基 因 工 程

实验报告

  

甘薯ADK基因反义载体的构建

（西南大学生命科学学院，重庆400715）

摘要：以甘薯为材料，提取甘薯的基因组DNA，以其基因组DNA为模板在体外克窿甘薯ADK基因核心片段并电泳检测基因的纯度。利用含有pHB载体质粒的大肠杆菌提取pHB质粒。将PHB质粒和ADK基因片段进行双酶切，构建ADK基因反义载体，检验是否构建成功，最后转入大肠杆菌中检验观察是否转入成功。

关键词：甘薯；腺苷酸激酶基因（adk）；反义载体；PCR

英文摘要：

1.综述

1.1甘薯

甘薯(Ipomoea batatas (L. ) Lam.)属旋花科(Convolvulaceae)甘薯属((Ipomoea)蔓生一年生草本植物，染色体数为2n=6x=90。在我国因各地语言差异，甘薯的中文俗名较多，又名番薯、白薯、地瓜、山芋、红芋、红苔、红薯等[u1，其英文一般写作sweet potato，在美国也有写为sweetpotato[27. 1989年美国甘薯合作者组织规定用Sweetpotato表示甘薯，以便更准确地表达甘薯的特性及与Potato(马铃薯)相区别[37。目前，此表达方式已在美国、澳大利亚等许多英语国家采用，并逐步被其他国家或地区的甘薯研究者所接受〔引。目前学术界一致公认甘薯起源于热带美洲，经“Kumara"路线、"Batata"路线、"Kamote"路线传播到世界各地〔.5J，由于甘薯具有耐旱、耐痔，繁殖力强、适应性广、栽培简便、产量高，用途广泛等特点，现已在全世界广泛栽培。我国的甘薯栽培己有400多年的历史。据史料记载，甘薯于16世纪的1563-1594年间，经陆海多种渠道传入我国。在我国，甘薯的栽培分布很广，南起海南诸岛，北至内蒙古，西北达陕西、陇南和新疆一带，东北经辽宁、吉林延展到黑龙江南部，西南抵藏南和云贵高原。‘四川盆地、黄淮海、长江流域和东南沿海各省是我国甘薯的主产区

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分类号:   Q78                                编号:            

 本科生基因工程实验论文

 

指导教师：        X   X   X      

学 生：        X  X     

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甘薯ADK基因反义表达载体构建

基 因 工 程

实

验

报

告

2009级生物科学（师范） 1 班 第 1

组

甘薯ADK基因反义表达载体构建

甘薯ADK基因反义表达载体构建

（西南大学生命科学学院，重庆400715）

摘要：以甘薯为材料，提取甘薯的基因组DNA，以其基因组DNA为模板在体外克窿甘薯ADK基因核心片段并电泳检测基因的纯度。然后，将含有目的基因ADK基因的基因片段与T载体用限制酶BamHⅠ+XbaⅠ进行双酶切后连接，将带有目的基因的T载体导入大肠杆菌DH5?感受态细胞中，扩增之后，在加有相应抗生素的LB平板上筛选阳性克隆、筛选并PCR检测鉴定。最后，对表达载体进行酶切鉴定。

关键词：甘薯；腺苷酸激酶基因（adk）；反义载体；双酶切；PCR检测鉴定

英文摘要：For the materials with sweet patato extraction, the genomic DNA, with its genomic DNA gallery for template in vitro ADK genes, sweet core fragments and electrophoresis gene purity. Then, the purpose ADK genes with T carrier, with a purpose to connect the genes DH5a escherichia coli T ectors to feel normal cells, the expansion in the corresponding after plate screening of antibiotic LB positive cloning. At the same time, the extract of high quality sweet RNA in RNA, electrophoresis its purity.

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实验报告

实验项目名称：基因工程综合实验

实验项目性质：综合性实验

所属课程名称：基因工程

班 级：11生物工程1班

学 号： 

指 导 老 师 ：

实验完成时间：

目录：

1.摘要 ..................................................3

1.前言 ..................................................3

2.实验材料和仪器................................................3

2.1 实验材料

2.2实验仪器 .

3.实验试剂 ..........................................4

3.1 DNA提取所需试剂

3.2 PCR实验所需试剂

3.3 双酶切实验所需试剂

4.实验步骤 ...........................................4

4.1 质粒DNA提取

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大肠杆菌核糖核苷酸HII基因的克隆及其检测

（基因工程实验报告）

程庆佳

（云南大学，生命科学学院，生物技术，20091070004）

（班级：周二下午实验班; 组号:第八组; 老师：赖建华； 同组员：顾聚）

摘要：此次实验的目的是对大肠杆菌核糖核苷酸HII基因的克隆及其检测，其中的关键步骤包括了大肠杆菌基因DNA的提取，PCR扩增，DNA体外重组，感受态细胞的制备，重组DNA的转化，重组转化的检测等多种具有紧密连接性的实验，使学生可以掌握一套具有连贯性的实验过程，帮助学生塑造连贯试验的观念，从而得到更好地成长与进步。

关键词：提取、扩增、重组、感受态细胞、转化、检测

正文：此次实验的最终目的是要使学生连贯性的掌握本学期的实验，所以要求我们要熟悉每个实验的原理过程，以及实验结果的准确分析，只有这样才能保证实验最终结果的准确性，才能真正地掌握此次实验。

1、 大肠杆菌基因组DNA的提取

原理： DNA是一个环形的大分子DNA,真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内。不同种属的生物，以及不同形式的细胞（如菌类、培养细胞、植物组织，动物组织）基因组提取的方法是不同的，但其基本原则是类似的，即既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含十二烷基硫酸钠（SDS）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。SDS的作用机理是由于其能结合蛋白，中和蛋白的电性，使蛋白质的非共价键受到破坏，失去二级结构，从而变形失活，蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二钠）存在的情况下保持很高的活性。在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可通过失活蛋白破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离；而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA分子完整地分离出来。CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB-核酸的复合物与蛋白，多糖类物质分开。最后通过乙醇或异丙醇沉淀DNA，而CTAB溶于乙醇或异丙醇而除去。

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内蒙古大学生命科学学院生物系基因工程实验室

本科基因工程大实验开题报告

论文题目：纳豆激酶基因表达载体的构

建及在大肠杆菌中的表达 

学生姓名：                        

年    级：                        

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小麦 GAPDH 截短体的重组与表达

(一)   实验思路：

(二)   实验及仪器：

高速冷冻离心机、低温冰箱、液氮罐、研钵、剪刀、镊子、PCR扩增仪、台式离心、恒温水浴锅、微量移液器、培养皿、带帽试管、涂布器、无菌操作台（含酒精灯、接种环、灭菌牙签等）、恒温摇床、1.4ml EP 管、培养皿、电转印、摇床、紫外灯、恒温水浴箱、电泳仪系统、凝胶成像系统等

(三)   实验步骤：

1.  小麦总 RNA 提取（Trizol 法）

1.1   材料：小麦幼苗

1.2   试剂配制及器具处理

①  0.1%的 DEPC H₂O（DEPC：焦碳酸二乙酯）

②  器具处理：试剂瓶、量筒、研钵、大小枪头和 1.5ml 和 0.2ml 的 EP 管等用纱布刀、镊子和药匙等 160℃烘烤 6h 以上。

③  无 RNA 酶灭菌水（DEPC H2O）：用将高温烘烤的玻璃瓶 （180℃×2h）装蒸馏水，然后加入 0.1%的 DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌。

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分子生物学与基因工程原理实验报告 ----绿色荧光蛋白（GFP）基因的克隆和表达

姓名：张可欣 王跃

学号：201220142012 201220142022

组别:1组

背景知识

绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白。当受到紫外或蓝光激发时，GFP发射绿色荧光。它产生荧光无需底物或辅因子发色团是其蛋白质一级序列固有的。GFP基因由3个外显子组成，长2.6kb；GFP是由 238个氨基酸所组成的单体蛋白 ,相对分子质量为27.0 kMr，其蛋白性质十分稳定，能耐受60℃处理。19xx年GFP的晶体结构被解出，蛋白质中央是一个圆柱形水桶样结构，长420 nm，宽 240 nm，由 11个围绕中心α螺旋的反平行β折叠组成，荧光基团的形成就是从这个螺旋开始的，桶的顶部由 3个短的垂直片段覆盖，底部由一个短的垂直片段覆盖，对荧光活性很重要的生色团则位于大空

腔内。发色团是由其蛋白质内部第65-67位的

Ser-Tyr-Gly自身环化和氧化形成。

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