1、磷酸缓冲液（pH5.7-8.0）^[1]

甲液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液（NaH₂PO₄·2H₂O），1000mL中含31.2g。

乙液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液（Na₂HPO₄·2H₂O），1000mL中含53.7g。

根据所需pH，按照下表，分别吸取甲液和乙液，混合均匀即得。

2、醋酸缓冲液（pH3.6-5.6）^[1]

甲液：0.2mol/L醋酸钠溶液，1000mL中含11.55g。

乙液：0.2mol/L醋酸溶液，1000mL中含10.40g

根据所需pH，按照下表，分别吸取甲液和乙液，混合均匀即得

3、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液（pH2.6-7.0）^[1]

甲液：0.1mol/L柠檬酸溶液，1000mL中含21.01g。

乙液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液（NaH₂PO₄·2H₂O），1000mL中含53.7g。

根据所需pH，按照下表，分别吸取甲液和乙液，混合均匀后，加水稀释到100mL

4、Tris缓冲液（pH7.2-9.0）^[1]

甲液：0.2mol/LTris溶液，1000mL中含24.4g三羟甲基氨基甲烷。

乙液：0.2mol/LHCl

取25mL甲液，根据所需pH，按照下表，吸取乙液，混合后，加水稀释到100mL

5、PBS缓冲液（pH7.4）

NaCl 8g，KCl 0.2g，KH₂PO₄ 0.2g，Na₂HPO₄ 1.15g。定容至1000mL。

参考资料

[1]王国惠 环境工程微生物学实验 北京 化学工业出版社 20## 附录2

 

第二篇：常用(缓冲)溶液的配制(免费)

附录

一、常用溶液的配制

（一）溶液配制注意事项

1．药品要有较好的质量试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteedreagent，G．R．）、分析试剂（Antalyticalreagent，A．R．）化学纯（Chemicalpure，C．P．）和实验试剂（Laboratoryreagent，L．R．）等等。工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。

2．药品称量要精确。3．配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.5~7.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。

４．配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。

0.067（1/15）Mol/L磷酸缓冲液（二）（二）0.0670.067（1/15）

1．1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KH2PO4，A．R．）9.08g，用蒸馏水溶解后，倾入1000ml容量瓶内，再稀释至刻度（1000ml）。

2．１/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，A.R.）9.47g（或者Na2HPO4·2H2O11.87g）用蒸馏水溶解后，放入1000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1000ml）。

3．按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液。

附表1磷酸盐缓冲液配制法（单位：毫升）pH5.85.96.06.16.26.36.46.5

1/15Mol/LNa2HPO4

8.09.912.215.318.622.426.731.8

1/15Mol/LKH2PO4

92.090.187.884.781.477.673.368.2

pH7.17.27.37.47.57.67.77.8

1/15Mol/LNa2HPO4

66.672.076.880.884.187.089.491.5

1/15Mol/LKH2PO4

23.428.023.219.215.913.010.68.5

1

6.66.76.86.97.037.543.549.655.461.162.556.550.444.638.97.98.08.18.28.493.294.795.897.098.06.85.34.23.02.0

0.15Mol/LPB液（三）（三）0.15Mol/L

附表2pH6.46.66.87.07.27.47.6

0.15Mol/LNa2HPO4（ml）

26.537.549.061.072.081.087.0

0.15Mol/LPB液配制法

0.15Mol/LNaH2PO4（ml）

73.562.551.039.028.019.013.0

Na2HPO4·2H2O分子量=175.050.15Mol/L溶液含26.7g/L。Na2HPO4·12H2O分子量=358.220.15Mol/L溶液含53.7g/L。NaH2PO4·H2O分子量=138.000.15Mol/L溶液含20.7g/L。NaH2PO4·2H2O分子量=156.030.15Mol/L溶液含23.4g/L。（四）0.2Mol/LPB缓冲液（四）0.2Mol/L

附表30.2mol/LPB缓冲液配制法pH5.86.06.26.46.66.87.07.27.47.67.8

0.2Mol/LNa2HPO4（ml）

8.012.318.526.537.549.061.072.081.087.091.5

0.2Mol/LNaH2PO4（ml）

92.087.781.573.562.551.039.028.019.013.08.5

2

8.094.75.3

0.2Mol/LNa2HPO4·2H2O溶液35.61g/L

Na2HPO4·12H2O溶液含71.64g/L

0.2Mol/LNaH2PO4·H2O溶液含27.60g/L

NaH2PO4·2H2O溶液含31.21g/L

欲配0.1Mol/LPB缓冲液则在0.2Mol/LPB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。欲配制PBS液时，则在溶液中加0.85％的NaCl溶液即可。

PBS）（五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（（五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBSPBS）

（0.15Mol/LPH7.2）NaCl8.0gKCl0.2gNa2HPO41.15g（如为Na2HPO4·12H2O，则为2.89g）KH2PO40.2g

将上述试剂依次溶于1000ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌10min~15min，存在4℃冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。

Boratesalinebuffer）（六）硼酸盐缓冲液（（六）硼酸盐缓冲液（Boratebuffer）

1．硼酸（Ｈ3BO3）

0.2Mol/L硼酸：硼酸12.37g加水至1000ml。2．硼砂（Na2B4O7）

0.05Mol/L硼砂：硼砂19.07g加水至1000ml。

附表4不同pH的0.2Mol/L硼酸缓冲液配制法pH7.47.67.88.0

0.05Mol/L硼砂

（ml）

1.01.52.03.0

0.2Mol/L硼酸

（ml）

9.08.58.07.0

pH8.28.48.79.0

0.05Mol/L硼砂（ml）

3.54.56.08.0

0.2Mol/L硼酸（ml）

6.55.54.02.0

（七）巴比妥缓冲液

1．pH8.2离子强度0.05Mol/L巴比妥缓冲液

巴比妥钠47.6g

3

蒸馏水3000ml1.17NHCl55.0ml

（1.17NHCl=193ml浓HCl加1807ml蒸馏水）⑴将4.76g巴比妥钠溶于3000ml蒸馏水。⑵加1.17NHCl55ml。

⑶用HCl调节pH到8.2，并加蒸馏水至4265ml。2．pH8.40.06Mol/L巴比妥缓冲液

巴比妥1.84g巴比妥钠10.30g加蒸馏水至1000.00ml3．pH8.60.06Mol/L巴比妥缓冲液

巴比妥1.66g巴比妥钠12.76g加蒸馏水1000.00ml0.2Mol/L醋酸盐缓冲液见表附表5（八）（八）0.2Mol/L

附表50.2Mol/L醋酸盐缓冲液配制法pH23℃37℃9.108.928.758.628.508.408.32

8.958.768.608.488.378.278.18

0.2Mol/LTris（ml）

25252525252525

0.1Mol/LHCl（ml）

57.510.512.515.517.520.0

pH23℃37℃8.067.967.877.777.667.547.36

7.907.827.737.637.527.407.22

0.2Mol/LTris（ml）

25252525252525

0.1Mol/LHCl（ml）

27.530.032.535.037.540.042.5

（九）三羟甲基甲烷—盐酸缓冲液（Tris—HCl缓冲液）（九）三羟甲基甲烷—盐酸缓冲液（TrisTris—不同pH，0.05Mol/L

25ml0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷加хml0.1NHCl，加水稀释至100ml（见下表）

附表6Tris—HCl缓冲液配制法pH23℃9.108.92

37℃8.968.78

0.2Mol/LTris(ml)2525

0.1NHCl(ml)57.5

pH23℃37℃8.057.96

7.907.82

0.2Mol/LTris(ml)2525

0.1NHCl(ml)27.530.0

4

8.748.628.508.408.328.238.148.608.488.378.278.188.108.002525252525252510.012.515.017.520.022.525.0

7.877.777.667.547.367.207.737.637.527.407.227.05

25252525252525

32.535.037.540.042.545.0

三羟甲基氨基甲烷（Tris）分子量=121.14

0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷：Tris24.23g，加水至1000ml。0.1NHCl：取HCl8.6ml，加水至1000ml。（十）0.5Mol/LpH9.5碳酸盐缓冲液（十）0.5Mol/LNaHCO33.70gNa2CO30.60g溶于600.00ml蒸馏水中即得。

不用时塞紧瓶塞，以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。最好小量配制。（十一）甘油磷酸缓冲液1．配制pH8.0磷酸缓冲液

0.1Mol/LNa2HPO494.50ml0.1NNaH2PO45.50ml混合即可

2．9份甘油与1份pH8.0磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液。用途：用于免疫荧光试验。

Hank’s液（十二）（十二）Hank

1．贮存液

NaCl80.00gKCl4.00gNa2HPO4·12H2O1.52gKH2PO40.60g葡萄糖4.00g0.4％酚红液50.00ml双馏水加至100.00ml115℃高压灭菌15min，冰冻保存。

5

2．工作液

贮存液1份

双馏水9份

115℃高压灭菌15min。临用时用灭菌的5.6％NaHCO3液调pH值至7.2左右（溶液呈橙红色）。

Nessler’sreagent）（十三）萘（钠）氏试剂（（十三）萘（钠）氏试剂（Nesslerreagent）

配方1：氯化汞6.0g

碘化钾12.4g

20％NaOH30ml

加蒸馏水至100ml

配方2：碘化汞11.5g

碘化钾8g

蒸馏水50ml

（完全溶解后）过滤，加20％NaOH50ml。

用途：检测溶液中氨离子。

Alsever’s）液（十四）阿氏（（十四）阿氏（Alsever

葡萄糖2.05g

柠檬酸钠0.80g

氯化钠0.42g

蒸馏水100ml

溶解后，以10%柠檬酸调节pH至6.1，过滤，分装，10磅10min灭菌，4℃保存。

（十五）青、链霉素混合液（简称S．P．液或双抗液）

青霉素（40万U）5支

链霉素（200万μg）1支

分别溶于100ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中，混合后分装小瓶，置-10℃~-20℃冰箱保存备用（1万单位μg/ml）。

临用时，按1%的量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素100U/ml，链霉素100ug/ml。

（十六）洗液（清洁液）

配方1：重铬酸钾150g

蒸馏水300ml

浓硫酸3000ml

将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶

6

解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧则稍停，冷却后再继续加。此为强洗液。

盛清洁液的容器要坚固，上加厚玻璃盖，操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套，以保安全。

洗液一旦变绿，表示铬酸已经还原，失去了氧化能力，不宜再用。如将这样洗液加热，再加适量重铬酸钾，又可重新使用。

配方2：浓硫酸50%

蒸馏水50%

重铬酸钾5%

此为中等强度洗液。

配方3：重铬酸钾100g

蒸馏水1000ml

加热溶解，冷却后缓慢加入

工业硫酸100ml

此液为弱洗液，为棕红色。使用此液时，必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净，经自来水冲洗，沥干然后才能浸入，否则该洗液很快失效。

二、犊牛血清的制备

选择健康犊牛，一般为初生至六个月龄，最好是刚出生尚未吸乳的公犊牛，采血前12h不予喂饲，仅予水喝。采血时采用颈动脉，动脉插管，乳胶管、盛血容器均应洗净灭菌。将采血筒中放入少量Hank’s液，将胶管连接至玻璃管（弯）放入瓶口，然后瓶口包以硫酸纸、白布和普通纸，系紧。插管也用硫酸纸包扎系好。

采血前将犊牛固定，最好放在手术台或固定架上固定好头部和四肢，局部剪毛消毒，切开，剥离颈动脉，止血钳夹好，消毒，切开动脉管壁，插入插管，另一助手轻摇采血筒中的Hank’s液以湿润瓶壁，这样有利于凝血，也有利于血凝块与瓶壁的分离。这时术者即可放血。每个采血筒内采适量不宜超过总容量的1／3，装的过多则出血清少。采血时还须注意动脉插管口不宜太细，放血速度也不宜过快，过快过慢均可引起溶血。

盛血的采血筒应置室温（天热时）或温箱中，温室（天冷时）中，静置4h以上，待血液凝固后放入4℃冰箱或冷库中过夜。然后在无菌间，小心（不要摇晃）

7

倒出或用虹吸法吸出上清液，如混有红血球，则将这部分血清以2000r/min离心10min～15min注意无菌操作，收集上清（略有溶血的血清也可应用）。一头犊牛可采血1500ml～3500ml，约能分离出一半血清。

血清分离后，置56℃水浴中灭活30min以破坏补体和某些传染的病毒（也可以不灭活）。灭活后可进行分装，分装后需作菌检。菌检结果如有污染，可用赛世滤器过滤。

有的材料报道，有的血清不灭活要比灭活的血清效果好。除近期要用的血清可置4℃保存外，其余放低温冰箱中保存。

最好采用3～5头犊牛血清先分别灭活，菌检后再混合、分装、保存。混合血清可以避免个别犊牛具有抑制细胞生长的物质或缺少某些生长因子的缺陷。

三、常用化合物的分子量及当量

附表7

化合物

盐酸

氢氧化钠氢氧化钾草酸氯化钠氯化钾硫酸醋酸磷酸

磷酸二氢钠磷酸氢二钠磷酸二氢钾磷酸氢二钾

二乙胺四乙酸二钠（EDTA—Na2）

分子式

常用化合物的分子量及当量

分子量36.4640.0056.1190.0458.4474.5698.0860.0598.00119.98141.96136.09174.18372.24

当量36.4640.0056.1145.0258.4474.5649.0460.0532.67

HClNaOHKOHH2C2O4NaClKClH2SO4

CH3COOHH3PO4NaH2PO4Na2HPO4KH2PO4K2HPO4

C10H14N2O8Na2

186.12

8

硝酸碘

碘化钾硼酸

碳酸氢钠碳酸钠硼砂HNO3I2KIH3BO3NaHCO3Na2CO3Na2B4O763.01253.81166.0161.8384.01105.99381.43

63.01126.90166.0120.6184.0153.00

四、克分子浓度

用1L（1000ml）溶液中所含溶质的克分子数表示溶液的浓度叫做克分子浓度。通常用字母M表示。物质的量用做单位来表示，在数值上与物质的分子量相同，这个量叫做克分子。例如氯化钠的分子量为58.44，则1个克分子氯化钠的重量是58.44g。将58.44g氯化钠溶解于水，配制成1L溶液，就是1Mol/L氯化钠溶液。NaH2PO4·H2O的分子量为138.0,则其1个克分子的重量是138.0克。将69.0gNaH2PO4·H2O溶解于水，配制成1L溶液，就是0.5Mol/L磷酸二氢钠溶液。

五、离心机与离心力

习惯上把每分钟4，000转的离心机称为低速离心机，每分钟20，000转的离心机称为高速离心机，这类离心机有冷冻装置。每分钟20，000以上的离心机称为超速离心机，为了减少空气的摩擦阻力，它的转头是在真空中运转的。由于许多样品（如病毒等）都是极小的颗粒或溶质，它们在重力场中沉降速度极慢，同时还存在扩散作用，只有超速离心所产生的强大的离心力场，才有可能它们彼此分离开。

过去的资料中，所用离心条件多用转数表达，现在国际资料中已经改用相对离心力（RelativeCentrifugalForce，RCF）表示，因为离心力不仅为转速的函数，也是离心半径的函数。转速相同时，离心半径越长，离心力越大，故仅以转速表达离

9

心力是不科学的。

相对离心力的单位用重力加速度Gravity，简写为“g”表示。G=9.8米/秒2

离心力和转速的关系

离心力计算表

10

附图—1

注：用尺连接半径线与转速线，与离心力线交叉的数字即尾离心力；用尺连接半径线与离心力线，延伸线与转速线的交叉点为所需转速。

11