移土培肥项目土壤检测报告信息表

施工单位：

联系人电话号码：

移土培肥项目土壤检测报告信息表

施工单位：

联系人电话号码：

 

第二篇：正规土壤报告

正规土壤报告

一、实验目的

在学习理论知识的基础上自己设计实验方案分离和鉴定出土壤中三类微生物的几种，在此基础上系统地掌握微生物生态学、形态学以及营养方面的理论知识及在实践中的运用; 提高微生物研究相关的基本操作技能，尤其是消毒灭菌的方法和原理、培养基的制作、建立无菌操作概念、划线分离纯化菌种、微生物的基本形态学鉴定和保藏方法，提高动手能力和运用理论知识解决实践中问题的能力。

二、实验 原理

从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。平板分离法普遍用于微生物的分离与纯化。其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求,或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。本实验采用平板划线的方法完成。值得指出的是，从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到。土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。因此土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。本实验将分别采用牛肉膏蛋白胨培养基、高氏1号与PDA培养基从土壤中分离不同类型的微生物。

三、实验前准备。

1、实验材料

1.1培养基

A、牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（培养细菌）：

牛肉膏0.6g,蛋白胨2g,Nacl1g, 琼脂3-4g,水200ml,PH7.4~7.6

B、高氏l号培养基（培养放线菌）

可溶性淀粉4g，KNO3 0.2g，NaCl 0.1g，K2HPO4·3H2O 0.1g，MgSO4·7H2O 0.1g，FeSO4·7H2O 0.002g，琼脂3-4g，水200mL，pH7.4～7.6。

C、PDA培养基（加葡萄糖用于培养酵母菌，加蔗糖用于培养霉菌）

马铃薯（去皮）80g，蔗糖与葡萄糖分别8g，水400g，琼脂6-8g.

1.2 溶液或试剂

盛9ml无菌水的试管六支

1.3仪器或其它用具：试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH试纸、报纸、记号笔、线绳、纱布、无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环，无菌培养皿，土样，显微镜等。

2、 取土壤：阴雨天，18-20度，黄色的土壤，这是在花圃里找开花较多的花丛下离地面5-10厘米的土壤，由于酵母菌喜好糖份较多的土壤环境生存，所以我们猜想那里的土壤含的酵母菌会比较多：在叶子覆盖得较多的花丛下离地面5-10厘米处的土壤，由于霉菌和放线菌在这些土壤中会比较多；而细菌在什么环境下都比较多，所以不用找特殊的土壤。

3、 无菌水及相关器材的灭菌

把所需要的器材都用报纸包扎好，把各装了9ML水的6支试管包扎好放进高压蒸气灭菌锅灭菌，在126度灭菌15分钟。

4、 设计分离提纯土壤中微生物的基本流程（在无菌情况下进行）

倒平板→稀释土壤溶液→划线→培养→挑单菌落→保存

5、 倒平板

在无菌的风箱里，点着酒精灯，右手拿着装着培养基的锥形瓶，左手尾指与无名指托着培养皿，中指按着上下盖的相交处以作为转轴，食指按着上盖，大拇指按着上盖的边以控制上盖的上下活动，在酒精灯上方，把培养基轻轻摇晃后倒进培养皿中，直到培养基掩过培养皿的底面，平放并等培养基凝结后倒置储存。最后用记号笔标明培养基名称、土样编号和实验日期。

四、 灭菌操作

这次实验主要运用高压蒸汽灭菌锅。

1、基本原理

高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。

2、操作步骤

a．首先将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。 切勿忘记加水，同时水量不可过少，以防灭菌锅烧干而引起炸裂事故。

b．放回内层锅，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸气流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与锅壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。

c．加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。

d．用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸气压力增加到逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用0.1Mpa，121.5℃，20min灭菌。

灭菌的主要因素是温度而不是压力。因此锅内冷空气必须完全排尽后，才能关上排气阀，维持所需压力。

f．灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至“0”时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。

压力一定要降到“0”时，才能打开排气阀，开盖取物。否则就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至灼伤操作者。

五、 无菌操作

在通风箱里进行无菌操作时，要注意以下几点：

1、 在开始做实验前半小时，把通风箱的紫外光灯以及其他设备打开，去掉箱里空气中

的菌并使通风箱灭菌半小时。

2、 开始做实验，先把要伸进通风箱的手的那些部分用酒精擦拭以消毒。再用酒精把通

风箱擦拭一遍。即可以进行无菌操作。

在无菌操作时，要在酒精灯的火焰上方进行。

六、培养基的制作

培养基：是由人工方法培配置而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。按其营养组成和用途分类：基础培养基、增菌培养基、 选择培养基、鉴别培养基、厌氧培养基。

（一）牛肉膏蛋白胨培养基的配制

牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。其配方如下： 牛肉膏3g，蛋白胨10g，Nacl5g，琼脂15～20g，水1000mL，PH7.4～7.6

1．称药品 按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随后放入热水中，牛肉膏使与称量纸分离，立即取出纸片。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。

2．加热溶解 在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入己溶解的药品中，再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失的水分。

3． 调pH 检测培养基的pH，若pH偏酸，可滴加lmol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH范围。若偏碱，则用lmol/L HCl进行调节。pH的调节通常放在加琼脂之前。应注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。

4．过滤 液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利培养的观察。但是供一般使用的培养基，这步可省略。

5．分装 按实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。

分装量：固体培养基约为试管高度的l/5，灭菌后制成斜面。分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。半固体培养基以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。

6．包扎 加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸，以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。若培养基分装于试管中，则应以5支或7支在一起，再于棉塞外包一层牛皮纸，用绳扎好。然后用记号笔注明、培养基名称、组别、日期。

7．灭菌 将上述培养基于126℃湿热灭菌15min。如因特殊情况不能及时灭菌，则应故人冰箱内暂存。

8．倒平板

9．无菌检查 将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24～48h，无菌生长即可使用，或贮存于冰箱或清洁的橱内，备用。

（二）高氏l号培养基的配制

l．称量和溶解 先计算后称量，按用量先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，并用少量冷水将其调成糊状，再加至少于所需水量的水，继续加热，边加热边搅拌，至其完全溶解。再加入其他成分依次溶解。对微量成分FeSO4·7H2O可先配成高浓度的贮备液后再加入，方法是先在1000mL中加入1g的FeSO4·7H2O，配成浓度为0.01g/mL的贮备液，再在1000mL培养基中加入以上贮备液1mL即可。待所有药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如要配制固体培养基，其琼脂溶解过程同牛肉膏蛋白胨培养基配制。

2．pH调节、分装、包扎及无菌检查

（三）培养基PDA的制作

把马铃薯去皮，切成小块状，称量80克，放进400ML的水中用电热炉加热，边用玻璃棒搅拌，以免糊底，煮沸至马铃薯成糊状便停止加热。再用双层纱布放在大烧杯上，左手握住，右手戴上手套把马铃薯慢慢倾倒在纱布上，倒完便把纱布与滤渣拿起来把剩余的汁压挤出来。再用水补充至400ML，平均分为两份后转置于两个500ML 的锥形瓶中，其中一瓶加8克葡萄糖及4克琼脂，另一瓶加8克蔗糖及4克琼脂，搅匀后用报纸折成小方块放在瓶口上用手沿瓶口形状往下按并用橡皮胶扎紧，放于高压蒸汽灭菌炉中，用126度灭菌15分钟。待其冷却至45度左右便在无菌条件下倒在灭菌了的培养皿上。待其冷却凝结后便倒置放进培养箱中备用。

（四）使用培养基的原理：

1、牛肉膏蛋白胨是一种基础培养基，含有糖类 含氮有机物、维生素、无机盐等营养物质。而细菌在自然界中大量存在，生长速度快，容易培养，所以培养细菌使用基础培养基牛肉膏蛋白胨即可。

2、放线菌最喜欢生活在有机质丰富的微碱性土壤中，泥土所特有的“泥腥味”就是由放线菌

产生的，所以我们在培养放线菌时采用的是有机质丰富而稍显碱性的高氏1号作为培养基。

3、使用PDA的原理：土豆的营养成分非常丰富，每100克中含蛋白质2.6克，脂肪0.04 碳水化合物15.76 铁1.0毫克钙21毫克钠2.6毫克钾224毫克维生素C34毫克、尼克酸1.1毫克。对于酵母菌而言，它对营养成分要求很高，且要在含糖量高的环境下才能很好地生长，而葡萄糖是糖源中最易利用的糖，几乎所有的微生物都能利用葡萄糖，它是培养基的一种重要的成分，并且作为加速微生物生长的一种有效的的糖，酵母菌生长速度缓慢，加葡萄糖可以促进它生长，使实验结果更明显

七、 划线、涂布分离法

（一）划线分离法：

（1）步骤：平板划线分离微生物：在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取土壤悬液一环在平板上划线。划线的方法很多，但无论采用哪种方法，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使之形成单个菌落。用接种环以无菌操作挑取土壤悬液一环，先在平板培养基的一边作第一次平行划线3～4条，再转动培养皿约70度角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再用同样的方法通过第二次划线部分作第三次划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线。划线完毕后，盖上培养皿盖，倒置于温室培养。（尝试用几种划线方法，掌握其基本技能，需四个无菌培养菌） 在这个过程中我们把划线分为B、C两种即如下图：

（2）我们把划线法与涂布法分别运用于分离土壤微生物的过程中，细菌与放线菌各有一个培养皿用B的划线方法，另外一个用C的方法划线：而霉菌与酵母菌各有一个用B的划线方法，另外一个用涂布法。

（二）涂布分离法（必须用无菌操作）

将PDA的两种培养基的两个平板底面分别用记号笔写上10-3、10-5两种稀度、培养基的名称、培养对象、日期与制作者的名称，然后用无菌吸管分别由10-3、10-5的土壤稀释液中各吸取0.1或0.2ml，小心地滴在对应平板培养基表面中央位置用无菌玻璃涂棒，右手拿无菌涂棒平放在平板培养基表面上，将菌悬液先沿同心圆方向轻轻地向外扩展，使之分布均匀。室温下静置5～l0min，使菌液浸入培养基。最后倒置存放