实验5 EDTA标准溶液的配置和标定
1. 实验目的
① 配制EDTA标准溶液;
② 用基准标定EDTA标准溶液;
③ 掌握钙指示剂的应用特点。
2. 实验原理
① EDTA可以用基准、基准ZnO等标定,但当EDTA标准溶液被用于滴定水溶液中的时,最适合于标定其浓度的基准物质是;
② 标定反应:
在pH约为12.5的条件下:
3. 实验试剂
EDTA,,钙指示剂,1:1HCl溶液,20%NaOH
4. 实验步骤
① 称约4.5g EDTA至250ml烧杯,加约100ml蒸馏水加热溶解,冷却后转至1000ml试剂瓶,加600ml蒸馏水,摇匀,配制600ml 0.02mol/L EDTA标准溶液;
② 用分析天平称取0.4~0.6g基准至150ml烧杯,滴加少量蒸馏水润湿,盖上表面皿,从烧杯嘴滴加1:1HCl溶液,使全部溶解,加10ml蒸馏水加热微沸赶走,冷却后转移至250ml容量瓶,定容;
③ 用移液管移取25ml上述溶液至250ml锥形瓶,加约100ml蒸馏水及12ml 20% NaOH溶液,再加适量钙指示剂,用待标定的EDTA溶液用酸式滴定管滴定至溶液由酒红色变成蓝色平行实验两次;
5. 实验数据记录与处理
计算公式:
6. 结果讨论与思考
在配位滴定中为什么要控制溶液的pH?在本试验中为什么要控制溶液的pH在12.5左右?
答:①酸度直接影响形成的MY(金属离子和EDTA的配位化合物)的稳定性;②指示剂是弱酸弱碱有色物质,不同酸度其颜色不同,指示剂本身的颜色要与指示剂与金属离子配合物的颜色有明显差异,否则无法指示滴定终点,由此指示剂对溶液酸度有明确的要求,钙指示剂在pH=12~14之间显蓝色;③标定的EDTA过程可用下列反应表示:H2Y+M=MY+2H+,显然,滴定过程是酸度升高的过程。
组织培养实验有关试剂的配制:
MS培养基储备液的配制
次氯酸纳消毒液:取30ml次氯酸纳溶液,用蒸馏水定容至100ml。现配现用。
75%的酒精:75ml的95%的酒精加水定容至95ml。
0.2%的升汞溶液:称取HgCl2 20克,加蒸馏水至4000ml。
1N 盐酸:取8.25ml的浓盐酸,加蒸馏水定容至100ml。
1N NaOH:称8g NaOH,用蒸馏水定容至200ml。
0.1mg/ml的2,4-D溶液:取25mg的2,4-D,加入少量95%的酒精和1N的NaOH溶解,再加蒸馏水定容至250ml。
0.1mg/ml 的6-BA溶液:取25mg的6-BA,用少量1N的盐酸溶解,再加蒸馏水定容至250ml。
遗传转化与GUS基因检测的试剂配制
LB培养基的配制:
将下列组分溶解在0.9L水中:
如果需要用1N NaOH(10~15ml)调整pH至7.0,再补足水至1L
10ml 的10mmol/l的AS(乙酰丁香酮)母液(100x)配制:称19.6mg的AS,先溶于少量甲醇中,然后慢慢加蒸馏水定容至10ml,过滤除菌,分装成200ul/管(每组1管),使用时将200ul的AS母液加入20ml的MS液体培养基中。
50mmol/l的磷酸钠缓冲液(pH 7.0):A液:取NaH2PO4.2H2O 3.12g溶于蒸馏水,定溶至100ml。 B液:取Na2HPO4.12H2O 7.17g溶于蒸馏水,定溶100ml。取A液39ml与B 液61ml混合,定容至400ml,调PH至7.0。
50mmol/L铁氰化钾母液:称3.295g,用蒸馏水定容至200ml
50mmol/l亚铁氰化钾母液:称4.224g ,用蒸馏水定容至200ml。
0.5mol/l EDTA母液(pH8.0):
药品 分子量 100ml 500ml
EDTA Na2 2H2O 372.24 18.6g 93.06g
双蒸H2O 80ml 400ml
用NaOH调PH至8.0 6g 10g
DdH2O定容至 100ml 500ml
GUS检测液的配制:100mgGluc,先溶于1ml的DMF。取80ml 50mmol/l的磷酸钠缓冲液(pH 7.0),加入1ml 50mmol/L铁氰化钾、1ml 50mmol/L亚铁氰化钾和2ml 0.5mol/l EDTA(PH 8.0),再加入已溶解的Gluc,再加20ml的甲醇,混匀。(配制方法参考《现代植物生理学实验指南》p348)
将配好的GUS检测液分装于1.5ml的小管中(1ml/管,1组1管),-20°C保存备用。
鲜花保鲜及超氧物歧化酶活性测定
50mmol/l的磷酸钠缓冲液(pH 7.0):
A:NaH2PO4.2H2O 3.12g溶于蒸馏水,定溶至100ml。
B液:Na2HPO4.12H2O 7.17g溶于蒸馏水,定溶至100ml。
取A液39ml与B 液61ml混合,定容至400ml。PH7.0。
50mmol/l的磷酸钠缓冲液(pH 7.8):
取A液8.5ml与B 液91.5ml混合,定容至400ml。PH7.8。
SOD提取液:50 mmol/L磷酸缓冲液 [含0.1mmol/L EDTA;0.3%(w/v) Triton X-100;4%(w/v)聚乙烯聚吡咯烷酮(pvpp,polyvinylpolyrrolidone), pH7.8] pvpp比较难溶,多晃动几次,再静置一会,慢慢就会溶解。
14.5 mmol/L dl-甲硫氨酸:即2.163克/L,称2.163g,用蒸馏水定容至1L(较难溶,需稍微加热)。
3umol/L EDTA: 每500ml中加3ul0.5mol/L的EDTA母液,用50 mmol/L磷酸缓冲液配制。
2.25mmol/L NBT(1.84克/L): 称0.092克,溶于50ml的50 mmol/L磷酸缓冲液磷酸缓冲液中。避光保存,现配现用.
60 umol/L核黄素:称2.25mg溶于100ml的50 mmol/L磷酸缓冲液中,避光保存,现配现用。
10000ppm6-BA:即0.01克/L,称25mg6-BA,先加少量酒精和1mol/L的NaOH溶解。再用蒸馏水定容至250ml。
0.25mg/ml的GA母液:称25mg的GA,先用少量95%的酒精溶解,再用水定容至100ml。
3%的8-羟基奎林(8-HQ):难溶于水,用柠檬酸溶液配制。生成8-羟基喹林柠檬酸盐(羟基喹林:柠檬酸摩尔数比为3:1),该盐能溶于水。先将所需柠檬酸溶于50ml左右的水中,然后将所需8-羟基喹林溶于其中,不断搅拌10-20min。待溶解后再稀释至所需倍数。
1mg/ml 2,4-D:取25mg的2,4-D,加入少量95%的酒精和1N的NaOH溶解,再加蒸馏水定容至250ml。
5克/L柠檬酸溶液:称5g 柠檬酸,用蒸馏水定容至1L。
阿斯匹林、VitC、蔗糖、葡萄糖、AgNO3 、Na2S2SO4、K2HPO4、Ca(NO3)2、 KAL(SO4)2、Nacl、水杨酸(25mg/ml)、硼酸纳、CuSO4、KNO3、MgSO4 、(NH4)2SO4、高锰酸钾、乙醇等试剂,根据学生各自设计的保鲜液需要,由学生自己配制。
叶绿素理化性质的鉴定和含量测定实验试剂
30%KOH-甲醇溶液:用250ml的烧杯称60gKOH,慢慢加入甲醇,在通风厨中进行,沸腾,不断搅拌,待完全溶解后,最后加甲醇至烧杯200ml刻度线即可。该试剂要现配现用。
6N HCl(HCl:H2O=1:1):等量的浓 HCl+等量的蒸馏水。
10%醋酸:10ml的冰醋酸中加入90ml的蒸馏水。
10%氨水:10ml的氨水中加入90ml的蒸馏水。
NaCl ,石油迷(60-90。C)、丙酮,MgCO3、石英砂,醋酸铜Cu(Ac)2等试剂由学生根据具体情况添加。
植物形态解剖实验的试剂配制
1%的番红水溶液:称1g番红,溶解于100ml的蒸馏水中。
1%的碘-碘化钾溶液:碘、碘化钾各1g溶于100ml的蒸馏水中。
0.02%的硼酸溶液:0.1g硼酸溶解于500ml的蒸馏水中。
10%的蔗糖溶液:10g蔗糖用80ml的蒸馏水溶解,最后用蒸馏水定容至100ml。
土壤全磷分析实验的试剂配制
钼锑储存液:浓H2SO4(98%-99%)153ml 缓慢倒入约400ml水中,搅拌,冷却。10g钼酸铵溶解于约60℃的300ml的水中,冷却。然后将浓H2SO4溶液缓缓倒入钼酸铵溶中,再加入100ml0.5%的酒石酸锑钾溶液,最后用水稀释至1升,避光储存。此储存液含1%的钼酸铵,5.5mol/l的1/2 H2SO4 。
钼锑抗显色剂:1.5g抗坏血酸溶解于100ml的钼锑储存液中。
二硝基酚指示剂:0.2g 2,6-二硝基酚或2,4-二硝基酚溶解于1000ml水中。
5 ppm P 标准溶液: 0.4390g KH2PO4 (二级,105℃烘过2小时)溶解于200ml水中,加入5ml浓H2SO4转入1升容量瓶中,用蒸馏水定容。此为100ppm P标准溶液,可以长期保存。取此溶液稀释20倍,即为5ppmP标准溶液,只溶液不宜久存。
浓硫酸(98%-99%)
高氯酸HClO4(70-72%)
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