临床血液学检测(SOP)

保证血细胞分析仪测定结果的准确性。

【适用仪器范围】

血细胞分析仪。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人

员批准签字：专业主管、质控主管、科主任。

【校准方法】

(一)校准环境、仪器和试剂要求 室温：20〖25°C。

湿度：<80%。

试剂：所用稀释剂、溶血剂和清洁剂都为仪器配套产品。

校准品：为仪器配套产品，并在使用效期内，同时无变质或污染 仪器：

(1) 校准前仪器内部各通道及测试室均经清洁剂处理30分钟。

(2) 仪器的背景计数、重复性及携带污染率均符合要求，否则需请维修人员检修。

(二)操作步骤

1. 从冰箱中取出校准物，放置室温15分钟，勿摇动。

2. 在测定校准物前，先测定两份正常人新鲜血液。

3. 将校准物瓶口朝上置双手掌心，双手来回搓动8次。

4. 颠倒小瓶，使瓶口朝下置于掌心，来回搓动8次。

5. 重复3和4步骤8次(计2分钟左右)。

6. 瓶底朝上，确认瓶底无沉积物，说明已充分混匀。

7. 用软纸拭净瓶口，轻轻打开瓶塞。

8. 将两瓶校准物混合在一起，充分混匀后再分装于两个瓶内。

9. 取一瓶校准物在仪器上连续测定11次。

10. 由仪器自动校准。

(三)计算与核对标准

1. 计算出各项结果的均值和精密度，均值应比日常检测报告多保留一位小数点。

2. 检查精密度是否达到使用说明书上所示的精密度，如达到，继续下一步；否则， 停止校准，与维修人员联系。

3. 计算出各项参数均值与定值之差的绝对值和相差的百分数，与校准标准(表1—1) 进行比较。

4. 结果小于第一列数值，则不需校准；结果大于第二列数值，需请维修人员处理; 结果在第一列与第二列数值之间，需校准仪器。

5.如有自动校准功能，可按说明书进行。如没有此项功能，则用定值除以均值，再 乘以原校正系数即为新校正系数，输入仪器即完成校正。

表1一1校准标准表 参数 WBC RBC Hb Hct MCV Plt MPV

3% 1.2% 1.2% 2.0% 1.2% 5.0% 5.0%

百分数差别

10% 10% 10% 10% 10% 15% 20%

【校验校准结果】

1. 按上述方法混匀第2管校准物后再在仪器上重复测定11次，按同样的方法计算，将 结果再次与校准标准核对，如合格，校准完毕，仪器方可使用。如不合格，应请厂 方工程师维修、校准。

2. 仪器校准后补正值的计算公式：（仪器可自动计算） 新的补正值=当前补正值（％) X平均补正率（％) /100

当仪器出现下列情况显示所有校对错误，这时校对值的更换确认信息不能表示，需 由维修工程师作故障检修。

平均补正率>105% 平均补正率〈95% 新的补正值>120% 新的补正值〈80%

3. 仪器故障检修后重复“操作步骤”和“计算和核对标准”重新校准和评价。 4. 书写和保存评价报告，交科室存档。

评价血细胞分析仪的各项性能指标，核实能否按厂商说明得到预期结果的评估， 保证测定结果的准确性。 【适用仪器范围】 血细胞分析仪。 【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人 员批准签字：专业主管、质控主管、科主任。 【评价方法】

(一)评价工作环境、仪器和试剂要求 室温：

20〖25 C。

湿度：<80%。

试剂：所用稀释剂、溶血剂和清洁剂都为仪器配套产品。

参评物：为仪器配套产品（标准品、质控品、干扰物等）并在使用效期内，同时无 变质和污染，或病人标本。

仪器：

(1) 评价前仪器内部各通道及测试室均经清洁剂处理30分钟。

(2) 仪器的背景计数、重复性及携带污染率均符合要求，否则需请维修人员检修。 (二）评价内容

4. 精密度：分批内和批间精密度。用高、中、低三种或二种浓度质控物测定。批内 精密度，一天内三种（二种）浓度分别各测20次，批间精密度三种浓度每天各测一 次，共测20天。

5. 携带污染率:为了解前一高值标本对其后低值标本测定结果影响程度的指标。高、 中、低三种浓度标本的排列须：中、中、高、低、中、中、低、低、高、高、中。

6. 包括总重复性测定随机误差与携带污染双重变异因素。

7. 线性范围：一种测定方法其线性范围应越广越好，至少应包括正常范围和常见的 病理范围。线性评价至少作五个浓度点以上，每点平行测三份。

8. 可比性：用于判断该仪器与常规方法或参考方法所得结果的一致性。用标准物进 行比对或用新鲜病人标本（40份以上）进行比对。

9. 分析干扰实验：干扰物也是标本中的一个组分，它不是被分析物，但它改变最后 的结果。根据分析干扰因素制备标本，每份标本平行测三份。

(二)操作步骤

1. 从冰箱中取出参评物，放置室温15分钟，勿摇动。

2. 在评价测定前，先测定两份正常人新鲜血液。

3. 将参评物瓶口朝上置双手掌心，双手来回搓动8次。

4. 颠倒小瓶，使瓶口朝下置于掌心，来回搓动8次。

5. 重复3和4步骤8次(计2分钟左右)。

6. 瓶底朝上，确认瓶底无沉积物，说明已充分混匀。

7. 用软纸拭净瓶口，轻轻打开瓶塞。

8. 根据评价目的进行测定。

9. 评价样本测定方法按血细胞分析仪测定程序。

(三)计算与核对标准

1. 计算出各项结果的均值和精密度，均值应比日常检测报告多保留一位小数点。

2. 计算与核对

[1] 精密度测定计算=、SD、CV，用CV于说明书上所示的要求比较。

[2] 携带污染率：<1%。

[3] 总重复性测定随机误差与携带污染计算双重变异因素

[4] 线性范围核对可与说明书上所示的要求比较，也可用计算斜率观察线性范围。

[5] 可比性用标准物进行比对可与说明书上所示的要求比较，用新鲜病人标本（40 份以上）进行比对，可用相关系数r，r彡0.975或r2彡0.95则认为数据满足要求。

[6]

目前一般以CLIA

3. 检查评价的项目是否达到使用说明书上所示的要求。 仪器说明提供的性能指标

[1] 精度

可靠水平95%，在下述范围之内： 全血模式：

WBC (4.0X103)/^ L以上 3.5%以下

6RBC (4.00X 10)/^ L以上 2.0%以下

HBG 1.5%以下

HCT 2.0%以下

MCV 2.0%以下

MCH 2.0%以下

MCHC 2.0%以下

3PLT( 100X 10)/^ L以上 6.0%以下

LYM#[W-SCC] 15.0%以下 以下 MXD#[W-MCC](1.0X103)/^ L以上30.0%

NEUT#[W-LCC] 15.0%以

下 以LYM%[W-SCR] 15.0%

下 以MXD%[W-MCR](12% 以上） 30.0%

下 以NEUT%[W-LCR] 15.0%

下 以下 RDW-SD或RDW-CV 4.0%

PDW 12.0%以

下 以下 MPV 5.0%

P-LCR 20.0%以

下 以下 稀释模式 6.0%

WBC(4.0X103)/^ L以上

RBC(4.00X 106)/^ L以上 3.0%以下 分析干扰实验：88为准。

H 2.50%以下

GH3.0%以下

CM 3.0%以下

CM 3.0%以下

CMCHC 3.0%以下

3PLT( 100X 10)/^ L以上 9.0%以下

[正确度

2全血模式

W±3%或±0.2X103/|i L以内

BR±2%或±0.03X 106/|i L以内

BP±5%或±10X103/|i L以内

L稀释模式

W±5%或±0.3X103/|i L以内

BR±3%或±0.05X 106/|i L以内

BP±8%或±15X103/|i L以内

L[线性 3W1.0-9.9(X103/^ L) ±0.3(X10Vp L)以

B10 . 0-99 . 9 (X 103/^ L) ±3%以内

RBC：0 . 30-0 . 99 (X 106/^ L) ±0.3(X106/p L)以

1.00-7.00 (X 106/^ L) ±3%以内

H0.1-10.0(g/dL) ±0.2(g/dL)以内

G10.0-25.0(g/dL) ±2%以内

H10.0-33.0(HCT%) ±1.0(HCT%)以内

C33.4-60.0 (HCT%) ±3%以内

P10-199 (X 103/^ L) ±10(X103/p L)以内

L200-900 (X 103/^ L) ±5%以内

(设RBC〈7.00X 106/p L)

【评价结果】

1. 仪器作全面评价或评价其中一个内容时，实验后需对结果进行核对评价，如不符 合要求应检查原因，然后重复“操作步骤”和“计算和核对标准”重新评价。

2. 仪器故障检修后也要重复“操作步骤”和“计算和核对标准”重新评价。

3. 书写和保存评价报告，交科室存档。

姓名

日期 操作人员 **** **年**月**日部门主管 **** 质量负责人****

【目的】

了解仪器之间测定结果的可比性和可靠性，保证实验室内结果的一致性。

【适用仪器范围】

血细胞分析仪。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员 批准签字：专业主管、质控主管、科主任。

【比对方法】

(一）比对测试环境、仪器、试剂和样品的要

求 室温：20〖25C。

湿度：〈80%。

试剂：所用稀释剂、溶血剂和清洁剂都为仪器配套产品。

质控品：为仪器配套产品，并在使用效期内，同时无变质或污染

仪器：

1. 参于比对的仪器内部各通道及测试室均经清洁剂处理30分钟。

2. 仪器的背景计数、重复性及携带污染率均符合要求，否则需请维修人员检修。

3. 评价过程中各仪器必须有质量控制保证，避免人为误差和仪器误差，以免影响比 对的真实性。

样品：

比对的样品应包括低于参考范围的低限到高于参考范围的高限，分析浓度尽可 能在报告的浓度范围内均匀分布。比对的样品尽可能在6小时内完成，每个样品作双 份测定。

(二)操作步骤

方法一、按NCCLS文件EP9-A

1. 首先选择一台本实验室内技术性能最好的仪器，该仪器应使用配套的校准物定期 校正，每天有质量控制系统监控，并参加室间质评活动，各项目均在可接受性能范 围之内。其他仪器分别与该仪器比较。

2. 每日随机选取8份样本（其中应包括高、中、低值)，同时用各台仪器按常规样本 测定的方法，测定其各项参数，每份样本测定2次，样本排列的顺序为1、2、3、4、

5、6、7、8、8、7、6、5、4、3、2、1。连续测定五天，共40份样本。 3?记录与统计

[1] 将每日结果记录、分别统计两台仪器40份样本双份测定的平均值、绝对值、两 台仪器测定的平均值。

[2] 制图

a. 散点图：Y轴：确定仪器每样本双份测定的均值（Y); X轴：对比仪器每样本双份 测定的均值（X)。

b. 散点图：Y轴：确定仪器每次测定的值（Yij) ;X轴：对比仪器每样本双份测定的 均值（X)。

c. 偏差图：Y轴：每个样本两台仪器双份测定的均值差（Yi-Xi); X轴：对比仪器每 样本双份测定的均值（x)，以直线X=0作为水平中线。

d. Y轴：每个样本两台仪器每次测定的差（Yij-Xij); X轴：对比仪器每样本双份测 定的均值（x)，以直线X=0作为水平中线。

4. 目测线性关系

5. 检查方法间的离群点

a. 绝对值允许误差范围

b. 相对值允许误差范围

6?检查X测定范围是否足够宽 7?线性回归：

斜率b,y轴截距a的计算。

8?计算预计偏差及其可信范围。

c. 残量和标d.准误的计算；

e. 计算给定的医学决定水平；

(三)计算与核对标准

1. 通过作图直观地分析线性是否良好、偏差大小如何、有无离群点等初步印象。

2. 目测线性关系：观察两台仪器间的线性关系。

3?检查方法间的离群点可接受限为：4*E即：4*两台仪器间平均绝对差。

4?检查X测定范围是否足够宽的依据是以计算相关系数r，要求r彡0.975或r2彡 0.95.

5?线性回归是用统计学的方法评价回归图的相关性。

6. 可接受偏差大于预其偏差可信范围的上限，有97.5%的可能性，预期偏差小于可 接受偏差，说明比对的仪器测定的结果在可接受范围。反之为不可接受。

方法二、简易比对方法

1?首先选择一台本实验室内技术性能最好的仪器，该仪器使用配套的校准物定期校 正，，每天有质量控制系统监控，并参加室间质评活动，各项目均在可接受性能范围 之内。其他仪器分别与该仪器比较。

2.选择高、中、低浓度三份样本同时用各台仪器按常规样本测定的方法，测定其各 项参数，每份样本测定2次，求其均值。

3?计算与核对标准

[1] 计算：按PT计算方法计算偏倚。

PT计算公式：（确定仪器测定值-比对仪器测定值）/确定仪器测定值X100

[2] 标准：WBC

WBC

RBC

HBG

HCT

MCV

MCH

MCHC

PLT

PCV 4-5%

【评价结果】

1?用新鲜样本比对按NCCLS文件EP9-A方法，以众多的数据客观全面分析比对方法的 精密度、干扰、偏差、有效性、临床要求等。而简易比对方法仅是粗略的比对方法。 前者方法每半年一次，后者方法每月至少一次。

2?如不符合要求应检查原因，重复“操作步骤”和“计算和核对标准”重新比对。 3?仪器故障检修后也要重复“操作步骤”和“计算和核对标准”重新比对。

4.书写和保存评价报告，交科室存档。

___________________ 操作人员 ________ 部门主管 ____________ 质量负责人 姓名 8-10% 3-4% 3-4% 3-4% 4-5% 4-5% 4-5% 10-15% 【目的】

用于Sysmex KX-21N血细胞分析仪的标准操作程序。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出并报经下述人员批准签 字：专业主管、质控主管、科主任。

【开机程序】

1开机前的检查

[1] 试剂的检查：对每天要用的试剂进行检查，如量不够将试剂准备好备用，开封 后的试剂使作限期为：溶血素（STR0MAT0LYSER-WH)90天，稀释液（CELLPACK)60 天。

[2] 仪器的检查：检查管道、电线的连接。

[3] 废液的检查：主机左侧面的防止逆流容器和废液容器中若有废液积存须予以排 除。

[4] 打开主机前的罩子检查打印纸。

2?开机

[1] 打开主机右侧面的电源开关，打开与计算机相连的UPS电源，打开计算机主电源。

[2] 此时仪器自动进行检查、自动清洗、空白校验。仪器画面上出现（请稍等〕。

[3] 自动清洗、空白校验正常结束后，蜂鸣器会发出“笛”的声音，屏幕显示〔准备 测量〕，并显示空白校验的结果。

仪器允许空白值的范围：

WBC 0.3〔X103/uL〕以下；

RBC 0.02〔X106/uL〕以下；

HGB 0.1〔Xg/dL〕以下；

PLT 10〔X103/uL〕以下.

如果空白值超出允许范围，屏幕会出现（空白出错〕的信息，并有警告音响，在这 种情况下，先按〔C〕健，取消警告音，然后按下[HELP]将显示动作指示的画面， 再进行自动清洗。

【质控物监测】

在测量样本之前，先测定质控物，质控物在质控模式中进行测定。

1. 将质控物从冰箱中取出，置室温后充分混匀进行测定。

2. 将测定结果进行分析，质控物测定结果在允许误差范围内才能作病人样本测定(详 见

血细胞分析仪室内质控标准操作程序SOP文件）

【样本测定】

1?标本采集：常采用肘部静脉，肘部静脉不明显时可采用手背静脉或内踝静脉，位 于体表的浅静脉均可作为采血部位。婴幼儿可采用颈外静脉。采血姿势建议为坐位。 扎上止血带，时间最好不超过半分钟，用75%乙醇棉球消毒采血部位待干。用血常规 真空负压管抽血（内有EDTA-K2抗凝剂），抽完后立即混匀，防止标本凝固。

2?样本编号、登记、置混匀器上充分混匀。

3?选择全血模式测定：在“准备测量”状态下按下〔SAMPLE NO〕健，在样本号码光标 点闪处，以数字健输入样本号码，按下〔ENTER〕健。 4. 将试管塞取下，将吸液管插入样本中，按开始开关。此时屏幕显示“正在吸引”。 5. 蜂鸣器“笛笛”响两声之后，屏幕显示出“正在测量”，就可以将样本试管取下。此 时进行自动测量，测定完毕后屏幕显示“正在清洗”，测定结果显示在屏幕上，并自 动打印测定结果。此时屏幕显示“准备测量”，可进行下一个样本测定。

【结果审核】

1?审核打印结果的样本号与申请单上的编号是否一致。

2?对特别异常的结果要向病人了解病情，并用显微镜法复检。

3?对粒度分布检出异常时，要重新测定，必要时也用显微镜法复检。

(1) 粒度异常标记：

WL WBC-LD (下限鉴别线）的相对度数超出规定值

WU WBC-LD (上限鉴别线）的相对度数超出规定值

F1 中型白细胞下限鉴别线的相对度数超出规定值

F2 中型白细胞下限和上限鉴别线的相对度数超出规定值

F3 中型白细胞上限鉴别线的相对度数超出规定值

R1 RBC-LD (下限鉴别线）的相对度数超出规定值

R2 RBC-LD (上限鉴别线）的相对度数超出规定值

DW 分布幅不能算出

MP 有2个以上的峰值

PL PLT-LD (下限鉴别线）的相对度数超出规定值

PU PLT-LD (上限鉴别线）的相对度数超出规定值

AG 小于WBC-LD (下限鉴别线）的粒子数超出规定值

(2) 异常信息与处理方法

WL：溶血不全，出现有核红细胞，大血小板增多，血小板聚集，纤维蛋白的析出。

处理：清洗血细胞、确认血涂片标本。

RL：出现破碎红细胞，大血小板增多，血小板聚集。

处理：用手工法复检，确认血涂片标本。

PL:受冷球蛋白、破碎红细胞，白血病细胞的细胞质碎片等干扰。

处理：将标本加温后再检，用手工法再检，确认血涂片标本。

WU:溶血不全，出现幼稚白细胞，白细胞凝集，血小板呈卫星状。

处理：清洗血细胞、确认血涂片标本。

RU:受冷凝集素的干扰，有白细胞混入。

处理：将标本加温后再检，确认血涂片标本。

PU:大血小板增多，有破碎红细胞混入，冷球蛋白沉淀。

处理：用手工法复检，确认血涂片标本。

DW(RBC)：红细胞大小不均很明显。

处理：确认血涂片标本。

DW(PLT):有破碎红细胞混入，，血小板大小不均，受冷球蛋白等干扰。

处理：清洗血细胞、确认血涂片标本。

MP(RBC):受贫血治疗、输血的影响，出现多种大小的细胞群。

处理：确认血涂片标本。

MP(PLT)血小板凝集或低值血样。

处理：确认血涂片标本。

T1:出现CML等异常细胞，溶血不全。

处理：确认血涂片标本，清洗血细胞。

T2：出现CML等异常细胞，溶血不全，长时间放置血样。

处理：确认血涂片标本，清洗血细胞。

F1、F2、F3：出现CML等异常细胞，单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞的高 值血

样、，溶血不全，长时间放置血样。

处理：确认血涂片标本，清洗血细胞。

4?手工解析：当从测定结果的峰分析有干扰物引起假性增高或假性减低、或通过显 微镜计数法确认仪器测定受干扰物的影响时，可用手工解析重新测定。（例如小红细 胞干扰引起血小板假性增高）操作程序如下：

[1] 显示测量结果的屏幕时，按〔1〕健，选择〔1:手工解析〕，此时显示出手工 解析画面的屏幕菜单〔1：WBC 2：RBC 3：PLT〕。

[2] 用〔▲〕健和〔▼〕将光标移至需手工解析的项目处。按下〔ENTER〕健。

[3] 用〔<〕健和〔?〕将光标移至需手工解析的鉴别线处。按下〔ENTER〕健。 确定鉴别线选择位子，测量数据按新的鉴别线选择位子为基础进行再次计算。

[4] 再想改变鉴别线时可重复（2)-(4)的操作。

鉴别线更换结束后，按下〔SELECT〕健。

用〔▲〕健和〔▼〕将光标选择〔继续、确定、取消〕

继续：返回手工解析画面，可以继续进行手工解析。

确定：更新更换的内容，返回测量程序。

取消：不更新更换的内容，返回测量程序。

【试剂更换】

1?测定中试剂不足，仪器会自动停机屏幕上会显示出更换试剂的信息，按下〔HELP〕 [5] [6]

2.准备好新的试剂确认其在使作期内，打开新试剂容器的盖子。

3. 稀释液更换时，将吸引软管垂直插入新的试剂。

4. 溶血剂更换时，打开空试剂容器的盖子，垂直将软管拔出，将软管垂直插入新的 试剂中，拧紧盖子。

5. 试剂更换结束后按下〔1〕健，选择〔1：吸引试剂〕，试剂自动被吸引然后进行 空白校验，此时要确认没有发生空白错误才能进行样本测定。

6. 将更换试剂的内容写入试剂更换记录本。

【打印纸更换】

1?屏幕上会显示内载没有打印纸的信息，按下〔HELP〕，选择〔3：停止输出〕

2. 打开主机前面的罩子，将锁杆往上推取出剩下的纸管，装上新的打印纸，关上罩 子。

3?按下〔1〕健，打印内存中残留的数字。

【关机程序】

1. 在准备测量的状态下，按〔SHUTDOWE〕健，屏幕上出现□请吸引清洗液□信息 2?将清洗液置于吸引管中，按下开始开关，保持5秒钟后，移开清洗液。

3. 仪器自动关机，屏幕上显示□关机已结束请切断电源□关闭主机右侧面的电源开关。 4?关闭计算机电源。

5?关闭UPS电源。

注意：样本测量完后，关闭仪器电源之前必须执行关机，通过执行关机对检测 器及稀释管路进行清洗，一天结束后或至少24小时进行一次关机动作。

【仪器保养】

1?日保养项目：检测器及稀释管路的清洗、防止逆流容器的水量确认和抽水。 2?周保养项目：旋转阀（SBU)托盘的清洗。

3?月保养项目：废液容器的清洗、检测部的清洗。

4?每3个月保养项目：旋转阀（SBU)的清洗。

5?必要时的保养项目：自动清洗、清洗糟的清洗、WBC/RBC检测器细孔的清洗、废液 容器的更换。 6. _____________________________________________________________ 记保养日期及项目。 _______________________________________________________

操作人员 部门主管 质量负责人"

姓名 ****** ****** ***** 日期 **年**月**日 录

【目的】

保证检验结果的准确性和可比性。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准 签字：专业主管、质控主管、科主任。

【室内质控的重要性】

是临床实验室全面质量管理重要组成部分，也是实验室认可的重要依据。

【室内质控的适用性】

1. 连续监测和评价本室工作质量，评价结果的可信性。

2. 排除质量环节中所有阶段导致不满意的原因。

3. 反映检验操作中所有步骤的工作情况，包括从收集标本到结果的发出全过程。提 高常规测定工作的批间和批内标本检测结果的一致性。

【室内质控的方法】

L-J质控图和Westgard多规则质控方法。

【室内质控的准备程序】

开展室内质控前的准备工作

1.培训实验室工作人员，每个人都应对质控的重要性、基础知识、实验方法有较充 分的了解。并在实际工作中不断进行培训提高。

2?建立一套完整的标准操作规程。（SOP文件）

3?仪器须检定与校正其校正品应能溯源到参考方法或/参考物质，确立校正频度。

4. 质控品的选择、应用与保存。

【质控图的限值设定与规则】

1.质控图控制限的计算和设定

[1] 准备二个不同浓度的质控物。

[2] 先将第1天和第2天测定的数据计算均数和标准差，并将数据设置在质控图中。

[3] 再连续测定8天，将10天的数据计算均数和标准差，计算均数+2SD和-2SD的数值， 计算均数+3SD和-3SD的数值，将数据重新设置在质控图中。

[4] 在重新进行质控设定时须清除质控文件内质控数据：在质控屏面上选择〔3: 全部消除〕。

3使用〔〕健和〔?〕选择〔是〕。再使用〕健和〔?〕健选择〔执 行〕。按下〔ENTER〕健。

[5] TARGET (目标）值/LMIT (限度）值的设定：在质控屏面上选择〔2〕健，选 择〔2：设定〕用〔▲〕健和〔▼〕健来移动光标，选择Lot.No.(批号）、Ext.date

(有效期限）、管理项目。管理项目用〔<〕健和（?〕健移动光标选择TARGET (目 标）值和LI (限度）值，按下〔ENTER〕健设定内容被确认，光标移至下一个项目， 设定结束后按下〔SELECT〕健，再使用〔<〕健和〔4〕健选择〔确定〕，按下〔ENTER〕 健。为L-J质控图。

[6] 在质控图屏面的所示数据：

FILE NO.：显示质控图的文件号码；

Lot. NO.：质控文件中所设定的批号；

N：当前正在绘制的质控数据的个数。

质控项目：质控数据的管理图分成多个页面表示 质控图屏面〔1/3〕：WBC、RBC、HGB 质控图屏面〔2/3〕：HCT、MCV、MCH 质控图屏面〔3/3〕：MCHC、PLT LIMIT(UL)：质控界限值的上限，测量值超出此界限为质控异常。

LIMIT(LL)：质控界限值的下限，测量值超出此界限为质控异常。

目标值：质控的目标值。

DATD：下线光标所示的图的质控数据。

MEAN：当前所在绘制中的质控数据的平均值。

下线光标：使用〔<〕健和〔?〕，可以左右移动下线光标所示的图的质控 数据和测量日期将被表示在屏面上。

2?质控规则

U：为警告规则，提示有一水平质控值超出X±2S，发出警告；

U：失控规则，提示有一水平质控值超出X±3S，提示随机误差增大造成的失 控；

2；b：失控规则，是系统误差，有二种表现

①同一个水平的质控品连续2次控制值同方向超出X+2S或X-2S限值；

②在1批检测中，2个水平的质控值同方向超出X+2S或X-2S限值；

R4S：失控规则，在1批检测中，1个水平控制品的控制值超出X+2S限值，另1个 水

平控制品超出X-2S限值，提示随机误差增大造成的失控；

4is：失控规则，有连续4次的控制值超出X+1S或X-1S限值，是系统误差，有二 种

表现

①1个水平控制品连续4次控制值超出X+1S或X-1S限值；

②2个水平控制品连续2次控制值同方向X+1S或X-1S限值；

10x：失控规则，有连续10次控制值在均数的一侧，是系统误差，有二种表现

①1个水平的控制品连续10次的控制值在均值的一侧；

②2个水平的控制品连续5次的控制值在均值的一侧；

3?室内质控的精密度要求

HBG、RBC： 3-4%

PCV、MCV、MCH、MCHC ： 4-5%

WBC： 8-10%

PLT： 10-15%

【室内质控的操作程序】

1?质控样本的准备

[2]测试环境、仪器、试剂的要求 室温：

20〖25 湿度：<80%。

仪器空白值在允许范围内；

试剂：所用稀释剂、溶血剂和清洁剂都为仪器配套产品

[2]质控样品的准备：

1] 从冰箱中取出质控物，放置至室温（约30分钟），勿摇动。

2] 将质控物瓶口朝上置双手掌心，双手来回搓动8次。

3] 颠倒小瓶，使瓶口朝下置于掌心，来回搓动8次。

4] 重复②和③步骤8次(计2分钟左右)或置混匀器上混匀。

5] 瓶底朝上，确认瓶底无沉积物，说明已充分混匀。

2. 质控样本的测定

[1] 在准备测量的状态下，按下〔SELECT〕健，使用〔▲〕健和〔▼〕选择〔2： 质控〕。

[2] 按下〔1〕健，选择〔1：质控测量〕，确认当前状态为质控测量的准备状态。

[3] 将质控样本充分混匀后，取下质控样本试管塞，将吸液管放进质控样本的容器 中，按开始开关，进行测定，此时屏幕上显示〔正在吸引〕。

[4] 当屏幕上显示〔正在测量〕时，将质控样本的容器移开，并将盖子塞上。

[5] 在〔Data〕栏中显示测量结果，〔判定〕栏中显示与质控数据的比较结果。

[6] 测量结果由三个画面组成，可用〔<〕健和〔?〕选择页面。

P1.CBCB项目：WBC、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、PLT。

P2.WBC分析画面:WBC、LYM%、MXD%、NEUT%、LYM#、MXD#、NEUT#、W-SMV、 W-LMY。 P3.RBC/PLT分析画面：RBC、MCV、RDW-SD、RDW-CV、PLT、PDW、MPV、P-LCR。

[7] 质控异常信息：在〔判定〕栏中表示〔+〕或〔-〕。

[8] 分析质控结果后按数字健：

〔1：0K〕：质控数据被确定，图形将进入质控图，此质控数据被存储。 〔2：NG〕：消除质控结果，再次回到等待测量状态。

〔3：打印〕：测量结果的打印须在数据确定之前有效，按下〔1：0K〕和〔2： NG〕健数据确认后，就不能打印测量结果。

[9] 质控品测定□在控□后，才能测定病人样本。

3?失控的原因与处理

[1] 检查质控图或失控的规则，确定误差的类型。

系统误差（或偏倚）的失控：每天的质控值有定向的漂移或倾向性，并且随 时间在增大，逐渐形成失控。

随机误差的失控：表现较突然，失控的质控值相对于均值的离散度比往常大。

[2] 误差类型和失控原因的关系

氺造成系统误差的原因：使用不同批号的试剂、不同批号的校准品、校正品 过期或保存不妥造成校准值变化、校正值设定错误、试剂的质量或由于使用 不当引起试剂变质、吸样器或稀释器校准或调试错误、仪器的故障、检验人 员的变动等。

来造成随机误差的原因：试剂瓶或试剂管道中有气泡、电源电压不稳、检验 人员操作不熟练、重现性差等。

*在检测中偶尔出现的不恒定因素。

[3] 自动分析仪多项目检测系统常见的原因

如果失控仅1个项目，在确定误差性质后，按照不同误差可能具有的问题去寻 找原因。

如果多个项目同时出现失控问题，应从出现问题的共性上考虑。

[4] 与近期变化有关的原因

[5] 确认解决问题，作好记录

找出原因，经纠正后须重测定质控品，以?在控?来确认问题解决与否，在失 控时测定的病人样本也须重测，应将出现的质控事件和纠正过程形成文件。

4.作质控日记。

5?定期随机抽查病历，综合分析病人的诊断、疗效与检验桔果的相关性。

6?经常征求临床意见，了解检验结果与诊疗事件的相关性，使检验结果得到临床的 认可。

7.参加部、省临检中心的室间质评活动，保证检验结果的准确性和可比性。

___________________操作人员_________ 部门主管 ____________ 质量负责人 姓名 XXX XXX XXX

日期 X X年X月X E

【目的】

了解本实验室测定结果的准确性和实验室所处的水平。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准 签字：专业主管、质控主管、科主任。

【室间质评的组织机构】

卫生部临床检验中心或省临床检验中心。

【室间质评的重要性】

是临床实验室全面质量管理重要组成部分，也是实验室认可的重要依据。

【室间质评的适用性】

1.确定某个实验室进行检测或测量的能力，2.以及监控实验室的持续能力；

3. 识别实验室中的问题并制定相应的补救措施；

4. 确定新的检测和测量方法的有效性和可比性、并对这些方法进行相应的监 控；

5. 增加实验室用户的信心；

6. 识别实验室间的差别；

【室间质评的测定原则】

室间质评样本测定时须与病人样本同样操作，不得特殊对待，并且不能与其他 医院核对测定结果，要如实的反映实验室的真实工作状况和水平。

【室间质评活动程序】

1.在建立实施室内质控体系的基础上，参加室间质评活动。

2?收到质控物后认真检查核对，如有破损、缺失、标本编号错误等及时向科室及映， 以便及时与部临检或省临检中心取系，及时补寄。

3?仔细阅读?室间质评的通知和要求，由室负责人将质评样本保存在2°C-8°C冰

箱， 妥善保管好报表和项目编码。

4?质评样本测定程序：

[1]测试环境、仪器、试剂的要求

室温：20〖25°C。

湿度：〈80%。

试剂：所用稀释剂、溶血剂和清洁剂都为仪器配套产品 质控品：为仪器配套产

品，并在使用效期内，同时无变质或污染 仪器：仪器必须有质量控制保证。

[2] 质评样品的准备：

1] 按测定日期从冰箱中取出参评物，放置至室温（约30分钟），勿摇动。

2] 将参评物瓶口朝上置双手掌心，双手来回搓动8次。

3] 颠倒小瓶，使瓶口朝下置于掌心，来回搓动8次。

4] 重复②和③步骤8次(计2分钟左右）。

5] 瓶底朝上，确认瓶底无沉积物，说明已充分混匀。

6] 将5份样本编号。 或者：

1] 按测定日期从冰箱中取出参评物，放置至室温（约15分钟），勿摇动。

2] 然后将质评样本置混匀器上混匀2-3分钟。

3] 将5份样本编号。

[3] 质评样品的测定：

1] 选择全血模式测定：在“准备测量”状态下按下〔SAMPLE NO〕健，在样本号码 光标点闪处，以数字健输入样本号码，按下〔ENTER〕健。

2] 将试管塞取下，将吸液管插入样本中，按开始开关。此时屏幕显示“正在吸引”。 3] 蜂鸣器“笛笛”响两声之后，屏幕显示出“正在测量”，就可以将样本试管取下。 此时进行自动测量，测定完毕后屏幕显示“正在清洗”，测定结果显示在屏幕上，并 自动打印测定结果。此时屏幕显示“准备测量”，可进行下一个样本测定。

4] 每份样本平行测2次，取均值。

[4] 填写报表

1] 填写报表时应按要求逐项填写，字迹清晰整洁。

实验室编码：116XXX；

仪器编码：100710 稀释液编码：100101 溶血液编码：100201 清

洗液编码：100301

2] 填写完后再次核对，以防笔误、样本号顺序错误等。

3] 然后由测定者、室负责人、科主任签字。

[5] 结果存档

填写完后复印，一份寄出，一份存档，以备核查。

【评价方法】

1.评价按仪器分组统计，共分七组：

组号 组名 仪器种类

第1组 Sysmex (1) SF-30000, K-series, KX-21

第2组 Sysmex (2) 除第1组外的Sysmex仪器

第3组 Coulter Coulter系列各型号仪器

第4组 Abbott Abbott系列各型号仪器

第5组 Swalab AC Swalab AC系列各型号仪器

第6组 Celltac Celltac系列各型号仪器

第7组 Bayer Bayer系列各型号仪器

第8组 Others 其它仪器和手工方法

2?统计方法

[1] 首先计算出各组的均值和SD。

[2] 剔除均值±3SD范围以外的回报数据后分别重新计算各组的均值和SD。

[3] 重复（2)中的过程，直至所有的回报结果数据都在±3SD的范围内，即剔除均 值±3SD范围以外数据后得到的均值和SD分别称为加权均值和加权SD。

[4] 分别用各组的加权均值为靶值，计算各批号质评物测定结果与靶值的偏差。计 算公式：偏差％(PT值）=(我室结果-本组靶值）/本组靶值X100%

3?评价标准：（可接受性能范围）

项目 允许范围

WBC 靶值±15%

RBC 靶值±6%

Hgb 靶值±7%

Hct 靶值±6%

Plt 靶值±25%

MCV 靶值±7%

MCH 靶值±7%

MCHC 靶值±7%

4?单项PT值评分标准

每一项目每一批号结果在允许范围内时，测定结果合格，得分为100%，若在允 许范围外时，测定结果不合格，得分为0%。单个项目的得分计算公式为：

该项目的及格结果数 该项目的

总的测定样本数

合格：该项目的测定成绩彡80%; 不合格：该项目的测定成绩<80 %。

5.总项目的PT值评分标准 总

项目的计算公式为：

总项目的及格结果数

总项目的总的测定样本数 % %

合格：总项目的测定总分彡80%; 不合格：总项目的测定总分<80%。

6?部临检中心给参加实验室发证书的规定

合格证书：每年每个专业参加2次或3次以上，不得缺席，每次有五个调查样本。每 次

总项目的测定总分彡80%;颁发合格证书。

参加证书：发合格证书的标准，有一点不符合要求的均颁发参加证书。

【质评返馈分析】

1.收到返馈报告后要及时分析，检查各项目的准确程度、有无系统性误差、有无不 合格项目，对不合格项目需要分析失误的原因。

例如：WBC(109)/L质评结果返馈 例1： 样本编你室结果 靶偏倚（％) 允许范围 你室

号 值 得分 200311 5.0 5.-7.41 4.6-6.2 100

4 200312 5.2 5.4.00 4.2-5.8 100

0 200313 6.9 7.-2.28 6.0-8.2 100

1 200314 5.3 5.0.00 4.5-6.1 100

3 200315 5.4 5.-1.82 4.7-6.3 100

5 成绩 100%

WBC可接受性能范围为：15%。此次测定结果均在允许范围内，并

基本上在 靶值两侧分布，因此准确度为满意。

样本编你室结果 靶偏倚允许范围 你室得

号 值 （％) 分 200311 4.7 5.-12.96 4.6-6.2 100

4 200312 4.4 5.-12.00 4.2-5.8 100

0 200313 6.0 7.-14.08 6.0-8.2 100

1 200314 4.6 5.-13.21 4.5-6.1 100

3 200315 4.9 5.-10.94 4.7-6.3 100

5 成绩 100%

WBC可接受性能范围为：15%。此次测定结果虽然均在允许范围内，但偏倚 均>10%以上，在靶值的下限，出现系统性误差，应结合室内质控，结合上次室 间质评情况综合分析，如果室内质控结果也在靶值的下限或上次室间质评情况 也是系统性偏低，应该分析误差原因，必要时进行校正。

例3

样本编你室结果

号 200311 6.3

200312 5.7

200313 8.5

200314 6.0

200315 6.6

靶偏倚（％) 值 5.16.67 4 5.14.00 0 7.19.72 1 5.13.21 3 5.20.00 5 允许范围 4.6-6.2 4.2-5.8 6.0-8.2 4.5-6.1 4.7-6.3 成绩 你室得分（％0 ) 100 0 100 0 40%

WBC可接受性能范围为：15%。此次总成绩为40%分，测定结果不准确，有 三个样本超出允许范围的高限，有二个样本在靶值的上限。应该分析误差原因， 进行校正。 例4

允许范你室得

围 4.6-6.2 0

4.2-5.8 100

6.0-8.2 100

4.5-6.1 100

4.7-6.3 100

成绩 80%

WBC可接受性能范围为：15%。此次测定结果总成绩为80%分，有一

个样本

超出

允许范围的高限（此分样本也需分析原因），其它四个样本并基本上在靶值两侧 分布，因此准确度也为满意。

2.不可接受结果的原因可分为以下几个类形：

[1]书写误差：

此类误差大致是：不正确的报告单位或小数点位数错误。

在报告单上填写仪器、方法、试剂等编码错误。样本编你室结果 号 200311 6.8 200312 5.2 200313 6.9 200314 5.3 200315 5.4 靶值 5.4 5.0 7.1 5.3 5.5 偏倚（％) 25.92 4.00 -2.28 0.00 -1.82

测定结果没有正确地从仪器、磁带、读数窗口抄写到报告单上（如标本的结 果以相反的顺序抄写或考贝）

[2] 方法学问题：

仪器功能检查（如温度、空白读数、压力）未按要求执行，性能指标不在可接 受范围内。未能适当地执行仪器的定期维护。

不正确的仪器校准。

标准和试剂不恰当的复溶和保存或超出有效期而疏忽地在使用。

仪器未调好。

仪器数据处理功能问题。

厂家试剂/标准，或生产厂家规定的仪器设置问题。（实验室需要与厂家联系来 评价此类问题。）

标本的携带污染率问题。

自动吸样器没有校准到可接受的精密度和准确度。

方法的灵敏度低限或高限结果的不精密度、

仪器问题质量控制未能反映出来---在有效期内未检测质控物或不恰当的保存、 在有关的分析浓度没有质控物监测。

结果不在仪器/试剂线性范围。

仪器管道堵塞。

[3] 技术问题：

室间质评物的不恰当的复溶或复溶后检测延迟。

测定时样本放置顺序不对。

当天的质控结果失控但仍发出报告。

质控数据虽在可接受限之内，但检测显示出呈趋势性。

不适当的质控限/规则。（如果可接受的质控范围太宽，结果落在可接受的范围 内的概率增加，同样会超过可接受的室间质评限）

没有按实验室的规范程序操作。

[4] 室间质控品的问题

基质效应：有些仪器/方法的性能会受到EQA样本基质的影响。导致不可接受的 结果。

非均匀性试验物（如不恰当的混匀，或质评物不一致的前处理等）

细菌污染或溶血。

[5] 室间质量评价的问题 分组不

适当

不适当的靶值

不适当的评价区间

EQA组织者不正确的数据输入。

[6] 经调查后无法解决的问题

当以排除了所有的可识别的误差时，单个不可接受结果可能是由于随机误差， 特别是当重复分析结果是可接受时，在这种情况下不应采取纠正措施。

如果两个或多个结果是不可接受的，且两个结果偏向一侧，则更可能的是系统 误差。

【目的】

用于白细胞计数的标准操作程序。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出并报经下述人员批准签 字：专业主管、质控主管、科主任。

【方法原理及特点】

方法原理：电阻抗法。

方法特点：进行白细胞计数及对白细胞进行三分群，但不能对单核细胞、嗜酸性粒 细胞、嗜碱性粒细胞进行分类。

【仪器型号】

Sysmex KX-21N

【参考值】

成人(4-10)109/L 新生儿（15-20) 109/L 6个月-2岁（11-12)109/L 【开机程序】 1开机前的检查

[1] 试剂的检查：对每天要用的试剂进行检查，如量不够将试剂准备好备用，开封 后的试剂使作限期为：溶血素（STROMATOLYSER-WH)90天，稀释液（CELLPACK)60 天。

[2] 仪器的检查：检查管道、电线的连接。

[3] 废液的检查：主机左侧面的防止逆流容器和废液容器中若有废液积存须予以排 除。

[4] 打开主机前的罩子检查打印纸。

2?开机

[1] 打开主机右侧面的电源开关，打开与计算机相连的UPS电源，打开计算机主电源。

[2] 此时仪器自动进行检查、自动清洗、空白校验。仪器画面上出现〔请稍等〕。

[3] 自动清洗、空白校验正常结束后，蜂鸣器会发出“笛”的声音，屏幕显示〔准备 测量〕，并显示空白校验的结果。仪器空白值须在允许范围内。

【质控物监测】

在测量样本之前，先测定质控物，质控物在质控模式中进行测定。

1. 将质控物从冰箱中取出，置室温后充分混匀进行测定。

2. 将测定结果进行分析，质控物测定结果应在允许误差范围内，才能作病人样本测 定（详见血细胞分析仪室内质控标准操作程序SOP文件）

【样本要求】

标本采集：常采用肘部静脉，肘部静脉不明显时可采用手背静脉或内踝静脉，

位于体表的浅静脉均可作为采血部位。婴幼儿可采用颈外静脉。采血姿势建议为坐 位。扎上止血带，时间最好不超过半分钟，用75%乙醇棉球消毒采血部位待干。用血 常规真空负压管抽血（内有EDTA-K2抗凝剂），抽完后立即混匀，防止标本凝固。 【样本测定】 1?样本编号、登记、置混匀器上充分混匀。

2?选择全血模式测定：在“准备测量”状态下按下〔SAMPLE NO〕健，在样本号码光标 点闪处，以数字健输入样本号码，按下〔ENTER〕健。

3. 将试管塞取下，将吸液管插入样本中，按开始开关。此时屏幕显示“正在吸引”。

4. 蜂鸣器“笛笛”响两声之后，屏幕显示出“正在测量”，就可以将样本试管取下。此 时进行自动测量，测定完毕后屏幕显示“正在清洗”，测定结果显示在屏幕上，并自 动打印测定结果。此时屏幕显示“准备测量”，可进行下一个样本测定。

5?手工解析：当从测定结果的峰分析有干扰物引起假性增高或假性减低、或通过显 微镜计数法确认仪器测定受干扰物的影响时，可用手工解析重新测定。

[1] 显示测量结果的屏幕时，按〔1〕健，选择〔1：手工解析〕，此时显示出手工 解析画面的屏幕菜单〔1：WBC 2：RBC 3：PLT〕。

[2] 用〔▲〕健和〔▼〕将光标移至需手工解析WBC处。按下〔ENTER〕健。

[3] 用〔▲〕健和〔▼〕将光标移至需手工解析的鉴别线处。按下〔ENTER〕健。 确定鉴别

线选择位子，测量数据按新的鉴别线选择位子为基础进行再次计

算。

[4] 想改变鉴别线时可重复（2)-(3)的操作。

[5] 鉴别线更换结束后，按下〔SELECT〕健。

【白细胞直方图】

在35-450fL范围内将血细胞分为三群。正常白细胞直方图的左侧峰又高又陡， 跨越35-93fL，定为淋巴细胞峰（小细胞群），以成熟小淋巴细胞为主。最右侧峰又 低又宽，跨越160-450fl,定为中性粒细胞峰（大细胞群）以中性粒细胞为主，包括 杆状核细胞和晚幼粒细胞，左右两峰之间较平坦区，定为单个核细胞区（中间细胞 群）主要以单核细胞为主，也含有嗜酸、嗜碱性粒细胞及白血病细胞等。

【结果审核】

1. 审核打印结果的样本号与申请单上的编号及是否一致。

2. 审核申请单的检验项目与测定的项目是否一致。

3?对特别异常的结果要向病人了解病情，并用显微镜法复检后才能发报告。

4?审核有否报警信号，如有复检后才能发报告。

5?检验报告单须有测定者和审核者签章后才能发出。

【临床意义】

1?生理性增加新生儿、运动、疼痛、月经期、受寒、妊娠、分娩、阵发性心动过 速、阳光或紫外线照射、抽搐、恶心、呕吐、麻醉等。

2?病理性增加类白血病、白血病急性化脓性细菌感染、急性溶血、急性失血、单 核细胞增多症、淋巴细胞增多症、真性红细胞增多症、腮腺炎、病毒性肝炎、淋巴 瘤、组织坏死、手术后、肿瘤转移、药物中毒、代射性酸中毒、过敏等。

3?减少伤寒、副伤寒、斑疹伤寒、兔热病、布氏杆菌热、流感、麻疹、风疹、登 革热、

传染性肝炎（亦可增多）、疟疾、过敏性休克、系统性红斑狼疮、粟粒性结核、 败血症、重症细菌感染、恶液质、放射治疗、肿瘤化疗。

4?造血系统障碍所致减少恶性贫血、非白血性白血病、再生障碍性贫血、脾功能 亢进、戈谢（Gaucher)病、Felty综合症、Chediak-Higashi综合症、阵发性睡眠性 血红蛋白尿症等。

【质量保证】

1.白细胞计数的可接受性能为±15%。

2?对特别异常的结果须用手工计数复检，手工计数应用高精度的微量吸管，加液器， 计算盘等。

3?样本须在6小时内测定完毕。

4?报警信号的处理

[1] WL;溶血不全，出现有核红细胞，大血小板增多，血小板聚集，纤维蛋白的 析出。

处理：清洗血细胞、确认血涂片标本。

[2] WU：溶血不全，出现幼稚白细胞，白细胞凝集，血小板呈卫星状。

处理：清洗血细胞、确认血涂片标本。

[3] T1：出现CML等异常细胞，溶血不全。

处理：确认血涂片标本，清洗血细胞。

[4] T2：出现CML等异常细胞，溶血不全，长时间放置血样。

处理：确认血涂片标本，清洗血细胞。

[5] F1、F2、F3：出现CML等异常细胞，单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞 的高

值血样、，溶血不全，长时间放置血样。

处理：确认血涂片标本，清洗血细胞。

5.直方图上白细胞计数值的异常信息

[1] 当出现红细胞溶血不全时（WL报警），在白细胞直方图上，WBC低鉴别线与直 方图曲线的交点位置异常高，可通过血样稀释、或用CELLPACK对血样中的血浆进 行置换（清洗细胞）、或用较强烈溶血剂的仪器进行测定。

[2] 当出现白细胞凝集时，直方图上可见三峰分布混乱，在超出250fL的区域也有 颗粒存在可以引起白细胞计数假性减低。可将血样加温，用生理盐水等清洗，消 除白细胞凝集。

[3] 当出现有核红细胞的影响时，红细胞与小白细胞之间的低谷位置上升，并有 WL报警，有核红细胞几乎全被当作白细胞计数。可以引起白细胞计数假性增高， 因此必须按下式进行校正：

校正白细胞计数值=KX-21白细胞计数值X100/(100+有核红细胞数）

有核红细胞数：100个白细胞中的有核红细胞数

[4] 当出现血小板聚集时，WBC直方图上，Ghost区和SCR之间的鉴别线与直方图的 交点位置很高，同时有WL报警信号，可使白细胞假性增高，需重新采血测定。

[5] 当CML时WBC直方图上，在MCR到LCR之间找不到正常状态下的波谷，说明出现 多种大小不一的白细胞。须作涂片检查。

6?冷凝集现象、检出纤维蛋白均可使白细胞计数值产生正误差；小淋巴细胞可使白 细胞计数值产生负误差；不恰当的溶血剂作用可使白细胞计数值产生正的或负的 误差。

7?仪器安装、使用须规范，开展室内质控和参加室间质评。 日 期 ****年**月**日

【目的】

用于红细胞计数的标准操作程序。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出并报经下述人员批准签 字：专业主管、质控主管、科主任。

【方法原理及特点】

方法原理：电阻抗法。

方法特点：进行红细胞计数及观察红细胞的分布情况。

【仪器型号】

Sysmex KX-21N

【参考值】

男性：（4.4〖5.7)X1012/L； 女性：（3.8〖5.1)X1012/L；

新生儿：（6.0〖7.0)X1012/L； 儿童（4.0〖5.2)X1012/L。

【开机程序】

1. 开机前的检查

[1] 试剂的检查：对每天要用的试剂进行检查，如量不够将试剂准备好备用，开封 后的试剂使作限期为：溶血素（STROMATOLYSER-WH)90天，稀释液（CELLPACK)60 天。

[2] 仪器的检查：检查管道、电线的连接。

[3] 废液的检查：主机左侧面的防止逆流容器和废液容器中若有废液积存须予以排 除。

[4] 打开主机前的罩子检查打印纸。

2?开机

[1] 打开主机右侧面的电源开关，打开与计算机相连的UPS电源，打开计算机主电源。

[2] 此时仪器自动进行检查、自动清洗、空白校验。仪器画面上出现〔请稍等〕。

[3] 自动清洗、空白校验正常结束后，蜂鸣器会发出“笛”的声音，屏幕显示〔准备 测量〕，并显示空白校验的结果。仪器空白值须在允许范围内。

【质控物监测】

在测量样本之前，先测定质控物，质控物在质控模式中进行测定。

1?将质控物从冰箱中取出，置室温后充分混匀进行测定。

2. 将测定结果进行分析，质控物测定结果应在允许误差范围内，才能作病人样本

测 定（详见血细胞分析仪室内质控标准操作程序SOP文件）

【样本要求】

标本采集：常采用肘部静脉，肘部静脉不明显时可采用手背静脉或内踝静脉， 位于体表的浅静脉均可作为采血部位。婴幼儿可采用颈外静脉。采血姿势建议为坐 位。扎上止血带，时间最好不超过半分钟，用75%乙醇棉球消毒采血部位待干。用

血

常规真空负压管抽血（内有edta-k2抗凝剂），抽完后立即混匀，防止标本凝固。 【样本测定】

1?样本编号、登记、置混匀器上充分混匀。

2?选择全血模式测定：在“准备测量”状态下按下〔SAMPLE NO〕健，在样本号码光标 点闪处，以数字健输入样本号码，按下〔ENTER〕健。

3. 将试管塞取下，将吸液管插入样本中，按开始开关。此时屏幕显示“正在吸引”。

4. 蜂鸣器“笛笛”响两声之后，屏幕显示出“正在测量”，就可以将样本试管取下。此 时进行自动测量，测定完毕后屏幕显示“正在清洗”，测定结果显示在屏幕上，并自 动打印测定结果。此时屏幕显示“准备测量”，可进行下一个样本测定。

5?手工解析：当从测定结果的峰分析有干扰物引起假性增高或假性减低、或通过显 微镜计数法确认仪器测定受干扰物的影响时，可用手工解析重新测定。

[1] 显示测量结果的屏幕时，按〔1〕健，选择〔1：手工解析〕，此时显示出手工 解析画面的屏幕菜单〔1：WBC 2：RBC 3：PLT〕。

[2] 用〔▲〕健和〔▼〕将光标移至需手工解析RBC处。按下〔ENTER〕健。

[3] 用〔▲〕健和〔▼〕将光标移至需手工解析的鉴别线处。按下〔ENTER〕健。 确定鉴别

线选择位子，测量数据按新的鉴别线选择位子为基础进行再次计

算。

[4] 想改变鉴别线时可重复[2]-[3]的操作。

[5] 鉴别线更换结束后，按下〔SELECT〕健。

【红细胞直方图】

仪器在36-360fL范围内分析红细胞，横坐标表示红细胞体积，纵坐标表示不同 体积红细胞出现的频率。正常红细胞主要分布在50-200fL范围内，直方图上，可见 两个细胞群，从30-125fL区域有一个几乎两侧对称、较狭窄的正态分布曲线，主峰 右侧约分布在125-200fL区域的细胞，为大红细胞和网织红细胞。红细胞体积发生变 化，直方图峰可左移或右移，或出现双峰。

【结果审核】

1. 审核打印结果的样本号与申请单上的编号及是否一致。

2. 审核申请单的检验项目与测定的项目是否一致。

3?对特别异常的结果要向病人了解病情，同时作HBG、MCV、MCH、MCHC的相关分析。 4?审核有否报警信号，如有复检后才能发报告。

5. 检验报告单须有测定者和审核者签章后才能发出。

【临床意义】

多种原因可造成红细胞生成和破坏的平衡失调，引起贫血和红细胞增多症。

1?生理性减少见于妊娠后期、6个月至2岁的婴幼儿等。

2?相对性增多主要因血浆容量减少所致，见于脱水、呕吐、腹泻、多尿、多汗、 大面积烧伤、吸烟、高血压、肥胖等。

3?病理性减少造血原料不足、造血功能障碍、红细胞破坏过多或失血所引起的各 种贫血。 4?代偿性增多主要见于缺氧、新生儿、高原环境、一氧化碳中毒、严重肺气肿、 肺源性心脏病、先天性心脏病、心衰等。

5?绝对性增多克隆真性红细胞增多，非克隆性真性红细胞增多，与促红细胞生成

素产生过多有关，见于肾癌、肝细胞、雄激素分泌细胞肿瘤、肾囊肿、肾盂积水、 肾移植、小脑血管瘤、子宫肌瘤。

6.正常人和各型贫血时，红细胞平均参考值见下表。

平均值 大红细胞性贫血 正红细胞性贫血 单纯小细胞性贫血 小红细胞低色素性

贫血

MCV (fl)

MCH(pg)

MCHC(g/L) 320〖360 310〖370 310〖370 300〖370 240〖300

82 〖95 100〖160 80 〖100 72 〖80 50 〖80 27 〖31 35 〖50 27 〖35 21 〖26 12 〖30

7?相关项目及直方图对贫血的诊断

有时形态学检查并不明显，而相关数据则显示出来

[1] MCV、MCH、MCHC值低，RDW值高，提示因小细胞低色素性贫血而呈红细胞大小不

等。

等。

[2] 当小细胞低色素性红细胞，但为轻度贫血，红细胞数增加、RDW值低的特征，可

怀疑为轻度地中海贫血。 [3] CML发展过程中的大细胞性贫血，RBC、HBG、HCT、均低，MCV增大、而MCH、MCHC、 RDW则正常。同时在WBC直方图上，在MCR到LCR之间找不到正常状态下的波谷，说明 出现多种大小不一的白细胞。

[4] 缺铁性贫血的治疗观察：当采用自身输血和铁剂并用治疗法，直方图则提示有 正细胞性红细胞出现，并可出现双峰，说明治疗有效，如直方图中红细胞山形高说 明疗效更明 【质量保证】

1.红细胞计数的可接受性能为±6%。

2?作手工法复检时，所用的微量吸管、计算盘、吸管、稀释器须精度准确。 3.红细胞在一天时间内有波动，上午7时为高峰，随后下降。

4?采血部位不同结果有影响，静脉血比皮肤采血法的结果低10%-15%。 5?仪器安装、使用须规范，开展室内质控和参加室间质评。 6.异常信息与处理方法 RL：出现破碎红细胞，大血小板增多，血小板聚集。

处理：用手工法复检，确认血涂片标本。

PL：受冷球蛋白、破碎红细胞，白血病细胞的细胞质碎片等干扰。

处理：将标本加温后再检，用手工法再检，确认血涂片标本。 RU：受冷凝集素的干扰，有白细胞混入。

处理：将标本加温后再检，确认血涂片标本。

PU：大血小板增多，有破碎红细胞混入，冷球蛋白沉淀。

处理：用手工法复检，确认血涂片标本。

DW(RBC)：红细胞大小不均很明显。

处理：确认血涂片标本。

MP(RBC)：受贫血治疗、输血的影响，出现多种大小的细胞群。

处理：确认血涂片标本。

7.直方图上红细胞计数值的异常信息

[1] 当出现有核红细胞时，红细胞直方图RDW增大，有RL报警，同时在白细胞直方图 中红细胞Ghost与小白细胞之间的低谷的位置上升。须作血涂片检查确认。

[2] 当RDW增大提示有多种大小的红细胞出现。须与RBC直方图作相关分析，RBC直方 图显示分布较宽。

[3] 当RBC直方图显示以小细胞性红细胞为主，同时有大小不一的红细胞，须作涂片 检查，确认红细胞形态。（检查畸形红细胞）

[4] 当RBC、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDW显示异常值时，并报警RU*，同时直方图上 也能观察到一低峰，此时应考虑为冷凝聚样本，可先涂片确认是否冷凝聚样本，如 是冷凝聚将样本加温，凝块消失后重新测定，随之各参数可恢复正常。 8?分裂细胞、凝集现象可使红细胞计数值产生负误差；巨血小板可使红细胞计数值 产生正误差；仪器运行异常可使红细胞计数值产生正误差和负误差。

姓

日

名 期 操作人员 ****** ****年**月**日 部门主管 **** 质量负责人 ********

【目的】

指导血沉的测定。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签 字：专业主管、质控主管、科主任。

【方法原理】

魏氏法（Westergren法）

【实验器材】

1.抗凝剂：109mmol/L(32g/L)枸椽酸钠溶液。

2?真空负压管：内含0.4ml枸椽酸钠抗凝剂及采血针。

3?血沉管和血沉架。

【标本要求】

静脉采血，血与抗凝剂的比例为4：1，采血后立即混匀。

【操作程序】

1?样本的验收、编号、登记。

2?将样本充分混匀，用血沉管（30mmX2.5mm)吸取混匀样本至“0”刻度。擦去管外附 着的血液，将管直立在血沉架上。

3?记录时间，室温中静止1小时，观察血浆高度，以红细胞下沉的毫米数报告。 4?结果审核：血沉架上的实验号与申请单上的编号、实验时间是否准确。

【参考值】

1. 〈50岁：男性 0-15mm/h,女性0-20 mm/h.

2. 〉50岁：男性 0-20mm/h,女性0-30mm/h.

3. 〉85岁：男性 0-30mm/h,女性0-42mm/h.

4?儿童：0-10 mm/h.

【方法学特性】

ICSH推荐魏氏法为血沉测定的标准法，此法筒便实用。

【质量控制】

1.ICSH推荐魏氏法为血沉测定的标准法。

2?血沉可接受性能指标：靶值±3SD?。

3?血样本避免脂血，抗凝剂与血的比例要正确，抗凝剂浓度增加使血沉减慢，抽血 应在30s内完成，不得混入消毒剂，避免形成凝块。

4?标本采集后须在2小时内测定。如2小时内不能完成测定，须将样本置4°C保存，但 也不能超过6小时。

5. 测定室温要求18~25C，温度过高血沉加快，温度过低血沉减慢。

6. 血沉管与血沉架规格必须符合标准。血沉管置血沉架上应完全垂直。如血沉管倾 斜3C，沉降率可增加30%。

7?血浆中带有正电荷的不对称大分子物质纤维蛋白原是最强有力的促缗钱状聚集的 物质，其次为r球蛋白，再次为a、P球蛋白以及胆固醇、甘油三酯等；而清蛋白 及卵磷酯则抑制红细胞缗钱状形成而减缓血沉。

8?红细胞直径愈大血沉愈快，球形红细胞、镰形红细胞不易聚集因而血沉减慢。红 细胞数量太少，影响缗钱状形成，血沉也减慢。

9?负压管、采血针、血沉管要干燥洁净避免溶血。用丙酮-水系统洗涤使用过的血沉 管。

【临床意义】

1?生理性增快：女性高于男性、妇女经期、妊娠3个月以上、老年人尤其是70岁以上 的老人。

2?病理性增快：

[1] 各种炎症：严重感染时血沉>100 mm/h.，在炎症发生后2-3天血沉可增快。

[2] 组织损伤及坏死：范围较大的组织损伤或手坟创伤常致血沉增快，若无合并症，

一般2-3周内恢复正常。

[3] 恶性肿瘤：血沉可作为恶性肿瘤的普查筛选指标，恶性肿瘤血沉迅速增快，恶 性肿瘤手术后或治疗彻底后，血沉可于正常，复发或转移时又可增快（血沉>100 mm/h).

[4] 高球蛋白血症：多种因素导致的免疫球蛋白增高可使血沉增快。

[5] 贫血：贫血病人血红蛋白<90g/L时血沉可轻度增快，并随贫血加重而增快。

但 严重贫血时因红细胞过少不易形成缗钱状聚集，故血沉的加快不与红细胞的减少成 正比。遗传性红细胞增多症、镰形红细胞性贫血等，因异形红细胞不容易聚集成缗 钱状，故虽有贫血而血沉加快并不明显，镰形红细胞性贫血的病人血沉甚至很慢。

[6] 高胆固醇血症。如动脉粥样硬化、糖尿病、肾病综合症、粘液性水肿等。 3?血沉减慢：见红细胞增多症、环形红细胞增多症、脱水、充血性心力衰竭、使用 抗炎药物、严重肝功能损害、纤维蛋白原严重减低等。

4?鉴别诊断：

[1] 心肌梗死时2-3天血沉增快，并持续1-3周，而心绞痛时血沉多正常。

[2] 恶性肿瘤血沉迅速增快，而良性肿瘤血沉多正常。

5?疗效观察：可动态观察病性变化。如慢性炎症，活动期血沉增快，病情好转时血 沉减慢，非活动期血沉可正常。

【目的】

指导骨髓细胞学检测的测定。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签 字：专业主管、质控主管、科主任。

【检验的适应证】

1. 诊断造血系统疾病；

2. 协助诊断某些疾病；

3提高某些疾病的诊断率。

【仪器与试剂】

1?仪器：光学显微镜。

2?试剂：瑞氏-姬姆萨复合染色液

I液：取瑞氏染粉1g、姬姆萨染粉0.3g，置洁净研钵中，加少量甲醇（分析纯）研 磨片刻，吸出上层染液，再加少量甲醇继续研磨，如此连续几次，共用甲醇500ml， 收集于棕色玻璃瓶中，每天早、晚各振摇3分钟，共5天，再存放一周即可使用。 II液：PH6.4-6.8磷酸盐缓冲液 磷

酸二氢钾（无水）6.64g 磷

酸氢二钠（无水）2.56g

加少量蒸溜水溶解，用磷酸盐调整PH，加水至1000ml.

【操作程序】

1?骨髓取材：由临床医生取材、涂片。

2?髓片编号、登记。

3?染色程序：

[1] 髓片两端用蜡笔画线，置染色架上。

[2] 加I液染液3-5滴于涂片上，静止1分钟（天热时间可缩短）。

[3] 然后加II液磷酸盐缓冲液3-10滴，使两液混匀，约10-15分钟。

[4] 用水缓缓冲洗髓片，待干镜检。

4.普通光镜低倍镜检查：

[1]判断髓增生情况：在观察取材、涂片、染色等情况是否满意的基础上，以涂片 中有核细胞与成熟红细胞之比来判断骨髓有核细胞的增生程度。

共分五级，判断标准如下：

增生极度活跃：成熟红细胞与有核细胞之比约为1：1，见于白血病、红白血病。 增生明显活跃：成熟红细胞与有核细胞之比约为10：1，见于白血病、增生性贫血。 增生活跃：成熟红细胞与有核细胞之比约为20：1，见于正常骨髓、某些贫血。 增生减低：成熟红细胞与有核细胞之比约为50：1，见于造血功能低下。

增生严重减低：成熟红细胞与有核细胞之比约为300：1，见于再生障碍性贫血。

判断的原则：当检验的结果介于两级之间时，则将其增生程度向上提一级。

[2] 估计巨核细胞系统增生情况：计数全部片膜内的巨核细胞。正常人于1.5cmX3cm 的范围可见巨核细胞7-35个。但须在油镜下观察得以证实。

[3] 观察涂片边缘、尾部、骨髓小粒周围，有无体积较大或成堆分布的异常细胞， 但也须在油镜下观察得以证实。

5?油镜检查：

[1] 选择满意的片膜段，观察200-500个细胞，按细胞的种类、发育阶段分别计数， 并计算它们各自的百分率。

[2] 各阶段血细胞的形态学特征。（略）

[3] 观察各系统的增生程度和各阶段细胞质量和数量的变化，观察的要点：

1] 粒细胞系统：观察胞体的大小、胞核的形态以及胞浆是否有空泡和变性、中毒性 颗粒、Auer小体、吞噬物等。

2] 红细胞系统：观察幼红细胞有无巨幼样变，胞核有无固缩、碎裂、胞浆内有无嗜 碱性点彩、H0well-Jolly小体、Cabot环等，并应同时观察成熟红细胞大小、形态、 染色、结构等有无异常。

3] 巨核系统：除作分类计数外，应注意巨核细胞和血小板的数量、大小、形态、及 聚集性、颗粒变化等。

4] 单核细胞、淋巴细胞、浆细胞、网状细胞、内皮细胞、组织嗜碱细胞、吞噬细胞 的数量和形态变化。

5] 是否出现其它异常细胞和血液寄生虫等。

6?结果计算：

[1] 计算各系统各阶段细胞分别占有核细胞的百分率。

[2] 计算粒红比例，将各阶段粒细胞百分率的总和与各阶段有核红细胞百分率的总 和作比较，计算粒红比值（G/E)。

7?血象分析：分析骨髓象必须分析血象，因为两者可以互相对照，以增加诊断的正 确性。

8.细胞化学染色：用以协助鉴别诊断，常用的染色方法：

过氧化物酶染色、过碘酸-雪夫反应（糖原染色)、碱性磷酸酶染色、氯乙酸AS-D 萘酚酯酶染色、醋酸AS-D萘酚酯酶染色和氟化钠抑制试验、酸性磷酸酶和抗酒石酸 酸性磷酸酶 染色、铁染色。

9?填写检验报告单

[1] 取材、涂片、染色等情况：采用“良好”、“尚可”、“不佳”三级评价标准。 1] 取材良好的指标：骨髓液和涂片上均有骨髓小粒和脂肪滴。有造血的幼稚细胞的 巨核细胞，有骨髓特有的细胞，粒细胞的杆状核与分叶核的比值大于血片中的比值。

2] 涂片良好的指标：片膜厚薄适当、均匀，有头、体、尾三部分；尾部成弧形，上 下缘整齐；面积约1.5cmX3cm;镜下见各类有核细胞分布均匀，成熟红细胞互不重叠， 也不分散，也不皱缩。

3] 染色良好的指标：片上无染料沉着，细胞染色均匀，深浅适当，色泽鲜明，颜色 正确。成熟红细胞染浅红色，粒细胞核分叶清楚，核染色质及胞浆颗粒清楚。

[2] 填写检验报告单：根据检验的结果，按报告单的要求，每项详细填写和描述。

[3]提出诊断意见：根据骨髓象、血象、化学染色、结合临床资料提出具体意见， 供临床参考。一般有以下几种情况

1] 作出肯定诊断：若细胞学特征与临床表现均典型即可作出肯定诊断。

2] 支持临床诊断：若骨髓象和血象的形态改变可以解释临床表现，即可提出支持性 意见。

3] 排除某些疾病：若临床上怀疑是继发性血小板减少症，但骨髓象呈典型的原发性 血小板减少性紫癫的表现，即可排除继发性的诊断。

4] 骨髓确有某些改变，但对临床诊断提出不支持或否定性意见，可简述其特点，并 尽可能提出进一步检查的建议，供临床参考。 10?审核、核对报告单，签字、登记。

11.标本的保存：检验的标本和结果要妥善保存或存入档案，以备复查和总结。 【参考值范围及报告单】

安徽省XX医院

骨髓细胞学检查报告单

姓 名： 性 别： 分类 断：

____________ 龄：

年

住

号：

科

_____________ 别： 院 床 取材部位:

_________________________

骨髓片号:

号： 临床诊

分析：

骨髓像

取材，涂片，染色。 骨髓增生活跃粒红。

粒系增生活跃占有核细胞左右。各阶段比值及形 ^态。

红系增生活跃占有核细胞左右，以中、晚幼红细胞 增生成熟红细胞形态。

全片（x)见到巨核细胞个分类见左表血小板。 寄生虫。

血像：

分类见左表。

报告人：

报告日期： 审查人:

【骨髓象检查的注意事项】

1. 确认细胞不能单凭一、二个持点下结论。应综合细胞的大小、核质比例、核的形 状、染色质结构、核仁、胞质着色和颗粒等条件全面分析判断。

2. 不同染色法，细胞着色的深浅、酸碱度、染色质清楚程度等，不尽相同，因此判 断细胞时，应结合同一涂片内其它正常细胞染色情况分析。

3. 各系统的原始细胞虽各有特征，但极相似，除应作组化染色协助区别外，也可根 据伴随出现的幼稚细胞或成熟细胞，推测原始细胞的归属。

4. 介于两个阶段之间的细胞，应统一按成熟方向的下一阶段计算。

5. 在特殊情况下介于两个系统之间的细胞的归属

[1] 介于浆细胞与幼稚红细胞之间的细胞，右归为红细胞；

[2] 介于淋巴细胞与红细胞之间的细胞归为红细胞（外周血中则归为淋巴细胞）；

[3] 若确诊为浆细胞性白血病、淋巴细胞性白血病或红白血病时，则应将这些细胞 随确诊而划分归属。

14.实在难以确定的细胞，可列于“分类不明细胞”，可通过细胞化学染色、骨髓病理、 电镜或集体读片等方法弄清类别，或作形态描述记录、照像记录、动态观察，以待 进一步明确。

急性白血病时，对破碎细胞应以观察和记数，以了解出现的比例的破碎的程度，为 辩认和分析原始细胞类型作参考。

【质重控制】

1. 细胞识别符合率可接受性能指标：彡90%。

2. 骨髓液中纤维蛋白含量高，凝固较快，所以涂片要快，但不可用草酸盐抗凝，否

则会使血细胞核变形，核染色质致密，胞浆空泡形成、出现草酸盐结晶。

3. 涂片要新鲜，应立即进行染色，如特殊情况，一般不超过一周。否则细胞蛋白质 变性染色偏碱。

4. 每批染液配制后使作前应用正常血片试染，以了解染液的性能。

5. 染色时间长短与气温有关外，也与细胞增生情况、各批染液的性能有关，帮要求 将染色中的涂片在显微镜下观察，待颗粒清楚、核浆分明、着色满意后才终止染色。

6. 染色过深涂片可用瑞氏-姬姆萨复合染色液滴加于涂片上，马上冲洗。如过浅可重 染，先加缓冲液，混合后复染到需要的深度。

7. 镜检时应考虑到一般体积大的细胞分布于涂片的上下边缘及尾部，计数时应从体 尾交界处开始迂回向尾部移动。

8. 骨髓巨核细胞计数涂片不宜过厚，以透过涂膜看到字迹为度，计数时应浏览全片。

日 期 X X年X月X E

(二）血栓与止血检测

【目的】

为了获得有关血栓与止血准确的检验结果，标本采集和处理必须规范化。也是质量控 制的重要条件。

【该SOP变动程序】

本SOP的改变，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并经下述人员批准签字：专业 主管、科主任。

【标本釆集】

1?病人的准备工作：

[1]

[2]

[3]

[4] 首先确认病人姓名，并将姓名、编号写在贮血容器上。 安慰病人，以减轻其恐惧心理。 尽可能保证每次采血都在同样条件下进行，即病人处于休息状态，并且在早餐了解近期用药情况和特殊生理状况，并记录。例如阿斯匹林、潘生丁等药物能前 米血。 抑 制血小板聚集；口服避孕药会使血小板粘附、聚集功能、纤维蛋白原及多种凝血因 子活性明显增高；当剧烈运动或输注肾上腺素时训因子活性会快速上升。应注明。 2?器材的准备

[1]

[2] 消毒剂：一般用70%乙醇浸泡的棉签。 —次性负压收集管，内含0. 10M即3. 2%枸椽酸钠抗凝剂，根据取血量设有 2.0ml，5.0ml，10ml各种收集管。枸椽酸钠与血液之比为1:9体积；配套针头：长短 和直径应符合要求，国际上推荐用21G1.5或20G1.5号针头。小儿可用23G。如果用注 射器采血，必须用塑料注射器和带塞塑料试管（加适量枸椽酸钠抗凝剂，比例同上）。

[3] 止血带：柔软弹性良好的塑胶管。

【采血步骤】

1. 暴露采血部位（一般为肘部静脉，小儿可其他部位采血），静脉上方勿压迫过紧。

2. 用经70%乙醇浸泡过的棉签涂抹消毒穿刺部位皮肤，从内向外消毒。

3. 准备好无菌注射器、针头或内含抗凝剂的负压收集管及配套针头。

4. 前臂上（穿刺部位以上）扎好止血带，松紧度以能阻止静脉血流动为宜，不宜过 紧。

5. 用负压收集管取血的方法是：针头刺入静脉，有回血后针头另一端插入负压收集 管，注意使血液靠管壁流入管内，勿直接冲入管底。至需要量时即压紧针头塑料管。

6. 用注射器抽血的方法：先要确保注射器已推到注射器底部，（不含有空气）将针头 插入已扩张的血管中，慢慢回抽注射器活塞，吸取2-3ml血液。换上另一支注射器， 抽取需要量的血液（0.109M枸椽酸钠与血液容积之比为1:9)，去掉针头靠管注入塑 料管中，使抗凝剂与血液混合。

7. 用无菌棉签轻压穿刺点一段时间，当技术人员处理针管中血液时，应嘱病人继续 按压。并注意上臂衣袖的松解。

【标本处理】

1. 采血完毕，立即与抗凝剂充分混合，在带塞的塑料管中，血与抗凝剂混合10次， 但要避免用力振摇。标本应尽快离心，一般在5-20°C离心。但纤溶试验需在4°C离心。

2. 标本保存：血浆标本原则上应立即检测，否则应低温保存。保存温度和时间可影 响凝血因子的促凝活性。用于APTT和特殊因子测定的血液标本在室温中不能超过2 小时；2-4°C保存4小时，-20°C保存2周，-70°C保存6个月。凝血因子中，V因子和 珊因子是易变的，故要求严格，相对来讲，PT标本稳定性较好，保存时间可长一些。

3?离心取血浆：如果需要富含血小板的血浆，室温下200-400g(1000r/min)离心 10min。大多数凝血试验用的是去血小板血浆,那就需在大于或等于1000g(3000r/min) 条件下再次离心20分钟。

如果不能在4小时内完成所有试验，冷冻贮存少量血浆（0.5-1ml)于带盖塑料小 管中，最好在-70°C贮存.时间较短可贮存于-20°C条件下.在试验前将血浆于37°C下 快速融化.要求用塑料管存放全血或血浆，并且用塑料吸管移取标本，因玻璃表面能 激活凝血过程，从而影响检验结果。

【注意事项】

1.采血人员应技术熟练，要求“一针见血”以防止组织损伤、外源性凝血因子进入针 管。采血时病人应放松，环境应温暖，防止静脉挛缩，止血带压力要尽可能小，并 且不要超过3分钟，因压力大及束缚时间长可影响局部血液的浓缩和内皮细胞释放 t-PA，后者将引起纤溶活性增强，血小板释放反应及某些凝血因子活性增加。要求 以实验人员采血更为合适，能掌握采血的各种准备和注意事项，也能尽量缩短采血 后至实验前标本放置的时间。如果需要临床医护人员协助采血，必须将有关事项宣 传到位，并由实验人员到临床亲临督导，以保证标本能符合要求。

2?如果用注射器抽血，抽血速度要慢且均匀，使血液平稳地进入注射器，防止气泡 产生。但如果抽血过慢或不顺利，可能激活凝血系统，试验结果会显示凝血因子活 性增高，血小板假性降低等异常。应重新采集。

3. NCCLS提倡用高质量的塑料或聚乙烯试管收集标本，此管有充分的透明度，根据取 血量设有2.0ml、5.0ml、10ml各种内含抗凝剂的血液收集管，且能有充分空间便于

血液与抗凝剂混合。取血后管内剩余空间应不小于血液的15%，使用的商品收集管应 保存在-20°C，使用前充分融化，要定期抽样检查其内的液体抗凝剂量，防止由于蒸 发和遗漏而致抗凝剂量减少。

4. “干管法”抗凝剂已不再使用，由于其在与其在与血液混合时须再溶解，易引起溶 血现象。

5.

试 当需收集几份标本时，应将第一个注射器内抽吸出最初的几毫升血液弃用，或用 它进行生化指标检测或其他血液方面的试验，而第二管收集的血液可以用于凝血

验。

6.

7.

8. 采血的注射器应是硅化玻璃或塑料注射器，并要求收集管刻度精确，所有试管如果采血时产生泡沫，可能导致纤维蛋白原和珊因子变性。溶血的血浆会引起放血时取下针头，将注射器喷口贴靠在试管壁后慢慢排空注射器，使血液沿管应 与参比管一一比较，弃去所有不符合要求的试管。 血 小板活化和凝血时间缩短，应弃之不用。 壁 流下，以防止泡沫或过度振荡；随后立即颠倒混匀，因为纤维蛋白在剧烈振荡混匀 时可能变性，放血到收集管的针头喷口也须贴靠试管壁，使血液沿管壁流下而防止 直接冲入管底产生泡沫。

9.

不可在输液侧手臂采血，更不宜在输液针头内抽血。采血前也不要拍打静脉。

监视整个实验过程，以排除质量环节中导致的因素.

【该SOP变动程序】 本SOP的改变可由任一使用本SOP的工作人员提出，并经下述人员批准签字：专业主 管、科主任。

【标准要求】

1.标本准备：采用塑料采血管或硅化玻璃注射器静脉采血，针头必须为21 号以上，儿童可用23号。采血技术熟练，采血时止血带不可束缚过紧，并且以1分钟 完成为宜，最多不宜超过3分钟以免某些凝血因子及纤溶因子活化。

2?抗凝剂选择：以109mmol/L枸椽酸钠溶液为佳，血与抗凝剂按9： 1混合。建议用已 加有抗凝剂的硅化真空采血管。也可用带盖塑料管或硅化玻璃管，但应保证血与抗 凝剂的比例正确。

3.收到血标本后应尽快离心分离血浆，并尽快测量，全血储存在4-8C不应超过2小 时，室温下富含血小板血浆可存放3小时，去血小板血浆可存放2小时；4小时内不能 测

定的血浆应冷藏；不要把血浆置于37C条件下超过10分钟。应了解不同存放温度 和时间对各种凝血因子活性检测的影响。

【材料】

1. 试剂的选择一方面要根据所用检测仪器，例如：光电检测法的凝血仪不宜用透光 度差的试剂；另一方面要根据实验试剂对疾病的敏感性，例如APTT试剂中所用活化 剂不同（可用白陶土、硅藻土和鞣花酸）。该试剂对肝素、凝血因子珊和因子IX缺乏 及狼疮样抗凝物敏感性不同，所以需根据检测项目来选择不同活化剂。（例如常用的 APTT试剂的活化剂，以白陶土对凝血因子敏感，硅土对因子及肝素均敏感，鞣花酸 对狼疮样抗凝物敏感性较强.PT试剂的选择也一样，例如对口服抗凝药物(华法令)检 测应选择ISI与1.0接近的PT试剂。）血栓与止血检验应尽可能选用仪器生产厂家推荐 的配套试剂，并选择使用与仪器原理相匹配的试剂，但必须进行比对试验。所购试 剂应有批号及有效期。

2. 正常对照血浆正常对照血浆有商品供应，多为冻干品，也可自制，要求采集20 份以上男女各半，年龄在18-25岁之间的健康个体，删除服药者，须在平静状态下采 血，血液经抗凝离心后分离血浆。取等量的各份个体血浆进行混匀，然后分装小瓶， 冻存于-80°C或冷冻干燥备用。

3?参比血浆或称标准血浆（质控血浆)：为了使检测结果在同一实验室的不同时期或 不实验室间具有可比性，就要使用标准品。目前，WHO已建立了十种血栓与止血的国 际标准品，如：P-TGC83/501)，

PF4 (83/505)，VWF(87/718)，蛋白C(86/622)，t-PA(86/670)，F珊（80/511) 等。 等。

【仪器和设备】

试管以一次性塑料制品为佳，目前多使用一次性塑料真空采血管。

手工法：

1. 水浴箱温度应控制在37°C1°C内，最好是带对照的水浴，水深以能浸没试管3cm以 上。

2. 移液器须经过校正。

3?秒表也须校正。

仪器法：

1?仪器安装后应对其主要性能参数进行评价，内容包括精密度、线性范围、可比性、 抗干扰试验试验等。评价结果应在仪器说明书标示范围之内。

2?仪器在测定常规标本前应使用配套的校正物建立标准曲线，在更换新批号的试剂 或

仪器维修后，要重新建立标准曲线。无校正物的测定项目，可伤使用配套的定值 质控物进行测定，测定结果应在定值质控物标示的允许范围内。

3?每台仪器上使用的凝血活酶试剂应有特定的ISI (国际敏感指数）值，这样才能使 患者INR (国际标准化凝血酶原时间）比值的结果有可比性。

自动终点测定目前得到广泛应用，仪器有半自动和全自动两种类型。仪器应用 的检测系统有化学的、机械的或电子等，形成凝块所需时间也有差异。对每种方法 都应建立自己正常参考范围，一些光学系统进行测定的仪器对血脂高、溶血、黄疸 血浆不易得出精确的检测结果。

【操作步骤】以STAGO-STA全自动血凝仪为例

1?按说明书复溶所需试剂、正常对照血浆及质控血浆，放置室温30分钟。 2?开机：打开主机和显示器开关，待仪器正常启动，确认已按装好打印纸。 3?放置试剂：按主菜单步骤。

4?放置样品及正常对照血浆：按仪器说明。

5. 质控品按仪器菜单说明。

6. 标本测定：仪器自动测定，自动打印结果。

7. 关机：打开样本和试剂抽屉，取出标本和试剂，按步骤关机。

8. 绘制质控图，步骤如下：

[1] 首先在理想条件下（包括高素质实验人员，规范操作，稳定的仪器)，对质控品 至少进行10次测量；

[2] 计算出X值及标准差；

[3] 绘出质控图，质控物的X值为基线，纵轴有X2SD；

[4] 每次试验时质控物标本一起检测，并把当日的结果点在图表上。下列的质量变 化图形有利于操作人员判断结果是否有所失控：

一个值完全在2SD范围之外；

几个连续值显示增高趋势；

几个连续值显示减低趋势；

几个连续值显示在均值的某一侧；

每20个值中有两个或更多在+20SD或-20SD线上。

下图说明了各种趋势变化，其中A点值超出20SD，判为失控；B点在一侧显示升高趋 势，可能是系统误差；C点是仪器校正后在质控范围内。

【操作注意点】

1. 为了使检测结果在同一实验室的不同时期具有可比性，必须使用标准品或参比血 浆进行室内质量控制。

2. 应在常规工作的基础上进行室内质控。

3. 每一批次操作至少要进行一次质控测定。

4. 质控品必须与患者标本在同样条件下进行检测。

5?使用质控品时，要进重复检测2-3次。

6. 对手工操作血凝试验，在作患者标本以前及更换试剂前必须先做两个水平的质控 品，并且患者标本和质控品都应作双份测定。

7. 对应用仪器检测的血凝试验，每八小时工作或改变试剂时，应包括两份不同水平 的质控品。

要求室内质控的RCV：PT〈5%，INR〈7%，APTT〈5%，Fbg〈7%

【参考值】

各试验室必须有本实验室条件下该项目的正常参考值? “参考值”反映的是指定人群 的健康指标，它可能是正常人群，也包括可能有地方病或在当地环境生存（包括吸 烟）的人群，按年龄组和性别不同来分别建立参考值。通常每组取40人份样本即可。 这些供血者应代表各年龄段人群进行计算。

【注意事项】

1.血栓与止血实验的质量控制和标准化是实验结果可靠性、可比性的基本保证。其 实验项目繁多，现阶段大部分是应用形成可见的纤维蛋白丝为终点。这种方法所采 用的均为生物性材料，其凝血活性或抗凝、纤溶活性可随时间、温度、生理变化、 个体差异而变化，故其质量控制更为重要。

2?要重视检测前的质量控制，包括合理的标本采集和处理；试剂的选择；器材、仪 器、质控品、正常对照品的质量保证。

3.实验操作时应警惕许多实验误差来源于技术错误。在实验技术、试剂、温度及PH 值上微小的变化都有导致试验结果明显的变化。例如，在一期法PT测定时孵育时间 和温度应严格控制。血浆绝不能在37°C放置超过10分钟；凝血活酶放置时间也不能 超过说明书所规定的期限。

血浆凝固主要是酶催化的反应。PH环境和溶液离子强度在实验过程中要严格控 制，反应混合物PH必须处于7.2-7.4之间.

每次APTT实验时，活化部分凝血活酶试剂和血浆混合物的孵育时间决定了APTT 试验中接触活化的量，所以其混合的时间和技术对检测结果影响很大?

4?实验前应检查血浆是否有溶血、黄疸、脂血和出现凝块。红细胞膜含有磷脂，

溶 血标本具有与血小板第3因子（磷脂）相似的凝血活性，能缩短溶血血浆的APTT值。 5?标本中如出现凝块，无论多小的凝块均会影响实验结果。

6.APTT、TP需去血小板血浆，一般3000r/min离心10min后分离血浆。 操作人员

部门主管 质量负责人

【目的】

室间质评（EQA)是临床实验室全面质量管理的重方面，相互校正各参与实验室测定 结果的准确性，并使参与实验室之间建立实验结果的可比性，达到临床要求，提高 检验质量。 【方法】

由卫生部临床检验中心或/和省临床检验中心定期发放质控物进行凝血常规室间质 评。

按说明要求处理质控物，手工或上机重复检测，按仪器和试剂分组统计，以允许偏 差范围评分。

各项目的允许范围 PT 靶值

15% INR 靶值20%

APTT 靶值

15%

Fbg 靶值

20%

【目的】

保证APTT检测结果的准确性 【该SOP变动程序】 本SOP的改变，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并经下述人员批准签字:专业主 管、科主任.

【方法原理】

在37度条件下，以白陶土为激活剂，激活因子XI和XD，用脑磷脂(部分凝血活酶)

代替血小板第三因子，在钙离子参与下，测定血小板血浆凝固所需的时间即为活化分 凝血活酶时间测定(APTT).

APTT是一个敏感且可靠的检查内源凝血系统的筛选试验.可代替凝血时间测定或血 浆复钙时间测定.

【标本要求】

按凝血象标本采集和处理的标准操作程序所采集的枸椽酸钠抗凝血液标本.特 别重要的是病人的准备，采血针头宜21或20号，甲塑料试管或真空采血管(硅化)采集 血液，抗凝剂用109毫摩尔/L枸椽酸钠深液，采静脉血1.8ML加入含0.2ML抗凝剂的采 血管中，充分颠倒混匀(不能有气泡)3000转/分钟离心10分钟?用塑料吸管吸取血浆 置带盖的塑料管中备用?应注意禁止血带时间越短越好，最长不宜超过3分钟，否则易 引起某些凝血因子及纤深活性的变化.

【试剂】

1.109毫摩尔/L枸椽酸钠溶液.

2.APTT试剂:含白陶土及脑磷脂.

3.25毫摩尔/L氯化钙溶液

4?健康人混合冻干血浆

5.参比血浆即标准血浆，是室内质控品.

【器材】

用试管法或血凝仪法检测.

血凝仪水浴箱硅化玻离试管或塑料试管离心机秒表 【操作步骤】

试管法

1. 采血并分离血浆:静脉血1. 8毫升加入含有109毫摩尔/升枸椽酸钠溶液0. 2毫升的 塑料试管或硅化玻暾试管中，颠倒混匀10次(动作须轻缓，避免产生气泡).3000转/分 钟离心10分钟，获血小板血浆，用塑料吸管吸取血浆至塑料试管内备用?

2. 平衡温度:用蒸馏水溶解正常人混合冻干血浆，于室温下静止15分钟以上，充分混 匀.

如果是冰冻血浆，不能静置室温中逐渐融化，这样会有纤维蛋白原析出，应置37度水 浴中摆动使其迅速融化?当血浆融化后应立即取出?避免不稳定因子衰减.

3. 予温活化：于塑料试管中加入予温的正常人混合血浆和APTT试剂各0. 1毫升，混 匀，37度水浴中予温3分钟，其间轻轻摇荡数次?

4. 加钙计时：于上述试管中加入予温至37度25毫摩尔/L氯化钙溶液0.1毫升混匀，并 立即开始计时，置水浴中不断振摇，20S后不时缓慢倾斜试管，观察试管内液体的流动 状态，当液体停止流动时，立即停止计时，并记录时间?

5?重复两次，取平均值，即为正常对照血浆八?7!值.

6. 按上法测定待测血浆的APTT值，每份标本需重复两次，取平均值.

7. 室内质控用参比血浆检测，方法步骤均与检测正常对照血浆与待测血浆相同.

8. 记录实验结果并在质控图上书点.

凝血仪法（以半自动凝血仪为例）

1?标本采集与处理：同试管法.

2.按说明书复溶所需试剂，正常人血浆及参比血浆.

3?开机：开启主机及打印机?显示主菜单根据提示选“I ANALYSIS”

4?选择检测项目“APTT”按ENTER.

5?取出检测杯，放入滤光片(405纳米）ENTER待仪器通过自检.

6?予温活化:在检测杯中加入正常混合血浆和APTT试剂各0.1毫升?混匀，37度水浴中 予温3分钟，在予温过和中，轻轻振摇数次.

7. 将已予温且加了标本的检杯放入检测位置?

8. 用自动加样器加入已予温的25毫摩尔/L氯化钙溶液0.1ML，血凝仪自测混合物的凝 固终点，并显示出正常混合血浆的APTT值，自动打印结果.

9?以同样方法测定待测血样本的八?7!值.

10. 以同样方法测定参比血浆的APTT值作室内质控?

11. 记录各项结果，并在质控图上点上当日的室内质控结果并做好分析.

【参考范围】试管法和仪器法的参考值无差别

男性37 ±3.35(31.5-43.5S)

女性 37.5±2.8 (32-43S)

待测者的测定值超过正常对照值10S以上才有病理意义.

【注意事项】

1. 采血要顺利，血流与抗凝剂要充分混合不可有气泡，不可有凝块（即使微小凝块也 不合格）

2. 标本应及时检测，要求在血标本采集后2小时内检测，要求在血标本采集后有缩短 倾向?血浆加APTT试剂后被激活的时间不得少于3分钟.

3. 分离血浆务必使血小板去除(血小板血浆)，离心以3000转/MIN 10分钟为宜，离心 后血浆中血小析计数应小于20X 109/L

4. 血浆加APTT试剂后予温时间不应少于3分钟?

5. 待测标本检测前应选测定正常人混合血浆作为正常对照，如果其APTT值在允许范 围内方可继续测定待测标本，若正常对照明显延长说明APTT试剂质量不侍，需更换再 测. 6?参比血浆测定，每日与批量标本检测时同时旱灾行，是室内质控所必需?

【临床意义】

1. APTT延长，见于以下情况1)先天性凝血因子异常(如甲已丙型血友病系珊IX XI

因子缺乏?或接触因子(XDXI因子)缺乏，VWD等.2)多种凝血因子缺乏，如严重肝病，维 生素K缺乏，DIC，纤深亢进等.3)循环抗凝物质存在?故APTT结果可作为以上有关疾病 的诊断依据之一.

2.APTT缩短:见于DIC高凝期，血栓前状态及血栓性疾病，妊娠高血压缩合征等高凝状 态.

3?肝素治疗的监护:APTT对血浆中肝素的浓度很敏感，故是目前广泛应用的实验室监 护指标?一般在肝素治疗期间，APTT维持在正常对照的1.5-2.5倍为宜，在此范围内， 治疗效果好，出血风险小?

4.APTT是目前手术前的常规检查，已化替凝血时间或血浆复钙时间测定.