实验报告：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质
一、 实验原理：
1. 某些化学试剂能使生物组织中得有关化合物产生特定的            反应。
2. 糖类中的还原糖，如         、          与           发生作用，生成          。
3. 脂肪可以被               染成橘黄色，或被               染成红色。
4. 蛋白质与               发生作用，产生      反应。   
二、 材料用具：
 实验材料：苹果或 梨匀浆，花生种子，豆浆。
 用具：双面刀片，试管，试管夹，大小烧杯，小量筒，三脚架，石棉网，火柴，载玻片，盖玻片，毛笔，吸水纸，显微镜等。
 试剂：斐林试剂，甲液：质量浓度为                 ，乙液：质量浓度为                 ；苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液，双缩脲试剂：A液：质量浓度为              ，B液质量浓度为                。
三、    方法步骤：
（一）    还原糖的检测和观察
①向试管内注入2ml              。（选择具体材料）
②向试管内注入          斐林试剂，（甲液和乙液                 再注入。）
③将试管放入盛有              的大烧杯中加热       。
④观察试管中出现的颜色变化。
（二）    脂肪的检测和观察

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蛋白质测定方法

——化学报告

蛋白质的检测

              

     由上表可大致了解五种检测蛋白质的方法，下面以实验的形式进行详细阐述：

1　材料与方法

1.1　仪器材料

(1)仪器:凯氏定氮仪、紫外分光光度计、可见光分光光度计、工作离心机、布氏漏斗、抽滤泵。

(2)试剂及原材料:牛奶、酸奶、豆浆、0.12mol/LpH=4. 7醋酸- 醋酸钠缓冲液、乙醇-乙醚等体积混合液、浓H2SO4 、40%氢氧化钠、30%过氧化氢、2%硼酸溶液、0. 050molPL标准盐酸溶液、硫酸钾- 硫酸铜接触剂、混合指示剂、标准蛋白溶液、双缩脲试剂、考马斯亮蓝G- 250试剂。

1.2　实验方法

(1)凯氏定氮法测定蛋白质含量

将待测样品与浓硫酸共热,含氮有机物即分解产生氨(消化) ,氨又与硫酸作用,变成硫酸铵。为了加速消化,可以加入CuSO4 作催化剂和加入K2SO4 以提高溶液的沸点,而加入30%过氧化氢有利于消化溶液的澄清。消化好的样品在凯氏定氮仪内经强碱碱化使之分解放出氨,借蒸汽将氨蒸至定量硼酸溶液中,然后用标准盐酸溶液进行滴定,记录,计算出样品含氮量。每个样品做三次重复测定,取平均值。

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实验一 双缩脲法测定血清蛋白质含量

【实验名称】：双缩脲法测定血清蛋白质含量

室温：20°

（一）实验目的： 1.掌握双缩脲法测定蛋白质的原理。2.学习掌握分光光度计的使用。

3.掌握标准曲线的制作。4.学习分光光度法测定的原理和方法。

（二）实验原理：血清中蛋白质的肽键（-CO-NH-）在碱性溶液中能与2价铜离子作用生成稳定的紫红色络合物。此反应和两个尿素分子缩合后生成的双缩脲（H2N-OC-NH-CO-NH2）在碱性溶液中与铜离子作用形成紫红色的反应相似，故称之为双缩脲反应。这种紫红色络合物在540nm处有明显吸收峰，吸光度在一定范围内与血清蛋白含量呈正比关系，经与同样处理的蛋白质标准液比较，即可求得蛋白质含量。

（三）实验材料与仪器：

1.仪器和材料： 分光光度计、7支试管、1毫升刻度吸管3支、移液器、坐标纸。

2.试剂：6mol/L的NaOH、双缩脲试剂、9g/L的NaCl溶液、蛋白质标准液（10g/L)、待测血清样本。

（四）实验步骤和结论:

1.取7支试管，编号，按照图1操作并记录。

表 1

2.在坐标纸上以各管蛋白质含量为横坐标，光吸收值（两管平均值）为纵坐标，绘制标准曲线。

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实验报告：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质

班级：       学号：       姓名：             

一、 实验原理：
1. 某些化学试剂能使生物组织中得有关化合物产生特定的            反应。
2. 糖类中的还原糖，如         、          与           发生作用，生成          。
3. 脂肪可以被               染成橘黄色，或被               染成红色。
4. 蛋白质与               发生作用，产生      反应。   
二、 材料用具：
 实验材料：                                              。
 用具：双面刀片，试管，试管夹，大小烧杯，小量筒，三脚架，石棉网，火柴，载玻片，盖玻片，毛笔，吸水纸，显微镜等。
 试剂：斐林试剂，甲液：质量浓度为                 ，乙液：质量浓度为                 ；苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液，双缩脲试剂：A液：质量浓度为              ，B液质量浓度为                。
三、    方法步骤：
（一）    还原糖的检测和观察
①向试管内注入2ml                         。（选择具体材料）
②向试管内注入          斐林试剂，（甲液和乙液                 再注入。）
③将试管放入盛有                  的大烧杯中加热   。
④观察试管中出现的颜色变化。
（二）    脂肪的检测和观察

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生物化学实验报告

姓    名：         

学    号：     

专业年级：         

组    别：        

生物化学与分子生物学实验教学中心

一、实验目的

1、掌握双缩脲测定血清总蛋白的基本原理、操作；

2、熟悉血清总蛋白的临床意义；

3、了解双缩脲法测定血清总蛋白的特点和注意事项。

二、实验原理

（一）：双缩脲反应

在碱性溶液中,双缩脲(H2NOC－NH－CONH2)能与Cu2+作用,形成紫色或紫红色的络合物,这个反应叫做双缩脲反应。两分子尿素加热脱氨缩合成的双缩脲（H2N-OC-NH-CO-NH2），因分子内含有两个邻接的肽键，在碱性溶液中可与Cu2+发生双缩脲反应 ，生成紫红色络合物；蛋白质分子含有大量彼此相连的肽键（-CO-NH-），同样能在碱性条件下与Cu2+发生双缩脲反应，生成的紫红色络合物，且在540nm处的吸光度与蛋白质的含量在10～120g/L范围内有良好的线性关系。

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实验一蛋白质的含量测定-双缩脲法

一．       实验目的：掌握双缩脲法测定蛋白浓度的原理及方法。

二．实验原理

1. 双缩脲反应:

在碱性溶液中，双缩脲(H₂N-OC-NH-CO-NH₂)与CuSO₄作用形成紫红色的络合物，在540nm处有最大吸收，这一反应称为“双缩脲反应”。凡具有两个或两个以上的肽键(-CO-NH-)的化合物都呈双缩脲反应。蛋白质分子中因含有很多的肽键，故所有蛋白质都有双缩脲反应。在一定的浓度范围内，生成的颜色深浅与蛋白质含量成正比，因此可用作蛋白质定量测定。

由于参与反应的是蛋白质的肽链结构，与组成蛋白质分子肽链氨基酸残基的侧链功能关系较少。因此，不同蛋白质的双缩脲反应基本相似。

2. 分类:

常量法：测定蛋白质浓度范围：1∽10mg/ml,选用540nm比色测定。

微量法：选在310∽330nm检测，灵敏度比540nm检测高10倍。

优点: ①利用双缩脲反应生成有色物质用作蛋白质的比色测定受蛋白质种类影响较小, 是优点之一。

②试剂和操作的简单、迅速也是其优点。

缺点: 灵敏度较差，仅适用于蛋白质浓度在0 .5mg/ml以上的样品测定 。Tris缓冲液、类脂、色素、一些氨基酸等会干扰此测定。

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实验八  双缩脲法测定面粉中蛋白质的含量

一、目的要求

1．学习双缩脲法的基本原理及操作。

2．通过实验学会制作标准曲线。

二、实验原理：

双缩脲（NH₃CONHCONH₃）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO₄形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。在一定的浓度范围内，紫色络合物颜色深浅与蛋白质含量呈线性关系（即：颜色的深浅与蛋白质浓度成正比）而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可在540nm处比色用来测定蛋白质含量。测定范围为1－10mg蛋白质/ml。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。

    此法的优点是较快速 ，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。

三、操作方法：

1．标准曲线的制作。酪蛋白：10mg/ml（如果用干酪素来配制则需用0.05M NaOH做溶剂，也可以用酪蛋白酸水解物直接配制。）

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实验一:双缩脲法测定蛋白质含量

一  目的  掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理及方法。

二  原理

双缩脲(                           )是两分子尿素经180℃左右加热,放出一分子氨( NH3)后得到的产物。在强碱溶液中，双缩脲与CUSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。其原因是含有两个及以上肽键或类似肽键有化合物都具有类似双缩脲反应。蛋白质含有多个肽键，在碱性溶液中能与CU2+络合成紫红色的络合物。其颜色的深浅与被测样品中蛋白质浓度呈正比，而与蛋白质分子量和氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。该法对样品中蛋白质含量要求相对较高，一般在1—10mg/L蛋白质。tris（三甲羟基氨基甲烷）、一些氨基酸、EDTA（乙二胺四乙酸）、草二酰胺、多肽等会于扰该测定。

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