药学实验报告

班级：生物制药1101

姓名：刘翠婷

学号：U201112717

华    中    科    技    大    学

乙酰水杨酸的合成

一、 实验目的

1.   掌握由酸酐作为酰基化试剂和醇反应制备酯的方法

2.   巩固普通蒸馏、抽滤、重结晶等基本操作

3.         学习应用显微镜熔点仪测定熔点的方法。

二、 实验原理

乙酰水杨酸即阿司匹林（Aspirin），是19世纪末合成成功的一种具有解热止痛、治疗感冒作用的药物，至今仍被广泛使用。制备乙酰水杨酸一般以水杨酸（邻羟基苯甲酸）和乙酸酐为原料，通过酯化反应进行。生产中所用的水杨酸可以由从植物冬青树中提取的冬青油（主要成分为水杨酸甲酯）水解得到。这两种原料在制备出乙酰水杨酸的同时，水杨酸分子之间也可以发生缩合反应，生成少量的聚合物。

反应式如图1：

图1. 乙酰水杨酸的合成路线图

三、   实验内容

(一)   实验材料

试剂：水杨酸、乙酸酐、饱和碳酸氢钠水溶液、1% FeCl₃溶液、乙酸乙酯、浓硫酸、浓盐酸、滤纸、蒸馏水

器材：100 mL锥形瓶1个、100 mL 烧杯2个、大结晶皿1个、试管1个、玻璃漏斗1个、培养皿1个、药匙1个、5 mL移液管1个、玻璃棒1个、布氏漏斗1个、抽滤瓶1个、水浴锅1台、普通蒸馏装置（100 mL圆底烧瓶1个、蒸馏头1个、直行冷凝管1个、接收头1个、100 mL接收瓶1个）1套、电热套（适用100 mL圆底烧瓶）1台、天平1台

(二)   实验部分

1.  乙酸酐蒸馏：

量取乙酸酐60 mL加入100 mL的圆底烧瓶中进行普通蒸馏，收集137-140℃的馏分备用。

2.  乙酰水杨酸制备

在125mL锥形瓶中加入2g（0.014mol）水杨酸、5.4g(5mL，0.05mol)新蒸乙酸酐和5滴浓硫酸，旋摇锥形瓶使水杨酸全部溶解后，在水浴上加热5-10min (水浴温度70-80℃)后进行冷却。冷却至室温，既有乙酰水杨酸结晶析出。然后加入50 mL水，将混合物继续在冰水浴中冷却使结晶完全。抽滤，结晶用少量冷蒸馏水洗涤，抽干后将粗产物转移至表面皿上，自然晾干，产物约1.8g。

3.  乙酰水杨酸的精制与纯化

将粗产物转移至100 mL烧杯中，搅拌下加入25 mL饱和碳酸氢钠溶液，加完后继续搅拌几分钟，直至无二氧化碳气泡产生，然后过滤，用5-10 mL水冲洗漏斗后，合并滤液，倒入预先盛有有4-5 mL浓盐酸和10 mL水配成的溶液的烧杯中，搅拌均匀，既有乙酰水杨酸沉淀析出。将烧杯置于冰水浴中冷却，使结晶完全。抽滤，用冷蒸馏水洗涤2-3次。抽干后，将结晶移至表面皿上，干燥后约1.5g。取0.1g结晶加入盛有5mL水的试管中，加入5mL 1%三氯化铁溶液，观察有无颜色反应（为什么？）确定是否需要进一步精制。若需精制，可将上述结晶溶于最少量的乙酸乙酯中（约4-6 mL），溶解时应在水浴上小心加热，若有不溶物出现时，可用预热过的玻璃漏斗趁热过滤，将滤液冷却至室温时既有结晶析出。抽滤后既可得到纯产品。

四、 结果与讨论

1）    实验结果包括实验步骤的照片、实验结果的照片、以及粗产物和精制产物的产率等数据。

粗产物为0.85g，精产物为0.16g，产率为6.35%（理论产值2.52g）。

2）    对实验结果进行分析与讨论：收率是否达到标准、鉴定结果是否有杂质、并分析可能的原因。

本次实验结果远低于标准，鉴定结果表明没有杂质。收率低可能由很多因素导致。首先，蒸馏烧瓶并没有完全干燥（完全干燥比较困难）；另外，实验所用的乙酸酐也并不是新蒸的。主观原因上，我认为浓硫酸的量是很难把握的，可能是浓硫酸的量过少；其次，在产品干燥的过程中，也造成了很大的损失。最重要的原因可能是结晶的时间不够长。

3）    实验总结：本实验的小结，以及做该实验需要注意的问题。

总的来说，这个实验还是相对简单的一个实验。但是为什么最后得到的产率这么低呢？这就是一个很值得思考的问题了。不得不说，细节很重要，只有认真地做好实验的每一步，才能得到较为理想的结果。要想把每一个细节，除了规范操作外，还应该知道每一步的目的是什么。个人认为，本实验最应该注意的就是规范操作以及反映条件的控制（包括反应时间以及反应温度）。

五、 注意事项

1）    仪器要全部干燥，药品也要进行干燥处理，乙酰酐必须是新蒸的，否则产率很低。

2）    水浴加热温度不宜过高，时间不宜过长，否则副产物可能增加。

3）    若不结晶，可用玻璃棒摩擦瓶壁或置于冰水中冷却。

4）    乙酰水杨酸受热后易分解，分解温度为126-135℃，因此重结晶时不宜长时间加热，控制水温，产品应自然晾干。

六、 思考题:

1）    反应时加入浓硫酸的作用是什么？

一方面，浓硫酸是该反应的催化剂；另一方面，浓硫酸可吸收反应过程中生成的水，有利于反应向正反应方向进行。

2）    反应中有哪些副产物？如何除去？

反应中的副产物为水杨酰水杨酸脂，乙酰水杨酰水杨脂和聚合物。由于这些物质的水溶性不好，故可以使乙酰水杨酸变成钠盐，然后通过过滤的方法除去这些杂质。

3）    实验中加水的目的是什么？

乙酰水杨酸是难溶于水的，故加水可除去未反应的水杨酸和乙酸酐等杂质。

4）    若要鉴别阿司匹林是否变质，可用什么方法？

乙酰水杨酸变质的原因主要是乙酰水杨酸分解产生水杨酸，而水杨酸含有酚羟基，可以用三氯化铁溶液检测，如果出现紫色说明已经变质。

5）    本实验能否用乙酸代替乙酸酐来进行反应？为什么？

不可以，由于酚存在共轭体系，氧原子上的电子云向苯环移动，使羟基氧上的电子云密度降低，导致酚羟基亲核能力变弱，进攻乙酸羰基的能力变弱，所以反应很难发生。

茶碱缓释制剂的制备及释放度测定

一、   实验目的

1.  熟悉缓释制剂的基本原理与设计方法

2.  掌握溶蚀性和亲水凝胶骨架型缓释片的释放机制和制备工艺

3.  熟悉缓释片释放度的测定方法

二、   实验原理

缓释制剂系指用药后能在较长时间内持续释放药物以达到长效作用的制剂。其中药物释放主要是一级速度过程。如口服缓释制剂在人体胃肠道的转运时间一般可维持8～12 h，根据药物用量及药物的吸收代谢性质，其作用可达12～24 h，患者1 d口服1～2次。缓释制剂的种类很多，按照给药途径有口服、肌肉注射、透皮及腔道用制剂。其中口服缓释制剂研究最多。口服缓释制剂又根据释药动力学行为是否符合一级动力学（或Higuchi方程）和零级动力学方程分为缓释制剂和控释制剂。

缓释制剂按照剂型可分为片剂、颗粒剂、小丸、胶囊剂等。其中，片剂又分为骨架片、膜控片、胃内漂浮片等。骨架片是药物和一种或多种骨架材料以及其他辅料，通过制片工艺成型的片状固体制剂。骨架材料、制片工艺对骨架片的释药行为有重要影响。按照所使用的骨架材料可分为不溶性骨架片、溶蚀性骨架片和亲水凝胶骨架片等。不溶性骨架片采用乙基纤维素、丙烯酸树脂等水不溶骨架材料制备，药物在不溶性骨架中以扩散方式释放。溶蚀性骨架片采用水不溶但可溶蚀的硬脂醇、巴西棕榈蜡、单硬脂酸甘油酯等蜡质材料制成，骨架材料可在体液中逐渐溶蚀、水解。亲水凝胶骨架片主要采用甲基纤维素、羧甲基纤维素、卡波姆、海藻酸盐、壳聚糖等骨架材料。这些材料遇水形成凝胶层，随着凝胶层继续水化，骨架膨胀，药物可通过水凝胶层扩散释出，延缓了药物的释放。本实验以茶碱为模型药物制备溶蚀性骨架片和亲水凝胶骨架片。

由于缓释制剂中含药物量较普通制剂多，制剂工艺复杂。为了获得可靠的治疗效果，避免突释引起的毒副作用，需要制定合理的体外药物释放度试验方法。通过释放度的测定，找出其释放规律，从而可选定所需的骨架材料，同时也用于控制缓释片剂的质量。释放度的测定方法采用溶出度测定仪，释放介质一般采用人工胃液、人工肠液、水等介质。一般采用3个取样点做为药物释放度的标准。第一个时间点通常为1或2 h，主要考察制剂有无突释效应。第2个或第3个时间点主要考察制剂释放的特性和趋势。具体时间及释放量根据各品种要求而定，最后一个时间点主要考察制剂是否释放完全，释放量要求75 %以上。

三、   实验内容

（一）  实验材料与设备

实验材料：茶碱、硬脂醇、羟丙基甲基纤维素（HPMC K10M）、乳糖、乙醇、硬脂酸镁

实验仪器与设备：单冲压片机、溶出度仪、紫外分光光度计

（二）  实验部分

1.    茶碱亲水凝胶骨架片的制备

【处方】

【制备】 工艺流程见图1

 

图1 茶碱亲水凝胶骨架片的制备工艺流程图

（1）  将茶碱、乳糖分别过100目筛，羟丙基甲基纤维素过80目筛，混合均匀，加80 % 乙醇溶液制成软材，过18目筛制粒

（2）  于50～60℃干燥，16目整粒，称重，加入硬脂酸镁混匀。

（3）  计算片重，压片即得。每片含茶碱100 mg。

【质量检查】 释放度

2.    释放度试验方法

（1）    标准曲线的制作：精密城区茶碱对照品约20 mg，置于100 mL容量瓶中，加0.1 mol/L的盐酸溶液溶解，摇匀并定容。精密吸取此溶液10 mL置于50 mL容量瓶中，加蒸馏水摇匀并定容。然后精密吸取该溶液2.5、5、7.5、10、12.5、15、17.5 mL，分别置于50 mL容量瓶中，加蒸馏水定容。按分光光度法，在波长270 nm处测定吸光度，以吸光度对浓度进行回归分析，得到标准曲线回归方程。

（2）    释放度试验：取制得的亲水凝胶缓释片或溶蚀型骨架缓释片1片，按《中国药典》20##年版释放度测定方法规定，采用溶出度测定法桨法的装置，以蒸馏水900 mL为释放介质，温度为37 ℃ ± 0.5 ℃，转速为50 rpm，经1、2、3、4、5、6 h分别取样6 mL，同时补加同体积释放介质，样品经0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液1 mL，置于10 mL容量瓶中加蒸馏水定容，在270 nm处测定吸光度，分别计算出每片在上述不同时间的溶出量。

四、   实验结果与讨论

1.    片剂外观及质量检测

包括制备过程照片、片剂照片、样品重量、平均重量、每一片与平均重量的差异，并讨论是否符合标准，如果不符合标准讨论原因

表1 茶碱缓释片剂样品重量及差异

平均片重：  205.8   mg

原因讨论：每次上样的多少以及凿孔的深度都影响着药片的质量，人为因素产生的影响较大，故药片质量参差不齐。

2.    标准曲线的绘制

表2 茶碱标准曲线数据

图2 茶碱浓度～吸光度的标准曲线

3.    累积释放率的计算和释放曲线的绘制

表3 缓释片的累积释放率数据

1号在150min时完全溶解，2号在180min时完全溶解，3号在240min时完全溶解，溶解后均不再计算其释放率。（3号最终吸光度为0.564）

累积释放率按照下式计算：

，

其中：

Rel — 累积释放率，%

n — 稀释倍数,10倍

V — 取样体积，900mL

C — 按照标准曲线计算的样品浓度，mg/mL

G —缓释片平均所含茶碱量，或标准片的标示量，

图3 缓释片的释放曲线

4.    比较不同处方茶碱缓释片的释放曲线，做出评价

五、   思考题

1.     设计口服缓释制剂时主要考虑那些影响因素？

2.     缓释制剂的释放度实验有何意义？如何使其具有实用价值？

软膏剂的制备及释放行为评价实验

一、   实验目的

掌握软膏剂的处方组成及制备方法;熟悉常用基质原料及基质的种类;掌握测定软膏剂中药物释放速度的方法，熟悉影响其速度的因素。

二、   实验原理:

软膏剂系指药物与适宜基质制成的具有适当稠度的膏状外用制剂。它可以应用局部发挥疗效或起保护和润滑皮肤的作用，药物也可以吸收进入体循环产生全身治疗作用。基质为软膏剂的赋型剂，它使软膏具有一定的剂型特性且影响软膏剂的质量及药效的发挥，基质本身又有保护和润滑皮肤的作用。软膏基质根据其组成可分成三类：油脂性、乳剂型和水溶性基质。用乳剂型基质制备的软膏剂亦称乳膏剂，o/w型又称霜剂。

软膏剂可根据药物与基质的性质可用研合法、熔合法和乳化法制备。固体药物可用基质中的适当组分溶解，或先粉碎成细粉与少量基质或液体组分研成糊状，再与其他基质研匀。所制得的软膏剂应均匀、细腻，具有适当的粘稠性，易涂于皮肤或粘膜上且无刺激性。软膏剂在存放过程中应无酸败、异臭、变色、变硬、油水分离等变质现象。

软膏剂中药物的释放性能影响药物的疗效，它可通过测定软膏中药物穿过无屏障性能的半透膜到达接受介质的速度来评定。药物的释放遵循Higuchi公式：药物的积累释放量M与时间t的平方根成正比

药物的理化性质与基质组成会影响k值大小。

软膏剂粘度影响使用时的涂展性及药物扩散到皮肤的速度，可用粘度计测定。

三、   实验内容

（一） 仪器与试剂：

仪器：电子天平，研钵，烧杯，玻璃棒，容量瓶，试管，恒温水浴锅，分光光度计，恒温摇床。

试剂：水杨酸，液状石蜡，白凡士林，十八醇，单硬脂酸甘油酯，十二烷基硫酸钠，甘油，对羟基苯甲酸乙酯，石蜡，司盘40，乳化剂OP，羧甲基苯甲酸乙酯，苯甲酸钠，硫酸铁铵，盐酸。

（二） 实验部分：

1. 油脂性基质水杨酸软膏制备（A）

【处方】

【制备】

（4）  取水杨酸置于研钵中，加入适量液状石蜡研成糊状，分次加入凡士林混合研匀

2. o/w乳剂型基质水杨酸软膏制备（B）

【处方】

【制备】

（1）  油相的配置：将处方量的白凡士林、十八醇和单硬脂酸甘油酯置于烧杯中，70~80℃的水浴锅中加热至熔化。

（2）  水相的配置：将处方量的十二烷基硫酸钠、甘油、对羟基苯甲酸乙酯溶于蒸馏水中, 并加热到70~80℃。

（3）  在同温下将水相缓慢加入到油相中，边加边搅拌至冷凝，得到o/w乳剂型基质。

（4）  取水杨酸置于研钵中，分次加入o/w乳剂型基质混合研匀。

3. w/ o乳剂型基质水杨酸软膏制备（C）

【处方】

【制备】

（1）  油相的配置：取锉成细末的石蜡、单硬脂酸甘油酯、白凡士林、液状石蜡、司盘40、乳化剂OP和对羟基苯甲酸乙酯于锥形瓶中，置于70~80℃的水浴锅中加热至油液熔化

（2）  将处方量的同温度蒸馏水以细流缓慢加入到油相中，边加边搅拌至冷凝，得到w/ o乳剂型基质。

（3）  取水杨酸置于研钵中，分次加入w/ o乳剂型基质混合研匀。

4. 水溶性基质水杨酸软膏制备（D）

【处方】

【制备】

（1）  取羧甲基纤维素钠置于研钵，加入甘油研匀。

（2）  然后边研边加入溶有苯甲酸钠的水溶液，待溶胀后研匀，即得水溶性基质。

（3）  取水杨酸置于研钵中，分次加入水溶性基质混合研匀。

5. 软膏中药物释放速度的比较

（1）   试剂配制：

水杨酸标准液：精密称取水杨酸100 mg，用500 mL容量瓶定容。

硫酸铁铵显色剂（新鲜配制）：称取8 g硫酸铁铵溶于100 mL的蒸馏水，取其中2 mL加入1 mol/L的盐酸1mL，加蒸馏水至100 mL。

（2）   标准曲线的制作：

取8支干净试管，分别编号，按下表取试剂，充分摇匀。

使用分光光度计，以1#为空白对照，于530nm测OD值，绘制标准曲线图。

（3）   测定四种水杨酸软膏的药物释放速度

取制备得到的4种水杨酸软膏（A、B、C、D）填装于4支内径约2cm的玻璃管内，装填量约高1.5cm，取一张玻璃纸，轻轻用蒸馏水把中部弄湿，包扎管口，使管口的玻璃纸无皱折且与软膏紧贴无气泡。在250 mL烧杯中加入100 mL的蒸馏水，插入装有软膏的玻璃管，玻璃纸段向下，软膏的上表面与水面平，固定好。置于32℃的摇床，定时取出5 mL的释放溶液，同时补加同量蒸馏水，向取出的释放溶液中加入2 mL显色剂，测定其吸光度，并根据标准曲线计算释放液中水杨酸浓度，进而计算出累计释放量。

表1 四种软膏测定数据表

根据Higuch公式，以t的开方为横坐标，M为纵坐标，作图，求出每种软膏的k值，进行比较分析。

四、   思考题：

1.   将制备得到的四种水杨酸软膏涂布于自己的皮肤上，评价是否均匀细腻，记录皮肤的感觉，比较四种软膏的粘稠性与涂布性。讨论四种软膏中各组成的作用。

2.   良好的软膏剂应具备什么质量要求？

3.   软膏剂的基质有哪几类？各有什么特点与用途？

4.   影响软膏剂中药物释放、穿透、吸收的因素有哪些？

大黄中蒽醌类成分的提取、分离及鉴定

一、 简介

大黄为蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatum L.）、唐古特大黄（Rheum tanguticum Maxim. Ex Balf.）或药用大黄（Rheum officinale Baill.）的干燥根及根茎。味苦，性寒。具有泻热通肠，凉血解毒，逐瘀通经的功效。因炮制方法不同，功效各有所主。大黄的主要成分为蒽醌衍生物，总量为3～5%，部分游离，大部分以苷的形式存在。大黄的抗菌、抗感染有效成分为大黄酸、大黄素和芦荟大黄素，表现为对多种细菌有不同程度的抑菌作用。药理证明大黄能缩短凝血时间，止血的主要成分为大黄酚。大黄粗提物、大黄素和大黄酸对实验性肿瘤有抗癌活性。泻下的主要有效成分为番泻苷类。另外，大黄还含有鞣酸类化合物，含量为10～30%，有止泻作用。

二、 实验目的

1.  掌握中药大黄中蒽醌苷元的提取方法——两相水解法

2.  掌握pH梯度萃取法分离酸性成分的原理及操作技术

三、实验原理

大黄中蒽醌类化合物有结合态和游离态两种形式存在。其中游离态的蒽醌化合物（苷元）主要包括大黄酚、大黄素、大黄酸、芦荟大黄素和大黄素甲醚五种（见表1）。

表1 大黄中苷元主要成分的分子结构

大黄酸（rhein）：

黄色针状结晶，mp 321～322℃（升华），330℃分解。不溶于水，能溶于吡啶、NaHCO₃等碱液，微溶于乙醇、苯、三氯甲烷、乙醚、石油醚。

芦荟大黄素（Aloe-emodin）：

橙色针状结晶，mp 223～224℃（甲苯），能升华，易溶于热乙醇，可溶于乙醚、苯、稀氨水、Na₂CO₃和NaOH水溶液

大黄素（emodin）：

橙黄色针状结晶，mp 256～257℃（乙醇或冰醋酸），能升华。易溶于乙醇、稀氨水、Na₂CO₃等碱液，微溶于乙醚（0.14%）、苯（0.041%）、三氯甲烷（0.0718%），几不溶于水。

大黄酸甲醚（physcion）：

砖红色单斜针状晶，mp 206℃（苯），能升华。溶于苯、三氯甲烷、吡啶及甲苯，微溶于醋酸及乙酸乙酯，不溶于甲醇、乙醇、乙醚和丙酮。

大黄酚（Chrysopanol）：

橙黄色六方形或单斜形结晶，mp 196～197 ℃（乙醇或苯），能升华。易溶于沸乙醇，可溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙醚、三氯甲烷、醋酸、苯和NaOH溶液，微溶于石油醚、冷乙醇，不溶于水、NaHCO₃和Na₂CO₃水溶液。

结合态类的蒽醌类化合物主要包括大黄素甲醚葡萄糖苷（physion monoglucoside，黄色针状结晶，mp 235℃）、芦荟大黄素葡萄糖苷（aloe-emodin monoglucoside，mp 239 ℃）、大黄素葡糖糖苷（emodin monoglucoside，浅黄色针状结晶，mp 190～191 ℃）、大黄酸葡萄糖苷（rhein 8-monoglucoside，266～267 ℃）、大黄酚葡萄糖苷（chrysophanol monoglucoside，245～246 ℃）。分子结构见图1

由于大黄中蒽醌的存在形式以结合态为主，游离状态的仅占小部分，为了提高游离蒽醌的得率，在提取过程中采取酸水解和乙醚萃取相结合的方法（两相水解反应）。依据大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的酸性强弱不同，采用强弱不同的碱水萃取。苷元酸性强弱顺序如下：大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄素甲醚＞大黄酚。所以可以采用pH梯度萃取法分离。

依据大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚极性差异，可以用硅胶柱色谱法分离，苷元极性强弱顺序如下：大黄酸＞芦荟大黄素＞大黄素＞大黄素甲醚＞大黄酚。

四、实验内容

（一）实验材料与设备

大黄饮片、NaHCO₃、Na₂CO₃、NaOH、浓硫酸、氨水、浓盐酸、乙醚、石油醚、醋酸乙酯

500 mL圆底烧瓶、烧杯、滴管、橡皮管、球形冷凝管（30cm）、层析缸、标本瓶、索氏提取器、250 mL分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、普通滤纸、薄层板、喷雾器、pH试纸。

（二）实验部分

1、粉碎

取干燥的大黄饮片约200 g，剪碎，置万用粉碎机中粉碎数分钟后得到大黄粗粉，过80目筛得到大黄细粉，置干燥器中备用。

2、酸水解提取大黄蒽醌苷元

1）  大黄10 g，加10% H₂SO₄水溶液 50 mL充分搅拌润湿，装入250 mL圆底烧瓶中加乙醚50 mL热水浴上回流提取1 h，过滤得滤液，滤饼于70℃干燥后研碎，置索氏提取器中，加入乙醚50 mL回流提取1 h，过滤，合并两次乙醚提取液（t）于250 mL的分液漏斗中，用蒸馏水（三次，共约100 mL，）洗至中性备用。

2）  五种大黄蒽醌苷元的检查：

薄层层析（TLC）法检查五种蒽醌苷元：

薄层板：硅胶G-CMC-Na

展开剂：石油醚(60～90℃)/乙酸乙酯（7/3），或石油醚(60～90℃)/乙酸乙酯/冰醋酸（6/4/0.2，或20/3/0.6）

样品液：乙醚液（t）

乙醚液（t）经薄层层析检查有四个点，其R_f值由大到小依次为大黄素甲醚和大黄酚（两者不能分开，R_f = 0.9）、大黄素（橙色斑点）、芦荟大黄素（黄色斑点）、大黄酸（黄色斑点）

3、pH梯度萃取分离

1、将乙醚提取液加入250 mL分液漏斗中，以2.5% NaHCO₃水溶液萃取三次，每次40mL。乙醚层经薄层层析检查（层析条件同上），提示乙醚提取液提出大黄酸后，合并三次NaHCO₃萃取液，用浓盐酸酸化（pH 2～3），可得大黄酸沉淀。（注意：加酸时应缓慢加入，以防酸液溢出）

2、经NaHCO₃液萃取后的乙醚层，继以2.5% NaHCO₃水溶液萃取三次，每次40mL，薄层层析法检查乙醚层。提尽大黄素后合并三次Na₂CO₃萃取液，用浓盐酸酸化（pH 2～3），得大黄素沉淀。（酸化时注意操作同前）

经2.5% Na₂CO₃水溶液提取后的乙醚液，再以5.0% Na₂CO₃水溶液提取约四次，每次30 mL，薄层层析法检查乙醚层，提尽芦荟大黄素合并四次萃取液，用浓盐酸酸化（pH 2～3）得芦荟大黄素沉淀。（酸化时操作同前）

3、经2.5% Na₂CO₃水溶液萃取过后乙醚层以2.5% NaOH水溶液萃取至碱水层无色为止（约四次），每次50 mL，合并NaOH萃取液，酸化得沉淀。用簿层层性析检查样品溶液有一个黄色斑点（为大黄酚和大黄素甲醚混合物的斑点）。

五、  实验结果与讨论

5.  实验结果应包括每一步的操作照片、所搭建仪器照片、相关产物及其薄层板点样照片

6.  讨论应联系所得产物的酸碱性、溶解性等性质与每步提取条件，结合薄层分析结果，分析提取产物的主要成分，操作步骤可能存在的失误以及改进方法等

六、  注意事项

1.  水解液酸性强，避免用手直接接触

2.  分液漏斗使用前检查是否漏

七、  思考题

简述大黄中5中游离羟基蒽醌化合物的酸性与结构的关系

pH梯度萃取法的原理是什么？如何利用该方法分离大黄中的5中游离羟基蒽醌化合物

大黄中5中游离羟基蒽醌化合物的极性与结构的关系如何？薄层鉴别时常用何类吸附剂？Rf值顺序如何？

不同给药途径、给药剂量对药物作用的影响

一、   不同给药途径对药物作用的影响

（一）  实验目的

1.     观察不同给药途径对药物（硫酸镁）作用的影响，了解硫酸镁不同给药途径产生不同作用的原因

2.     掌握硫酸镁的作用以及小鼠灌胃、腹腔注射的方法

（二）  实验原理

硫酸镁为一种容积性泻药（此外还有刺激性和润滑性泻药），口服在肠道难吸收，在肠内形成高渗压而阻止肠内水分的吸收，从而扩张肠道、刺激肠壁、促进肠道蠕动，产生泻下作用。注射给药可使血中Mg²⁺增加，由于Ca²⁺和Mg²⁺化学结构相似，Ca²⁺和Mg²⁺间存在相互拮抗作用，Ca²⁺参与运动神经末梢Ach释放，而Mg²⁺拮抗Ca²⁺这种作用，结果使神经肌肉接头处Ach减少，骨骼肌紧张性降低，肌肉松弛。同时对中枢神经及心血管系统产生抑制作用。因此产生抗惊厥及降压效果。本实验观察不同给药途径对硫酸镁作用性质的影响。

大多数药物需进入血液分布到作用部位才能发生作用。药物自给药部位进入全身血液循环的过程为吸收（absorption），吸收速度的快慢及吸收数量的多少直接影响药物的起效时间及强度。其中给药途径是决定药物起效时间及强度的重要因素之一。给药途径不同，则药物吸收快慢亦不同，其吸收快慢顺序除静脉注射外是：腹腔注射 > 吸入 > 舌下 > 直肠 > 肌内注射 > 皮下注射 > 口服 > 皮肤。给药途径不同，其吸收程度又不同，由此使药物作用强度不同。药物经不同给药途径所致的吸收程度是：吸入、舌下、直肠、肌内注射较为完全，口服次之，皮下较差；皮肤表面吸收程度最差，一定要脂溶性特别高的药物才能通过此途径较好地吸收。而胃肠道给药，影响因素较多，包括有首关消除的影响等，使药物吸收程度有所不同。

首过消除（first pass elimination）：从胃肠道吸收入门静脉系统的药物在到达全身血循环前必先通过肝脏，如果肝脏对其代谢能力很强或由胆汁排泄的量大，则使进入全身血循环内的有效药物量明显减少，这种作用称为首过消除。有的药物在被吸收进入肠壁细胞内而被代谢一部分也属首过消除。首过消除也称首过代谢（first pass metabolism）或首过效应（first pass effect）。注射、舌下和直肠给药可避免肝代谢。

（三）  实验材料

1.    实验对象

小白鼠两只，体重18-22g，雌雄不限

2.    实验器材

一次性注射器（1 mL，带针头）：2支

小白鼠灌胃针头：1个

250 mL烧杯：2个

3.    实验药品

10% 硫酸镁溶液

苦味酸

（四）  实验内容

1.     小鼠腹腔注射硫酸镁的症状。

2.     小鼠灌胃给予硫酸镁的症状。

（五）  实验步骤

1.     取健康小白鼠2只，称体重后，分别作标记（1，2号），然后观察正常活动情况。

2.     1号小白鼠从腹腔注射10% 硫酸镁溶液0.1 mL/10g体重，给2号小白鼠以同样剂量灌胃。

3.     用烧杯罩住小白鼠，观察并比较两鼠的肌张力、呼吸频率和排粪便情况。

腹腔注射法：

左手持鼠，将腹部朝上，右手持注射器，针头刺入方向与腹部呈45°角，一般由左或右下腹部刺入，为避免刺伤内脏，可将头部放低，使脏器移向横膈肌，注意勿刺破肝脏和膀胱，当针头刺入腹腔时，有落空感即可给药。

灌胃给药法：

用左手固定小白鼠，使其头部充分伸直，但不宜抓得过紧，以免窒息。右手拿起连有小白鼠灌胃针吸好药的注射器，将针头小心地自口角插入口腔，紧贴上颚入胃，注入药液，操作时，应避免灌胃针插入气管。插入时遇有阻力应抽出再试，如错插入气管注药时可立即死亡。注射量0.1-0.25 mL/10g。

（六）  实验结果

（七）  注意事项

1.     灌胃前可给少量的水，灌胃方法要正确，一旦刺破食管或胃壁，药物进入胸腹腔，给药途径则发生改变。

2.     腹腔注射时小鼠头部放低，6号半针头进针约1/3即可，以免刺中脏器。

3.     使用注射器时，刻度面朝上，以便准确读取所注射的药量。

（八）  思考题

灌胃和腹腔注射硫酸镁的效应有哪些不同？为什么？

二、       不同剂量对药物作用的影响

（一）        实验目的

1.             不同给药剂量对药物（戊巴比妥钠）作用的影响

2.             掌握味酸标记法以及巴比妥类药物的作用。

（二）        实验原理

戊巴比妥钠是一种中枢抑制药，其随着剂量由小到大，中枢抑制作用由浅入深，依次表现为镇静、催眠、抗惊厥、麻醉直至延髓麻痹。

本实验使用的戊巴比妥钠剂量大小的不同，不仅使其中枢抑制作用强度不同（量效关系），而且其在血浆中达阈浓度、达峰浓度及达峰时间、有效浓度及其维持时间的长短都有明显的差异（时量关系）。

（三）        实验材料

1.             实验对象

小白鼠，体重18-22 g，雌雄不限

2.             实验器材

一次性注射器（1 mL，带针头）：3支

天平1台

3.             药品与试剂

0.2％、0.4％、0.8％ 戊巴比妥钠溶液

（四）        实验内容

1.             3种不同剂量的戊巴比妥钠对小鼠的作用表现

（五）        实验步骤

1.             取小白鼠3只，称重、编号（1、2、3号），观察和记录正常活动情况。

2.             1、2、3号三只小鼠分别腹腔注射0.2％、0.4％、0.8％戊巴比妥钠溶液0.1 mL /10g体重。

3.             给药后继续观察，比较各鼠的活动变化，记录翻正反射消失与恢复时间，以此计算作用的潜伏期和持续期。即：潜伏期（min）＝翻正反射消失时间－给药时间；持续期（min）＝翻正反射恢复时间－翻正反射消失时间。

翻正反射（righting reflex）：

正常小鼠轻轻用手将其侧卧或仰卧会立即恢复正常姿势即翻正反射。翻正反射消失是小鼠产生睡眠作用的客观指标，具体操作过程是：用手将小鼠轻轻侧卧或仰卧超过1分钟以上即为翻正反射消失

（六）        实验结果

（七）        注意事项

1.             注意记录给药时间、翻正反射消失及恢复时间，比较各鼠所出现反应的程度和发生快慢。

2.             小鼠对戊巴比妥钠可能出现的反应，按由轻到重程度有：活动增加、呼吸抑制、翻正反射消失、反射亢进、麻醉、死亡等。