生物实验报告

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实验题目：ABO血型鉴定

实验目的：1.掌握血涂片的制作，了解各种血细胞的结构特点

2.掌握ABO血型的鉴定方法

实验原理：人类的ABO血型遗传是由基因决定的。很多時间，一个基因只包含两个等位基因。但是，控制血型的基因I则有三个不同等位基因。即同一时间内，一个位点可以有其中任何两个等位基因出现。

等位基因A使红血球产生抗原A；

等位基因B使红血球产生抗原B；

等位基因O使红血球不产生抗原；

等位基因A和B为等显性，O对A和B均为隐性。

ＡＢＯ血型鉴定的原理是根据红细胞上有或无Ａ抗原和Ｂ抗原或AB抗原，将血型分为Ａ型、Ｂ型、ＡＢ型及Ｏ型四种。本实验采用红细胞凝集试验，用已知抗Ａ和抗Ｂ单克隆抗体来测定红细胞上有无相应的Ａ抗原或Ｂ抗原或AB抗原来确定ABO血型。

抗原抗体反应——在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A单克隆抗体或B抗原加抗B单克隆抗体，则产生凝集现象→从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原→判断血型

抗体在相邻的红细胞表面抗原决定簇之间搭桥形成肉眼可见的颗粒状凝集团块.

实验对象：血液

实验器材：受检者血液

抗A、抗B单克隆抗体

载玻片、脱脂棉、针、酒精棉球、生物显微镜、冰箱等。

实验方法及步骤：

1.血涂片的制作

n 用酒精棉球擦拭消毒指尖，用采血针刺破指尖或耳垂，从采血针眼处挤出绿豆大小血滴，用清洁玻片面的一端轻轻接触血滴，使血滴附于玻片面上（注意勿触及皮肤，否则血在玻片上就不能成滴）。

n 以左手拿该片的两端，迅速用右手拿住另一载玻片的一端，在左手载玻片上由前向后接触血滴，使两载玻片约成45°角，轻轻移动，使血滴成一直线，然后由前向后推为一均匀的薄片。

n 涂片在空气中干燥后置于染色架上，滴加瑞氏染色液，使涂片被染色液覆盖。

n 染1分钟后，再加等量的缓冲液于染色液上，浸染约5-8分钟此时涂片表面呈现一层古铜色。

n 用蒸馏水迅速冲洗，见涂片呈粉红色后，自然晾干。

2.血细胞观察

    制作良好的血涂片厚薄适宜，血膜分布均匀，呈粉红色。选一厚薄适宜部位置显微镜下观察。先用低倍镜观察全片，了解涂片染色、细胞分布情况，再用高倍镜观察。

n 红细胞  数量最多，体积小而圆、均匀分布，呈红色的圆盘状，边缘厚，着色较深，中央薄，着色较浅，无细胞核、细胞器，胞质内充满血红蛋白。

n 白细胞  白细胞数量较红细胞数量少，但胞体大，细胞核明显，极易与红细胞区别开。

n 嗜中性粒细胞  是白细胞中较多的一种，约占白细胞总数50-70%。体积比红细胞大，主要的特征是胞质中的特殊颗粒细小，分布均匀，着淡紫红色。胞核着深紫红色，一般分3—5叶，叶间以染色质丝相连。核分叶的多少与该细胞年龄有关，如核为杆状，则为嗜中性粒细胞的幼稚型。

n 嗜酸性粒细胞  比中性粒细胞略大，数量少，约占7%以下。核常分两叶，着紫蓝色。主要特点是胞质内充满粗大、圆形的颗粒，色鲜红或桔红。

n 嗜碱性粒细胞  数量很少，约占1%以下。在一般血涂片上不易找到，体积比上述2种白细胞稍小。胞质中分散着许多大小不一的深紫蓝色颗粒。胞核形状不定,圆形或分叶，也染成紫色，但染色略浅，一般都被颗粒遮盖，形状不清

n 淋巴细胞  数量较多，约占20%-40%，可见中、小型，淋巴细胞。其中小淋巴细胞最多,略大于红细胞。核大而圆,几乎占据整个细胞，染成深蓝紫色。胞质极少，仅在核的一侧出现一线状天蓝色或淡蓝色的胞质。中淋巴细胞比红细胞大，胞质较小淋巴细胞的稍多，着色较浅。核圆形或卵圆形，位于细胞中部，也染成深蓝紫色。                         

n 单核细胞  数量少，约占2%-8%，是细胞中体积最大的一种，胞核呈肾形、马蹄形，常在细胞一侧，着色比淋巴细胞浅。

n 血小板  为形状不规则的细胞小体，其周围部分为浅蓝色，中央有细小的紫色颗粒，常聚集成群，分布于红细胞之间。高倍镜下一般只能看到成堆的紫色颗粒，在油镜下才能看到颗粒周围的浅色胞质部分。

3.血型鉴定

n 标记凹载玻片：左上角写A，右上角写B。

n 分别吸取抗A、抗B单克隆抗体各1滴滴于双凹载玻片左端和右端。

n 采血针刺破左手无名指尖或耳垂，待血液出来后，用2支毛细滴管吸取或消毒后的牙签挑取血液，分别加入到玻片左、右两侧的单克隆抗体试剂内，并用牙签搅拌，使单克隆抗体试剂与血液混匀。（切勿混用毛细滴管和牙签！）然后置室温下5min后观察结果。

n 肉眼观察：如果外观略呈花边状或锯齿状，看上去有沉淀，则多为凝集；如果血滴呈均匀状态，边缘整齐，则多为不凝集。

n 进一步在低倍镜下观察：在低倍镜下，如果观察到红细胞凝集成团，或尚有少数游离细胞，则为凝集现象；如果红细胞均为游离状态，则为不凝集。根据镜下所见有无凝集现象判定血型。

n 判断血型 根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集，判断其血型。

注意事项：

玻片、试管都要标记！！！，A及B标准血清/抗A、抗B单克隆抗体绝对不能相混,不要依靠用染料颜色标记血清。工作中要形成自己的习惯！

所用玻片、试管实验前必须清洗干净，以免出现假凝集现象。

红细胞悬液滴管头不能接触标准血清液面，竹签一端去混匀一侧就不能去接触另一侧。

一般先加血清，然后再加红细胞悬液，便于核实是否漏加血清。

离心时间、速度严格要求，以防假阳性或假阴性结果。

要在光亮的背景下观察凝集,可使用光镜检查小的凝集,同时应注意观察凝集强度，有助于A、B亚型的发现，观察后立即记录观察结果。

实验结果：采血者为A型血

思考题：

假如一父母的血型为A+B，那么其后代的血型可能是什么？并按示例写出其过程。

答：子女的血型可能为A、B、AB和O

 

第二篇：生理学ABO血型鉴定实验报告模板

实验人员：

实验日期：20xx年9月21日 室温：27℃ 大气压：1个标准大气压

实验名称： ABO血型鉴定

（一） 实验目的:通过本实验学习ABO血型鉴定的原理和方法。

（二） 实验对象：人体

（三） 实验步骤：（略）

（四） 实验结果：

表10-1 实验情况

标准A血清 标准B血清

人血凝集情况 不凝集 凝集

从上表可知：人血与标准A血清（含抗B抗体）混合后不发生凝集；人血与标准B血清（含抗A抗体）混合后发生凝集。

（五） 讨论：

血型通常是指红细胞膜上特异性抗原的类型。若将血型不相容的两个人的血液滴加在玻片上并使之混合，则红细胞可凝集成簇，这一现象称为红细胞凝集。在补体的作用下，可引起凝集的红细胞破裂，发生溶血。当给人体输入血型不相容的血液时，在血管内可发生红细胞凝集和溶血反应，甚至危及生命。红细胞凝集的本质是抗原-抗体反应。红细胞膜上抗原的特异性取决于抗原决定簇，这些抗原在凝集反应中被称为凝集原。能与红细胞膜上的凝集原起反应的特异抗体则称为凝集素。凝集素为γ-球蛋白，存在于血浆中。发生抗原-抗体反应时，由于每个抗体上具有2～10个抗原结合位点，因此抗体可在若干个带有相应抗原的红细胞之间形成桥梁，使它们聚集成簇，从而发生凝血。根据红细胞膜上是否存在A抗原和B抗原可将血液分为四种ABO血型：红细胞膜上只含有A抗原者为A型；只含B抗原者为B型；含有A与B两种抗原者为AB型；A和B两种抗原均无者为O型。不同血型的人的血清中含有不同的抗体，但不会含有与自身红细胞抗原相对应的抗体。在A型血的血清中，只含有抗B抗体；B型血的血清中只含有抗A抗体；AB型血的血清中没有抗A和抗B抗体；而O型血的血清中则含有抗A和抗B两种抗体。

表10-2 ABO血型中的抗原和抗体

血 型 红细胞膜上所含的抗原 血清中所含的抗体

O 无A也无B 抗A和抗B

A A 抗B

B B 抗A

AB A和B 无抗A也无抗B

正确鉴定血型是保证输血安全的基础。常规ABO血型的定型包括正向定型和反向定型。正向定型是用抗A与抗B抗体检测来检查红细胞上有无A或B抗体；反向抗体是用已知血型的红细胞检测血清中有无抗A或抗B抗体，结果见表10-3.同时进行正向定型和反向定型是为了相互印证。 表10-3 红细胞常规ABO定型（＋为发生凝集；－为不凝集）

正向定型 反向定型 血型

B型血清 A型血清 O型血清 A型 B型 O型

（抗A） （抗B） (抗A，抗B) 红细胞 红细胞 红细胞

－ － － ＋ ＋ － O ＋ － ＋ － ＋ － A － ＋ ＋ ＋ － － B ＋ ＋ ＋ － － － AB

（六） 结论：

待检血液的血型为A型