HPV-DNA检测在宫颈癌筛查中的现状与展望

摘要:子宫颈癌是女性常见恶性肿瘤之一,严重危害着广大妇女的健康与生命。早期筛查对子宫颈癌与宫颈上皮内瘤变(CIN)的防治有重要意义。大量研究表明,高危型人乳头瘤病毒(HPV)的持续感染是引发子宫颈癌的主要生物因素,所以HPV-DNA检测对宫颈癌的防治有着重要的作用。现就该检查在宫颈癌筛查中的现状和进展予以综述,为以后的研究提供参考。 关键词:人乳头瘤病毒;宫颈癌;筛查

宫颈癌作为女性第二好发恶性肿瘤,它的防治关键是进行宫颈筛查及上皮内瘤变(cervicalintraepithelialneoplasis,CIN)。而人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)是导致宫颈病变引发宫颈癌的重要环节,尤其是高危型HPV的持续感染,因此越来越多的临床医师使用HPV-DNA检测,它也成为宫颈疾病筛查和诊断中的重要辅助手段之一。现就HPV-DNA的检测对宫颈癌的筛查、诊断的意义进行综述,为以后的研究提供参考。 1 HPV-DNA的检测方法 HPV是一种嗜上皮性病毒,也是一种脱氧核糖核酸(DNA)病毒,检测HPV的方法有免疫组织化学、原位杂交、斑点杂交、核酸印迹和聚合酶链反应等。19xx年由美国Appliedbiosystems公司推出了在传统聚合酶链反应技术上发展起来的实时荧光定量聚合酶链反应检测,它不仅具有较高的特异性和敏感性,还实现了检测、定量、分型的同步进行,检测简便快速。但其检测费用和实验条件要求较高,目前大都处于实验室阶段,不适合大规模HPV筛查和流 行病学研究[1] 。最近Digene公司推出的杂交捕获二代(hybirdcaptureⅡ,HC-Ⅱ)是唯一通过美国食品药品管理局批准的可在临床使用的HPV-DNA检测技术[2] ,虽然可检出13种高危型、5种低危型HPV及病毒载量,却不能确定其具体型别。Digene公司随后又在杂交捕获法技术的基础上结合基因芯片推出了

HCExpressArray技术。该技术利用芯片上固定的病毒不同亚型的特异性DNA探针,对病毒型别进行判断,因其具有快速分型和定量的特点在将来必定会有非常广阔的应用前景。20xx年问世的HPV快速筛查技术(careHPV)在识别宫颈病变的敏感性和特异性方面稍差于HC-Ⅱ,且不能定量,但它能够在2.5h内筛查出结果,其假阴性率为10%,假阳性率为16%,费用只是HC-Ⅱ的1/10。20xx年韩颖鑫等[3] 发明了一种用质谱技术进行HPV分型和定量的新方法。

2 HPV-DNA检测的重要性 2.1 HPV-DNA检测与宫颈病变的关系 子宫颈癌的发病与HPV感染有关的报道始于20世纪70年代,随后大量研究已基本明确HPV持续感染是宫颈癌发病的首要条件,HPV与宫颈癌的归因危险百分 比超过90%[4] 。HPV-DNA检测诊断宫颈癌及CIN敏感性高,阴性预测值达到100%,已广泛用于宫颈癌的筛查[5] 。一项2526例的山西、辽宁和深圳的联合调查CIN≥Ⅱ的HPV检测灵敏度达90.54%,特异度达98.36%[6] 。隋霜等[7] 报道的CIN灵敏度达 80.86%,宫颈癌特异度为93.82%。魏颖颖等[8] 报道的CIN灵敏度达98.55%,宫颈癌为100%,与国外文献报道的99.8%基本一致[9] 。由此可见,对子宫颈癌发病的生物学危险因素主要集中在HPV感染上,它是导致CIN和宫颈癌的主要因素。 2.2 HPV-DNA检测分析地区差异性和共性 目前已确定的HPV基因型有120多种,其中与生殖道感染有关的有40多种,已认定的高危型有15种(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68),低危型有6种(6、11、42、43、44、CP8304)。世界范围的流行病学资料表明,HPV感染基因型分布存在地域 差异[10] 。在美国HPV感染率的前5位是HPV56、53、16、58及52;非洲是HPV52、35、58、51及16;印度是HPV16、18、33、58及35;新疆省乌鲁木齐是 HPV16、31、58、52及18[11] ;江苏省常州是HPV16、58、39、6及33[6] ;广州地区是HPV52、16、51、

58及 68;粤东地区是HPV16、18、58、33及73。上述资料所检出的亚型基本是HPV的高危型,说明导致宫颈癌发生、发展的必要条件是高危型HPV的持续性感染。人宫颈癌标本中HPV的检出率高达99%,HPV16、18阳性率分别为60%和14%,其中HPV16是地区差异性最小,致癌性最强,与CIN和宫颈癌的关系最为密切的基因[12] 。 2.3 HPV-DNA检测高危人群 由于人们观念的改变,过早、过频性生活及性生活混乱使宫颈炎越来越多,很多合并HPV感染,进而引起CIN,若不除去病因,则有1%进一步发展为宫颈癌。而最近十年来,研究也提示70%以上有性生活的妇女会感染HPV, 危险性达到90%以上[13] 。大量的资料发现,HPV感 染率有随年龄增加而递减的趋势,石峥等[14] 报道的HPV感染发生最多的年龄段是25～29岁,40岁以后感染率明显下降,与国内外文献报道基本一致。因此,HPV-DNA检测对于高危人群应相应提前筛查年龄,缩短筛查时间以有效地控制宫颈癌的发病率和病死率。

3 HPV-DNA检测的意义 3.1 预防宫颈癌 Cuzick等[15] 报道,HPV感染通常要比形态学改变早,并且由病毒感染引起的相关形态学改变的潜伏期比较短,中位随访时间为26个月,有的病例在首次HPV阳性的同时即为CINⅢ,而最长者69个月。20xx年国际癌症研究中心提出,没有持续的HPV感染女性发生宫颈鳞癌的可能性为0,宫颈癌筛查和追踪管理的有效方法是HPV-DNA检测[16] 。近年来,我国政府对宫颈癌防治的重视使20世纪90年代的病死率比70年代降低了69%[17] 。如能及早发现HPV的感染,给予恰当的处理,宫颈癌是可预防、可治愈的。 3.2 指导治疗 HPV-DNA检测仪高度标准化和自动化,不受阅片者和采样误差的影响,阴性预测值能达99.9%,有较好的重复性并且操作简单,可以有效地降低液基细胞学检查、阴道镜的漏诊率和假阴性率。HPV-DNA检测可以具体分型(高危型和低危型),为临床

筛查、诊断、治疗、随访提供依据。同时,可以对未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞进行 分流,防治过度治疗[18-19] 。3.3 HPV疫苗的研发 HPV-DNA检测对宫颈病变具有很高的敏感性和阴性预测值,在宫颈病变筛查及HPV疫苗研发中具有重要意义。大量研究资料显示

[20-21] ,每年全球近24万女性死于宫颈癌,其中70%由HPV16、HPV18引起,因此HPV疫苗将成为宫颈癌Ⅰ级预防的重要措施。20xx年6月美国食品药品管理局正式批准Merck公司的HPV16、HPV18、HPV6、HPV11四价疫苗(Gardasil)上市,它是世界上第一个肿瘤疫苗[22] 。20xx年9月欧盟委员会批准GlaxoSimthkline公司的HPV16、18二价疫苗上市。到20xx年2月止两种疫苗已经在200多个国家和地区批准应用,加拿大及芬兰、德国等欧盟国家相继报告二价疫苗对HPV16、18相关CIN≥Ⅱ病变的有效率为93%～100%,在无HPV感染的人群中对CIN≥Ⅱ病变的疫苗预防有效率达70%,抗体浓度比自然 感染高12～13倍[23-24] 。鉴于地区间HPV型别存在明显的差异,在我国的HPV型别地区分布情况尚缺乏系统、全面、科学的统计数据,HPV-DNA检测可为中国的HPV疫苗研究提供数据资料,进一步指导我国预防性宫颈癌疫苗的研发。

结 语 据美国癌症协会统计,20xx年发达国家宫颈癌的5年生存率平均为61%,发展中国家为41%,早期宫颈癌时就给予手术治疗的患者5年治愈率可高达80%～ 90%[25] ,所以及早发现宫颈癌至关重要。由目前的资料可知,HPV-DNA检测较液基细胞学检查在宫颈病变的早期发现方面具更大优势,敏感性更高,还可有效地降低液基细胞学检查的漏诊率和假阴性率,把两者结合起来可以提高对宫颈癌早期诊断的敏感性和特异性,对宫颈病变的诊断、治疗和预防宫颈癌的发生具有重要的作用[26] 。虽然近年来我国宫颈癌的发病率以每年2%～3%的速度增长,有明显年轻化趋势,但随着HPV疫苗的应用和HPV-DNA检

测的普及化,相信在不久的未来宫颈癌发病率将会大大降低。

 

第二篇：更年期妇女的HR-HPV DNA检测在宫颈癌筛查中的价值

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更年期妇女的HR-HPV DNA检测在宫

颈癌筛查中的价值

（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）

【摘要】目的 评估更年期患者的HR-HPV DNA检测法在筛查宫颈癌中的应用价值。方法 20xx年9月至20xx年4月期间，对在我院就诊的726例更年期妇女行相关的宫颈癌前病变检查，用PCR荧光定量法检测HR-HPV DNA，诊断的金标准是病理学诊断报告结果。结果 受检者的平均年龄为48±2.6岁，病理诊断子宫肌瘤118例，CINⅠ46例, CINⅡ41例, CINⅢ38例,鳞癌8例,腺癌2例,湿疣19例,hPV感染102例，HPV DNA检测阳性102例(14.05%),阳性率与年龄有一定的相关性，53岁之前呈正相关，53岁之后呈负相关。HPV阳性率与是否绝经相关性差。未生育组的HPV阳性率为47.36%，生育1-3个组的HPV阳性率为9.4%,生育大于3个组的HPV阳性率为20.95%。结论 子宫颈病变组的HPV检出率(29.78% )显著高于无子宫病变或炎症组(4.63% ),有差异,P0.05)。其中宫颈上皮内瘤变组随着病情的加重，检出率逐渐上升。HPV阳性率与是否生育及生育多少关系密切，HPV阳性率的排序为未育组多育组少育

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组。

【关键词】 更年期综合症 hR-HPV DNA 宫颈癌 宫颈上皮内瘤变

更年期综合征(climacteric syndrome)是指由于精神、心理、神经、内分泌以及新陈代谢等各方面的变化所引起的各器官系统的相应症状和体内综合症候群[1]。进入更年期的妇女由于激素水平不平衡导致内分泌失调，免疫力低下，容易患各种妇科疾病，特别是子宫肌瘤和宫颈癌。近年来宫颈癌严重危害着女性的生命与健康，死亡率与发病率呈上升趋势。目前大量的科学研究已证实宫颈癌是一种感染性疾病,是唯一一种经医学干预后能使发病率和死亡率均有所下降的人类恶性肿瘤[2],早期诊断以及尽早治疗癌前病变（宫颈上皮内瘤变）是预防和控制宫颈癌的关键环节。所以,寻找合理且有效的检测方法能够从一定程度上降低宫颈癌的死亡率及发病率。研究表明高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）是宫颈癌及宫颈癌癌前病变的主要危险因素[3],本文采用PCR荧光定量技术对更年期妇女进行HR-HPV DNA检测来筛查宫颈癌癌前病变。以研究更年期妇女HPV感染检测的临床意义。

1 资料与方法

1.1 更年期综合征妇女的筛选标准：（1）年龄在45～55岁的妇女，排除月经失调者，潮热汗出为典型症状，可伴有情绪异常，烦躁不安，易怒，头痛眩晕，心悸，睡眠质量差甚至失眠，记忆力下降，腰腿酸痛等。（2）内分泌水平测定：雌二醇（E2）降低，促卵泡激

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素（FSH）和促黄体生成激素（LH）均有不同程度的增高。（3）应排除精神系统、神经系统疾病以及甲亢、心血管疾病等。

1.2 研究对象 20xx年9月至20xx年4月期间，对在我院就诊的更年期综合征妇女进行筛选，入选条件是：无子宫切除史，无盆腔放疗史，无宫颈上皮内瘤变史，非月经期，非孕期，无急性的生殖道炎症。年龄在45～55岁，平均年龄48±2.6岁，孕次0～7次，平均孕次4次，产次0-6次，平均产次3.5次。

1.3 所有入选的患者都知情并且填写知情同意书，同意接受更年期妇女的HR-HPV DNA检测法筛查宫颈癌的流行病学调查。

1.3.1hR-HPV DNA的检测 用无菌生理盐水棉球洗去宫颈外分泌物，再用无菌棉拭子插入宫颈内，停5秒钟后旋动棉拭子采集宫颈分泌物，将棉拭子置入无菌玻璃管，密闭送检。向玻璃管中加入1ml灭菌生理盐水，充分震荡摇匀，挤干棉拭子。

吸取全部液体转至1.5ml离心管中，12000rpm/min离心5分钟。去上清，沉淀加灭菌生理盐水1ml，充分震荡混匀，12000rpm/min离心5分钟,沉淀加入50μl DNA提取液充分混匀，100℃保温10分钟，误差不超过1分钟。12000rpm离心5分钟，备用。采用PCR-Taqman荧光探针技术检测HPV16、18型特异性DNA核酸片段, 乳头瘤病毒核酸（16型、18型HPV DNA）定量试剂盒（中山大学这安基因有限公司。生产批号：20110316），DA-7600核酸扩增实时荧光检测仪,诊断阳性指标为标本出的HPV DNA≥1.0 pg/ml。

1.3.2 病理学检查 在阴道镜下对可疑病灶进行宫颈四象限活

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检及诊刮术,病理诊断：无子宫病变或炎症；子宫肌瘤；CIN Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期；鳞癌；腺癌。HPV感染,镜下观察可见湿疣外层的底细胞。

1.4 统计学分析 采用SPSS10.0软件进行统计学处理和分析。

2 结果

2.1 入选的726例更年期妇女中HPV DNA检测阳性102例(14.05%),阳性率与年龄有一定的相关性，53岁之前呈正相关，53岁之后呈负相关，如表1。这可能与更年期妇女激素水平有一定的关系。

2.2 病理学检查结果，见表2。

病理诊断子宫肌瘤218例，CINⅠ46例, CINⅡ41例, CINⅢ38例,鳞癌8例,腺癌2例,湿疣19例,hPV感染102例。统计学检验分析结果,子宫颈病变组的HPV检出率(29.78% )显著高于无子宫病变或炎症组(4.63% ),有差异,P0.05。其中宫颈上皮内瘤变组随着病情的加重，检出率逐渐上升。排除子宫肌瘤外的其他宫颈疾病的HPV阳性检出率为（35.71）显著显著高于无子宫病变或炎症组(4.63% ),有统计学差异,P0.05。子宫肌瘤HPV的阳性检出率22.03%，说明子宫肌瘤与HPV有一定的相关性。

表1 不同年龄段与HPV阳性率的关系

2.3 绝经前后与HPV的相关性 更年期妇女绝经前的HPV阳性率为14,53%，绝经后的HPV阳性率为13.82，两 者相比较无统计学差异，说明HPV阳性率与绝经相关性较小。

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表3 绝经前后与HPV的相关性

分类 例数 HPV阳性例数 HPV阳性率（%）

绝经前 234 34 14.53

绝经后 492 68 13.82

2.4 生育与HPV的关系

未生育组的HPV阳性率为47.36%，生育1-3个组的HPV阳性率为9.4%,生育大于3个组的HPV阳性率为20.95%，如表4，少育组与未育组比较有统计学意义，P0.05少育组与多育组比较有统计学意义，P0.05，多育组与未育组比较有统计学意义，P0.05。HPV阳性率的排序为未育组多育组少育组。

表4 生育与HPV的关系

3 讨论

近年来大量学者研究表明，HR-HPV感染已被流行病学和生物学证明是宫颈癌及癌前病变发病的主要危险因素[4-5],所以检测HR-HPV DNA是针对疾病病因的检查,不仅能够检出已患宫颈癌或宫颈癌前病变的妇女并且能将有潜在发病风险的妇女检查出来，利于疾病的早期诊断与治疗。研究证实30岁以下的女性感染HPV大多是一过性的,具有一定自限性,自愈的可能性很大[6]。

HPV的阳性率与发病年龄有一定的关系，可能是由更年期综合导致的激素水平不平衡引起的。子宫肌瘤HPV的阳性检出率22.03%，说明子宫肌瘤存在一定的恶变几率，便于早期治疗，避免

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疾病的恶性发展。排除子宫肌瘤外的其他宫颈疾病的HPV阳性检出率为（35.71）显著显著高于无子宫病变或炎症组(4.63%),有统计学差异,P0.05。其中宫颈上皮内瘤变组Ⅰ-Ⅲ的HPV阳性检出率呈上升趋势，说明其恶变的可能性逐渐增高。鳞癌的HPV阳性率为100%，腺癌只有2例，阳性率为0，可能与病例统计例数过少有关。不生育或生育过多都对子宫的危害较大，生育1-3个可以降低宫颈癌的发病率。

更年期妇女宫颈癌病变的发病率呈逐年上升趋势，可能与现代社会压力变大、环境恶化以及饮食中含有大量激素所造成。宫颈癌病变严重威胁着更年期妇女的健康与生命，所以早期筛查宫颈癌及癌前病变有助于提高更年期妇女的生活质量。HR-HPV DNA检测法可用于早期宫颈疾病的普查。

参 考 文 献

[1] 黎烈荣,谭异伦,范红霞,等.更年安怡片治疗更年期综合征的观察[J].中国中西医结合杂志, 1999, 19(4):235-236.

[2] Syrjanen S, Shabalova IP, PetrovichevN,et al.Human papilomavirus testing and conventional Pap smear cytology as optional screening toolswoman atdifferent risks for cervical cancer in countries of the FormerSo-vietUnion[J].LowgenitTractDis, 2002,6: 97.

[3] Walboomers JM, JacobsMV, ManosMM,etalHuman papillomavirus is a necessary cause of invasive cervical

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cancerworldwide[J].Patho,l.1999, 189: 12.

[4] Syrjanen S, Shabalova IP, PetrovichevN. eta.lhuman papilomavirus tes-ting and conventional pap smear cytology as optional screening toolswoman atdifferent risks for cervical cancer in countries of the former so-vietunion.LowgenitTractDis, 2002, 6: 97-110.

[5] 乔友林.中国妇女人乳头瘤病毒感染和子宫颈癌的流行病学研究现状及其疫苗预防前景.中华流行病学杂志, 2007, 28(10): 937-940.

[6] Dalstein V,RiethmulletD, Pretet JL, eta.l Persistence and load ofhigh-riskhPV are predictors for development ofhighgrade cevrical lesionalongitudinalFrenchcohort study.Lant JCancer, 2003, 106: 396-403.