Everlab云端实验室-----吞噬细胞吞噬功能检测实验
实验概要
本文介绍了吞噬细胞吞噬功能检测(Assay of the Phagocytic Function of Phagocyte)实验的基本原理、操作步骤及注意事项等。
实验原理
吞噬细胞具有对异物(细菌、绵羊红细胞、鸡红细胞等)吞噬和消化的功能,在机体非特异性免疫中发挥重要作用。
小鼠腹腔内注射硫代乙醇酸钠,可刺激巨噬细胞的聚集。四日后小鼠腹腔内注入羊红细胞悬液,一小时后解剖收集腹腔吞嗜细胞,染色、镜检可观察对羊红细胞的吞嗜现象。通过计算吞嗜百分比或吞噬指数可测定吞噬细胞的吞嗜功能。
主要试剂
1. PBS 缓冲液
2. 3%硫代乙醇酸钠
3. 1%羊红细胞悬液
4. 瑞氏染液
5. 甲醇
主要设备
1. 解剖器材
2. 注射器
3. 尖吸管
4. 橡皮吸头
5. 小试管
6. 载玻片
实验材料
ICR 小鼠
实验步骤
1. 实验准备:用无菌注射器吸取3%硫代乙醇酸钠3ml,注射于小鼠腹腔内。
2. 四日后,注射1%羊红细胞悬液1ml 于小鼠腹腔内。
3. 注射1 小时后,将小鼠用颈椎脱臼法处死,解剖暴露腹腔,于腹腔靠上部位,用镊子轻轻夹起腹膜,将腹膜剪一小口,用尖吸管注入5ml 预温的PBS,同时用手反复揉搓腹腔约1—2 分钟,以便尽可能多地冲洗出小鼠腹腔的吞噬细胞。
4. 用尖吸管吸取腹腔液,置一洁净试管内。
5. 用尖吸管将腹腔液吹打均匀(尽量避免产生气泡),吸取一滴滴于载玻片上,加盖玻片镜检。
6. 观察结果,也可以将腹腔液涂片,平放于湿盘内,37℃,孵育30 分钟。取出涂片,用预温的PBS 冲洗3 次,然后用甲醇固定1 分钟,以瑞氏染液1 份加pH6.4 的PBS 2 份混匀后,滴于涂片上染色5-10 分钟,以蒸馏水冲洗(切勿先将染液倾去)后,待干,镜检。
7. 实验结果
观察小鼠腹腔巨噬细胞和中性粒细胞对羊红细胞的吞噬现象,计算吞噬百分比,即每100 个吞噬细胞中吞噬有羊红细胞的细胞数。也可用吞噬指数表示,即将100 个吞噬细胞中所吞噬羊红细胞的总数除以100,即为吞噬指数。吞噬百分比和吞噬指数一般是平行的。
注意事项
1. 充分揉搓腹腔,尽可能将吞噬细胞冲洗下来。
2. 用尖吸管吸取腹腔液时,尽量避开腹腔脏器,避免损伤血管引起出血,影响实验结果。
3. 用瑞氏染液染色时,切勿先将染液倾去后再冲洗,以免染液中细小颗粒附着于玻片上影响标本的清晰度。
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