食品卫生综合检验试验总结
食品质量091 金秀建 20xx016521
为期五天(20xx年x月x日-15日)的食品卫生综合检测实验已经告一段落了,在这一周的微生物实验主要包括牛奶中大肠菌群的计数、鸡蛋中沙门氏菌的检验和牛奶中金黄色葡萄球菌的检验三个实验,经过三个综合实验的课程,能让我更能理解试验时要掌握的细节,也要保持头脑的时刻清醒。同时让我对这三种微生物有了更进一步的认识,同时让我也对实验也更加熟悉了。
首先我们做的是大肠菌群的计数,它是采用MPN(最大可能数法)的计数来测定的。大肠菌群的特性为:在37℃,24小时内能发酵乳糖,产酸、产气,好氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌,一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。其检测原理为细菌在样品内的分布是随机的,所以检测细菌时,可按概率理论计算菌数。大肠菌群MPN计数的检验程序为样品的稀释、初发酵试验、复发酵试验和最后的大肠菌群最可能数(MPN)的报告。那么在第一天的上午,老师基本给我们讲了实验的原理和步骤,以及一些需要注意的地方,我们便开始计算自己需要配制的实验试剂的量,并且称取试剂的量和清洗所要用的实验器皿,首先配置的是生理盐水和LST肉汤,并且把生理盐水和LST肉汤分装到试管内,盖好盖子包扎好进行灭菌,灭完菌也就到了吃饭时间,等下午来接种培养了。
牛奶样品与生理盐水以1:9的比例进行混合,摇匀后做10倍系列的稀释,做了3个稀释度。随后将三个稀释度的样品匀液以每个稀释度3支试管接种到内装小导管的含LST肉汤的试管中,最后放入恒温培养箱中培养24h。在经过24h的培养后,所有的试管内均产生气体,而后我们要将培养后的有菌落的LST肉汤接种到BGLB肉汤试管中进行培养24-48h,观察后发现所有的BGLB管都产气,颜色也有原来的绿色变成暗黄色,证明也产生了酸,所以记为所有产气管为大肠菌群阳性管。最后查MPN表可得出每毫升样品中大肠菌群的MPN为大于等于1100ml/MPN。
我们小组在做大肠菌群测定还是很顺利的,中途没有出现什么错误,实验很顺利,小组成员的配合和分工也都很好。
第二个实验是鸡蛋中的沙门氏菌的检测,他的特性是:沙门氏菌需氧或兼性
厌氧,10-42℃都可生长,最适温度为37℃,大部分可发酵葡萄糖,产酸产气,是革兰氏阴性的无芽孢杆菌。在营养琼脂平板上生长产生光滑,湿润,半透明,边缘整齐的菌落。在血平板上产生透明溶血环,形成大小中等的灰白色菌落。实验过程可分为前增菌、选择性增菌、选择性平板分离、生物化学筛选四个阶段。
实验首先配制BPW溶液,进行分装和高压灭菌,在无菌条件下,移取5ml鸡蛋液样品于盛有45mlBPW的组织培养瓶中,混匀,放置于36℃±1℃的恒温培养箱中培养24h±2h,观察生长现象。接下来的增菌阶段,需要配制TTB增菌液和SC增菌液,移取1ml的前增菌液接种到10mlTTB增菌液内,在恒温培养箱内培养18h~24h,SC增菌液过程与TTB一样。接下来需要制备BS平板和HE平板,等平板凝固后便可以开始接种了,是采用平板分多区划线的方法,然后放在37度温箱培养18~24h。最后要进行生化实验,要先配制三糖铁琼脂,从培养皿的平板上挑取可疑菌落,接种到三糖铁琼脂,先与底层穿刺,再在斜面划线。同时把菌落接种到各种生化试剂里,封口后一起放入恒温培养箱培养18h。取出培养皿和生化小试管观察结果,记录。
第三个实验是金黄色葡萄球菌的检验,它的特性一般是无芽孢,鞭毛。大多数无荚膜,革兰氏染色阳性,它培养的营养要求不高,在普通培养基上就能生长良好,需氧或兼性厌氧。在血平板上培养会使红细胞破裂,形成透明的溶血环。在显微镜下可以看到是紫色的,排列成葡萄状的圆形的菌。
首先是样品的处理,称取22g7.5%氯化钠肉汤溶解于250ml水中,在每个均质瓶内移取45ml,同时制取Baird-Parker培养基,高压灭菌后吸取牛奶样品5ml到均质瓶内。放入恒温箱培养18-24h。然后用接种环取培养物分别划线接种到Baird-Parker 平板和血平板上,培养18-24h, Baird-Parker平板有可能需要培养45-48h。最后进行血浆凝固酶试验,挑取BP平板或血平板上可疑菌落1个或以上,分别接种到5ml左右BHI肉汤中,36±1℃培养18-24h。取新鲜兔血浆0.5ml,加入BHI培养物0.2-0.3ml,振荡摇匀,置36±1℃温箱培养,半小时观察一次,6小时观察,直至出现凝固,判为阳性结果。也有小组6h后也没凝固的,则判为阴性。最后进行革兰氏染色实验,观察细菌的形态特征。最后记录结果。
三个实验虽然不多,但是三个实验的跨度刚好是一个星期,所以我们实验刚
好可以做完,实验从刚开始的懵懂到慢慢的熟悉,到最后的成功,少不了的是小组合作和老师的帮助。经过三个微生物的实验,让我对微生物实验的过程。不过对于微生物的实验一定要细心,一个是它需要的时间很长,要灭菌和培养,如果做错都得重新再来,并且实验过程中不能被污染,否则会对实验结果造成一定的污染或完全不可用。对实验流程一定要熟悉,现象一定要观察仔细,因为类似的菌类有很多,其生产的习性也类似,若不观察仔细,就会有结果的偏差。我们小组的实验都很顺利,中途虽有一点点过失,但对实验的进度和结果没有什么大的影响,实验结果也是让我们蛮有成就感的,感谢小组的配合。操作不像理论,只有多次练习才有体会,在今后的实验中,我会更加努力。
灭菌:
1.热力灭菌法
干热灭菌法:160-170℃,2h
高压蒸汽灭菌法:103.4kPa (121℃),15-30min
2.紫外线灭菌:265-266nm,破坏DNA构型
培养基:
1.液体培养基——基础培养、生化反应、糖发酵管
2.固体培养基(斜面培养基)——纯培养、短期保存菌株
3.半固体培养基——检测细菌动力
化脓性球菌的分离鉴定:
致病性肠道杆菌的分离鉴定:
平板划线法
接种工具:接种环
培养基——化脓菌:血平板,肠道菌:SS平板
注意事项:菌量适当;遵守无菌操作原则,全程避免杂菌污染;划线力度、划线角度
观察细菌的形态特征
1.单染色法:观察细菌形态,但不能鉴别
2.复染色法(观察形态,鉴别细菌)
革兰染色法、抗酸染色法
3.特殊染色法——特殊结构或特殊成分的染色
常见应用:荚膜、芽胞、鞭毛、异染颗粒染色
革兰染色法:
1.涂片
标记载玻片→滴加标本→用接种环涂布均匀,形成直径约1cm菌膜
2.干燥:空气中,或酒精灯火焰上方热空气中
3.固定:迅速通过酒精灯外焰三次,冷却
4.染色
初染:滴加结晶紫,覆盖菌膜,静置1min,流水冲洗(背面)
媒染:滴加卢戈碘液,覆盖菌膜,静置1min,流水冲洗
脱色:玻片浸入95%乙醇中,冲洗至染料不再溶下为止,水洗(背面)
复染:滴加石炭酸稀释复红,覆盖菌膜,静置30s,流水冲洗(背面)
5.干燥(滤纸吸干水分)、镜检(油浸镜)
甘露醇发酵实验
培养基:甘露醇发酵管
接种工具:接种针
方法
1灭菌接种针
2从斜面沾取菌落
3接种至培养基液面下
4灭菌接种针
5培养18-24h
结果判定
阳性:蓝→黄
致病性葡萄球菌
血浆凝固酶实验
玻片凝集试验
方法
1玻片划分两格
2灭菌接种环
3分别取盐水或兔血浆于两
4取待检菌,盐水中研磨
5灭菌接种环
6取待检菌,兔血浆中研磨
7摇动玻片,2min内观察
结果判断
阳性:出现凝集
致病性葡萄球菌常(+)
药敏试验
培养基:普通平板
方法:药片扩散法
按照无菌操作原则,用接种环取少量纯培养物
接种于平板上,反复交叉密集划线
镊子灭菌,冷却,分别取4种药片,平贴于平板上,轻轻压
药片间距>24mm、药片距平板边缘>15mm
静置15min,平板倒置培养16-18h,观察结果
因子血清鉴定
步骤
鉴定属:A-E多价血清
鉴定组:A-E单价0抗体血清
鉴定种:H抗体血清
注意事项
血清量足够,避免干燥
每格研磨后,灭菌接种环,避免交叉污染
2min内观察结果
Ø 在SS琼脂平板上,致病性肠道杆菌菌落特征是直径小,无色或淡红色半透明,非致病性肠道杆菌的菌落特征是直径中等大小,深红色。
Ø 斜面培养基主要用于纯培养,短期保存菌株;半固体培养基主要用于检测细菌动力。分离肠道杆菌常用斜面
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