制备 酶促反应管的制备 37℃酶促反应，观察甲烯蓝褪色程度实验结果： 间隔10分钟，记录各管甲烯蓝褪色程度，解释结果。注意事项： 充分碾磨家兔肌肉，碾磨器械、纱布要及时清洗。 滴加液体石蜡时，倾斜试管，避免产生气泡。 观察结果时不能振摇试管，避免甲烯白重新氧化变蓝。 改良Mohum法测定谷-丙转氨酶活性目的与要求： 了解Mohum法测定谷-丙转氨酶活性的原理及测定方法实验原理： 利用丙氨酸和α-酮戊二酸为底物，在转氨酶作用下生成丙酮酸和谷氨酸，再利用2 4-二硝基苯肼与丙酮酸反应，生成棕色的丙酮酸二硝基苯肼，在520nm波长测定其光密度，与经同样处理标准丙酮酸溶液比较，即可计算谷-丙转氨酶的活性。 血清谷-丙转氨酶活性单位定义：每毫升血清在

pH值7.4，37℃保温条件下与底物作用30min后，每生成2.5ug的丙酮酸为1谷-丙转氨酶单位，正常值为2-40单位/ml。实验步骤： 见书Page 77酶活性测定表格。实验结果： 谷丙转氨酶活性单位A测定管/A标准管标准管中丙酮酸含量10/2.5。注意事项： 保温温度和时间要精确，即谷丙转氨酶发挥催化作用环境。

酶活性单位。 微量移液器的使用。..

 

第二篇：琥珀酸脱氢酶竞争性实验设计方案