中性粒细胞吞噬细菌过程
1)识别和粘着:在血清调理素作用下,吞噬细胞借其表面的Fc和C3b受体,能识别被抗体和补体包被的细菌,后者经抗体或补体与吞噬细胞相应受体相结合,细菌就粘着在吞噬细胞表面。 2)吞入:细菌被粘着之后,吞噬细胞形成伪足将其包围,随着伪足的延伸并相互吻合,形成由吞噬细胞膜包围吞噬物的泡状小体-吞噬体(phagosome)。吞噬体逐渐脱离细胞膜进入细胞内部,与溶酶体融合,形成吞噬溶酶体(phagolysosome)。 3)杀伤和降解:吞噬溶酶体形成之后,吞噬细胞通过溶酶体酶(溶菌酶、杀菌素、酸性水解酶、乳铁蛋白等)可破坏细菌菌膜或菌体代谢噬细胞代谢产物如氧代谢活性产物和酸性代谢产物也具有杀伤和降解细菌作用。
中性粒细胞吞噬作用
实验目的
1.熟悉中性粒细胞的吞噬作用原理和方法。
2.通过本实验理解机体的非特异性免疫机制。
实验原理
血液中的中性粒细胞即小吞噬细胞,通过趋化、调理、吞入和杀菌等几个步骤,能吞噬和消化衰老、死亡细胞及病原微生物等异物,是机体非特异性免疫的重要组成部分。 实验材料
1.葡萄球菌18h孵育的斜面或肉汤培养物。
2.抗凝人血(3.8%柠檬酸钠一滴加于无菌小试管中)、瑞氏染液、双蒸水
3.试管、玻片、采血针、酒精棉球、吸管、滴管、显微镜、香柏油
实验方法
1.取小试管一支,用滴管加入一滴3.8%柠檬酸钠溶液。
2..用酒精棉球消毒手指和采血针,从消毒部位采取2~3滴血加入试管中。
3..取一滴菌液加入小试管中,用吸管混匀。
4.置37℃水浴箱水浴15分钟,中途混匀一次。
5. 取出小试管,用吸管将试管中血液打匀后取血半滴于载玻片上,用另一载玻片推成薄血片。
6.待血片自干后,用瑞氏染液染色。
瑞氏染色法:取瑞氏染液数滴滴于上述血片上先染1分钟。然后加等量蒸馏水, 轻轻晃动混匀,继续染5分钟,水洗,用吸水纸吸干后镜检。
结果观察
油镜检查:寻找中性粒细胞,如果染色结果正确,可见细胞核及被吞噬的细菌染成紫色,而粒细胞的细胞浆则为淡红色。
计数:1.吞噬百分率:观察100个中性粒细胞,计算其中吞噬有细菌的中性粒细胞数,计算出吞噬细胞百分率。 2.吞噬指数:观察100个中性粒细胞,计算其中被吞噬的细菌总数,平均每个中性粒细胞吞噬的细菌数即为吞噬指数。
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