细菌芽孢染色实验报告

细菌芽孢染色

姓名：徐一鸣学号：200900140145

地址：周三下午微生物实验楼341第六排

摘要：通过Schaeffer-Fulton氏染色法对枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和梭状芽孢杆菌（Clostridium sporogenes）进行芽孢染色，在光学显微镜下观察其菌体形态和芽孢的大小，数量，位置，得到清晰的染色结果。

关键词：芽孢；细菌；Schaeffer-Fulton氏染色法

前言：细菌的芽孢的某些细菌的特殊结构。芽孢是某些细菌生长到一定阶段在体内形成的一个圆形或椭圆形的休眠体，它对不良环境具有很强的抗性。在合适条件下，可吸水萌发，重新形成一个新的菌体。芽孢的大小、形状及其在菌体内的位置是鉴定细菌的重要依据。在一般实验室中通常用芽孢染色法来观察其形态。此外，由于芽孢具有很强的抗性，因此在生产实践中都以是否有杀死抗性最强的芽孢来评定高温灭菌及某些化学杀菌剂的效果。

细菌的芽孢具有厚而致密的壁，透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色（芽孢呈无色透明状）。芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的。所有的芽孢染色法都基于一个原则：除了用着色强的染料外，还须要加热，以促进芽孢着色，再使菌体脱色，而芽孢上的染料则难以渗出，故仍保留原有的颜色，然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，便于观察。

1.材料与方法

1.1材料

1.1.1菌种

枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），梭状芽孢杆菌（Clostridium sporogenes）

1.1.2染色剂和试剂

5%孔雀绿水溶液，香柏油，番红水溶液

1.1.3仪器及其他

载玻片，擦镜纸，吸水纸，记号笔，镊子，接种环，显微镜，酒精灯，夹子

1.2方法

1.2.1制片

按常规方法涂片、干燥、固定。

1.2.2加热染色

向载玻片滴加数滴5%孔雀绿水溶液覆盖涂菌位置，用夹子夹住载玻片在微火上加热至染液冒蒸气并维持5min，加热时注意补充染液，切勿涂片干固。

1.2.3脱色

待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出水无色为止。

1.2.4复染

用0.5%的番红水溶液复染2min。

1.2.5水洗

用自来水冲洗至流出水无色为止。

1.2.6镜检

将载玻片晾干后油镜检。

2 结果与分析

2.1实验结果

1）观察分别接种有枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和梭装芽孢杆菌（Clostridium sporogenes）的菌落形态，枯草杆菌菌落大，表面粗糙，扁平，不规则，梭装芽孢杆菌菌落扁平，不规则。

2）镜检观察，芽孢呈绿色，芽孢囊为红色。枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）菌体形态为短杆状，末端钝圆，单生或形成短链，芽孢椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，含芽孢菌体不膨大（见图1）。梭装芽孢杆菌（Clostridium sporogenes）芽孢呈圆形或卵圆形，直径大于菌体，位于菌体中央，极端或次极端，使菌体膨大呈梭状（见图2）。

2.2分析

在观察梭装芽孢杆菌（Clostridium sporogenes）芽孢时，发现有些部位孔雀绿水溶液染色过深，导致水洗时无法完全洗去，影响观察。以后实验中应注意孔雀绿水溶液加入的量，及加热时间，防止染色过深。

实验时应注意一下以下几点：选用适当菌龄的菌种，幼龄菌尚未形成芽孢，而老龄菌芽孢囊已经破裂；加热染色时必须维持在染液冒蒸汽的状态，加热沸腾会导致菌体或芽孢囊破裂，加热不够则芽孢难以着色；脱色必须等待玻片冷却厚进行，否则骤然用冷水冲洗会导致玻片破裂。

3.小结

本次试验用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，效果清晰，较为显著，只是在观察梭装芽孢杆菌（Clostridium sporogenes）芽孢时，发现有些部位孔雀绿水溶液染色过深，导致水洗时无法完全洗去，菌体也被染色，影响观察。以后实验中应注意孔雀绿水溶液加入的量，及加热时间，防止染色过深，影响观察。

参考文献

沈萍陈向东，《微生物学实验》，第79页，高等教育出版社

王桂平，李财新，优化的细菌芽孢染色技术，微生物学杂志

第二篇：实验五细菌芽孢染色

实验五——细菌芽孢染色

山东大学生命科学学院09级四班

张行润

200900140177

摘要

关键词

芽孢（gemma of a fungus）芽孢染色法（Spore staining）复染（counterstain）前言

细菌的芽孢的某些细菌的特殊结构。芽孢是某些细菌生长到一定阶段在体内形成的一个圆形或椭圆形的休眠体，它对不良环境具有很强的抗性。在合适条件下，可吸水萌发，重新形成一个新的菌体。芽孢的大小、形状及其在菌体内的位置是鉴定细菌的重要依据。在一般实验室中通常用芽孢染色法来观察其形态。此外，由于芽孢具有很强的抗性，因此在生产实践中都以是否有杀死抗性最强的芽孢来评定高温灭菌及某些化学杀菌剂的效果。

一、实验目的

1. 学习并掌握芽孢染色法

2. 了解芽孢杆菌的形态特征

3. 巩固显微镜操作技术及无菌操作技术

二、实验原理

芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属细菌生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，液被称为内生孢子，通常呈圆形或椭圆形。细菌能否形成芽孢及芽孢的形状，着生位置、芽孢囊是否膨大等特征都是鉴定细菌的重要指标。与正常细胞或菌体相比，芽孢壁厚、透性低而不易着色，但是芽孢一旦着色就很难被脱色。利用这一特点，首先用着色能力较强的染料，如孔雀绿（malachite green）或碱性品红（basicfuchsin）在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出。再用对比度大的复染剂（如番红液）染色后，菌体染上复染剂颜色，而芽孢仍为原来的颜色，这样就可以将两者区别开来。

三、实验器材

A. 菌种

枯草芽孢杆菌，梭状芽孢杆菌

B. 溶液和试剂

5%孔雀绿溶液，0.5%番红水溶液

C. 仪器和其它用品

酒精灯，酒精，木夹，香柏油，二甲苯，载玻片，盖玻片显微镜，香柏油，擦镜纸和接种针等

四、实验内容

1) 制片

按常规涂片、干燥、固定。

2) 染色

加数滴5%孔雀绿染液于涂片上，用木夹夹住载玻片一端，在微火上加热至染料冒蒸汽并开始计时。维持5min。加热过程中及时补充染液。切勿让涂片干涸。

3) 水洗

待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗载玻片背面，直至流出的水无色为止。

4) 复染

用0.5%番红染液复染1.5min 。

5) 水洗

用缓流水洗后，干燥。

6) 镜检

先低倍镜，再高倍镜，最后油镜观察。

五、实验结果

芽孢呈绿色，芽孢囊及营养体为红色。枯草芽孢杆菌芽孢呈椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，菌体基本无大变化；梭状芽孢杆菌芽胞呈圆形，比菌体粗，位于菌体顶端，使细菌呈鼓槌状。

图一：

枯草芽孢杆菌（10×100）图二：梭状芽胞杆菌（10×100）

芽孢呈绿色，芽孢囊及营养体为红色