食用菌母种的制作

——组织分离法实验报告

   

实验目的：

学习和掌握食用菌的组织分离法；

一、     实验原理：

食用菌的母种一般是采用孢子分离法或组织分离法得到的纯培养物。利用食用菌子实体内部组织进行分离，是获得母种最简便的方法。

二、     实验器材：

1. 食用菌：香菇、平菇。2. 培养基：PDA培养基斜面。3. 仪器或其他用具： 75%酒精棉球、接种针记号笔等。

三、     实验方法：

1. 选择种菇：选择肥壮菇体作种菇；

2. 种菇消毒：取1张菇片，用 70%的酒精轻擦表面进行消毒；

3. 菇肉接种：将菇片纵向撕开，在每个裂面靠近菇柄与菌盖的交界处取一米粒大小的菇肉组织接于PDA试管斜面上；

4. 培养：将试管斜面置于15～30℃下培养；

五、注意事项

1.  在整个操作过程中都要注意无菌操作，一切用具都要消毒。

2.  要等刀片冷却后再切取组织块。

六、实验结果与记录

第一次实验：10月16日上午进行接种，两试管都以肥壮的双孢菇为种菇，10月13日观察培养基

 

第二次实验：10月30日上午进行接种，记号笔标记的两支试管为双孢菇，标签纸标记的两只试管为香菇进行实验，10月9日观察

 

              

 

 

第二篇：乳制实验报告

                       

 

                                           

 

实验一  乳的酒精试验

     新鲜乳中的酪蛋白胶粒由于其表面带有相同的电荷（负电荷）和具有水合作用，故以稳定的胶粒悬浮状态分散于乳中。要想使其从乳中沉淀出来需要两个条件：一是除去胶粒所带的电荷，二是破坏胶粒周围的结合水层。当乳的新鲜度下降，酸度增高，酪蛋白所带的电荷就要发生变化，pH达4.6时（即酪蛋白的等电点），酪蛋白胶粒变为电中性，失去排斥力量，于是极易聚合成大胶粒而沉淀出来。此外，加入强亲水物质如酒精、丙酮等，能夺取酪蛋白胶粒表面的结合水层，也使胶粒易被沉淀出来。酒精试验就是借助于不同酸度的乳加入酒精后，根据酪蛋白凝结的情况判断乳的新鲜程度。在酒精试验时，乳的酸度越高，酒精浓度越大，乳的凝絮现象越易发生。

1、仪器与试剂

仪器：20毫升试管2支，2毫升刻度吸管2支

试剂：68°中性酒精溶液

2、操作方法

取乳样2ml于洁净试管中，加入等量的68°酒精溶液，迅速轻轻摇动使充分混合，观察有无白色絮片生成。如无絮片出现，表明乳是新鲜的，酸度不高于20°T，成为酒精阴性乳；出现絮片的乳，为酸度较高的不新鲜乳，成为酒精阳性乳。根据产生絮片的特征，可大致判断乳的酸度。

表1  68°酒精试验凝结特征

表2    不同酒精浓度试验结果

3、酒精试验注意事项

（1）非脂乳固体较高的水牛乳、牦牛乳和羊乳，酒精试验呈阳性反应，但热稳定性不一定差，乳不一定不新鲜。因此对这些乳进行酒精试验，应选择低于68°的酒精溶液。由于地区不同，尚无统一标准。

（2）牛乳冰冻，也会形成酒精阳性乳。但稳定性较好，可作为乳制品原料。

（3）酒精应是纯的，pH必须调到中性，使用时间超过5-10天必须重新调配。

4、实验结果

（1）袋装牛乳无白色絮片生成，表明该乳是新鲜的，酸度不高于20°T，成为酒精阴性乳。

（2）放置时间较长的牛乳出现絮片的乳，为酸度较高的不新鲜乳，成为酒精阳性乳。

实验二  乳的煮沸试验

牛乳的新鲜度越差，酸度越高，热稳定性越差，加热时易发生凝固，一般此法不常用，仅在生产前牛乳酸度较高时，作为补充试验用，以确定牛乳能否使用，以免牛乳杀菌时凝固。

1、仪器与试剂

20ml试管2支，5ml刻度吸管2支，酒精灯1只，公用水浴1

2、操作方法

取5ml乳样于清洁试管中，在酒精灯上加热至煮沸1min，或在沸水浴中保持5min，然后进行观察。如果产生絮片或发生凝固，表示乳不新鲜，酸度在23°T以上或混有初乳。牛乳的酸度与凝固温度的关系如下：

3、实验结果

（1）袋装牛乳煮沸时不凝固，判定为新鲜牛乳。

（2）放置时间较长的牛乳22℃时自行凝固酸度为60°T，所以判定为不新鲜牛乳。

实验三   美蓝试验

乳中含有各种不同的酶，其中还原酶是细菌生命活动的产物。细菌污染愈严重，则还原酶的数量愈多。还原酶具有还原作用，可使蓝色的美蓝还原成无色的美蓝。还原酶愈多则褪色愈快，细菌污染愈大。

1、仪器药品

干燥箱、酒精灯、1ml吸管、试管、10ml吸管、水浴箱或恒温箱、美蓝溶液（5ml饱和美蓝的乙醇溶液<美蓝0.6g+95%乙醇30ml >加195ml水，混匀）

2、操作方法

（1）仪器消毒：试验中所用的吸管、试管等必须事先经过干热灭菌。

（2）以无菌操作吸取10ml乳样于试管中，再加入美蓝1ml，塞上棉塞，摇匀，然后放在35-40℃的水中或恒温箱中。记录开始保温的时间。

（3）每隔10-15min观察试管内容物褪色情况。

（4）根据试管内容物褪色的速度，确定乳中的细菌数及细菌污染度的等级。

（5）判定标准（见下表）

3、实验结果

（1）袋装纯牛奶9h褪色，证明1mL乳中的细菌数小于50万，

乳的细菌污染度等级为第一级（良好）。 

（2）放置时间较长的牛乳25min褪色，证明1mL乳中的细菌数小于400—2000万，乳的细菌污染度等级为第三级（不好）。 

实验四  消毒牛乳杀菌效果的检验

一、目的要求

消毒牛乳是人们最常饮用的乳制品之一。它的杀菌效果的优劣直接影响着人们的身体健康。若杀菌不彻底，乳中就会残存一部分微生物，在贮藏和运输过程中，这些微生物就会大量繁殖，使消毒牛乳质量降低，甚至失去食用价值。因此有必要对消毒牛乳杀菌效果进行检验。在实践中，通常用过氧化物酶试验和磷酸酶试验。

二、检验方法

过氧化物酶试验（淀粉碘化钾法）

1、原理

生牛乳中含有过氧化物酶，它能使过氧化物分解产生[O]，而[O]能氧化具有还原性的碘化钾（KI）产生I₂，I₂与淀粉产生蓝色反应。

H₂O₂+氧化物酶---→[O]+H₂O

2KI+[O] ---→I₂+2KOH

2、仪器与试剂

仪器：试管，5ml吸管

试剂：（1）3%淀粉碘化钾溶液：3g淀粉先用少量温水合成乳浊液，然后边搅拌边加入沸水100ml，冷却后加入碘化钾溶液5ml（事先取碘化钾3g溶于5ml蒸馏水中）

（2）2%过氧化氢溶液：按浓度配制

3、操作方法

（1）吸取3-5ml乳液于试管中，加入3%淀粉碘化钾溶液5滴和2%过氧化氢溶液2滴，摇匀，然后观察乳样在1min内有无颜色变化。

（2）判断标准

无蓝色变化—乳中无过氧化物酶。说明乳经过巴氏杀菌

有蓝色变化—乳中有过氧化物酶。说明未经巴氏杀菌或杀菌后又混入了生乳。

4、说明

颜色反应如在1min后发生，这并不是过氧化物酶的作用，而是H₂O₂性质不稳定，能逐渐分解产生[O]。所以，检查时必须严格注意变化的时间。

5、实验结果

新鲜牛奶加入淀粉碘化钾溶液后无蓝色变化，说明乳中无过氧化物酶。说明乳经过巴氏杀菌

经放置过的牛奶加入淀粉碘化钾溶液后瞬间变蓝，说明乳中含有过氧化氢酶！该乳已经不新鲜！

实验五  酸度的测定

新鲜牛乳的酸度一般为14--18°T.在牛乳存放过程中，由于微生物的活动，分解乳糖产生乳酸，使乳的酸度升高。所以测定乳的酸度是判定乳新鲜度的重要指标。通常以滴定酸度（°T）表示。

1、仪器与试剂

仪器：25或50毫升碱式滴定管1支，5及10毫升移液管1支，100毫升量筒1只，500ml容量瓶1只，150毫升锥形瓶3只，电子天平

试剂：0.1mol·L^-1NaOH溶液：称取2.0克NaOH置于500ml容量瓶中。加蒸馏水至刻度，摇匀后进行标定。

酚酞指示液：称取0.5克酚酞溶于75 ml体积分数为95%的乙醇中，并加入20 ml的水，然后滴加氢氧化钠溶液至微粉色，再加入水定容至100ml。

2、操作方法

称取10g乳样，放入150毫升锥形瓶中，加入20毫升蒸馏水和2.0毫升的酚酞指示液，将混合物摇匀后，以0.1mol·L^-1NaOH滴定，边滴边摇，直至出现微红色在30s内不消失为止。记录消耗的氢氧化钠标准溶液滴定毫升数，带入下列公式计算：

X=c×V×100／（m×0.1）

X—试样的酸度，单位为度（°T）

c—氢氧化钠标准溶液的摩尔浓度，单位为摩尔每升（mol·L^-1）

V—滴定时消耗氢氧化钠标准溶液体积，单位为毫升（ml）

m—试样的质量，单位为克（g）

0.1—酸度理论定义氢氧化钠的摩尔浓度，单位为摩尔每升（mol·L^-1）

3、根据测定结果判定乳的质量 

14-18°T者为正常新鲜的牛乳；低于14°T者为碱性乳或掺水乳，因掺水后乳中碱性盐增加，酸性盐减少；高于21°T者为微酸性乳；高于25°T者为酸性乳；高于27°T者加热时凝固；60°T以上者为酸化乳，常温（22℃）下即可凝固。

4、注意事项

（1）按照标准规定使用的0.1mol·L^-1NaOH，应经精密标定后使用，其中不应含有Na₂CO₃，故所用蒸馏水应先经煮沸冷却，以驱除CO₂。

（2）温度对乳的pH值是有影响的，因乳中具有微酸性物质，离解程度与温度有关。冷的乳滴定酸度偏低，最好在20℃-25℃时滴定为宜。

（3）滴定很慢时，则消耗碱液越多，误差大。最好争取在20-30秒完成滴定。

5、实验结果

（1）袋装牛乳：牛乳的质量为10.01g，测定结果消耗0.1mol·L^-1NaOH溶液为1.40ml，所以经过计算得袋装牛乳的酸度为14.0°T，最终结果判定袋装牛乳为新鲜牛乳。

（2）放置时间较长的牛乳：牛乳的质量为11.09g，测定结果消耗0.1mol·L^-1NaOH溶液为0.50ml，所以经过计算得袋装牛乳的酸度为4.5°T，最终结果判定该牛乳为碱性乳或参水乳。