实验八 邻二氮菲分光光度法测定微量铁

一 目的要求

1.了解邻二氮菲测定铁的基本原理及基本条件，学习显色溶液的制备操作技术；

2.掌握吸收曲线的测绘和测量波长的选择；

3.掌握标准曲线定量的实验技术；

4.了解T6新世纪紫外可见分光光度计的使用方法。

二 基本原理

邻二氮菲（又称邻菲罗啉）是测定微量铁的一种较好的显色剂。在PH=4-6的溶液中，邻二氮菲与Fe²⁺生成稳定的橙红色络合物。

橙红色络合物的最大吸收波长在510nm处，摩尔吸光系数ε510 =1.1×10⁴，反应的灵敏度、稳定性、选择性均较好。

此反应可用于微量Fe²⁺的测定，如果铁以Fe³⁺的形式存在，则应预先加入还原剂盐酸羟胺或对苯二酚将Fe³⁺还原成Fe²⁺。

三 仪器与试剂

1.仪器

T6新世纪紫外可见分光光度计

容量瓶50ml：7个；吸量管5ml：4支；吸量管10ml：1支。

2.试剂

10μg/ml铁标准溶液：准确称取0.8634g NH₄Fe(SO₄)₂.12H₂O，置于烧杯中，以50ml 1mol/L HCL 溶液溶解后转入1000ml 容量瓶中，用水稀释到刻度，摇匀。从中吸取50ml该溶液于500ml容量瓶中，加50ml 1mol/L HCL 溶液，用水稀释至刻度，摇匀。

10g/L盐酸羟胺溶液（临用时配制）。

1g/L邻二氮氮菲溶液（临用时配制）：应先用少许酒精溶解，再用水稀释。

NaAc-HAc缓冲溶液（PH=4.6）：将30ml冰醋酸和30g无水醋酸钠溶于100ml水中，稀释至500ml。

铁试样溶液：其中含铁0.02~0.06mg/10ml。

四 实验步骤

1.显色溶液的配制

取50ml容量瓶7个，分别准确加入10μg/ml的铁标准溶液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00（ml）及试样溶液10.00ml，再于各容量瓶中分别加入10g/L盐酸羟胺2.5ml，摇匀，稍停2min，再各加入NaAc-Hac缓冲溶液5ml及1g/L邻二氮氮菲溶液5ml，每加一种试剂后均摇匀再加另一种试剂，最后用水稀释到刻度，摇匀，放置10分钟。

2.测绘吸收曲线并选择测量波长：

选用任一铁标准溶液的显色溶液，以不含铁的试剂溶液为参比，用1cm比色皿，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，在T6新世纪紫外可见分光光度计上从波长420~600nm间，测定溶液的吸光度随波长的变化，绘制吸光曲线。选择吸收曲线的峰值波长为本实验的测量波长。

⑶绘制标准曲线：在选定波长510nm下，用1cm比色皿，以不含铁的试剂溶液作参比溶液，测量各个显色溶液的吸光度。

3.石灰石试样中微量铁的测定

    准确称取试样0.3～0.5克于小烧杯中，滴加3mol.L-1HCl溶液至试样溶解，完全转移至容量瓶50ml中，分别加入10g/L盐酸羟胺2.5ml，摇匀，稍停2min，再各加入NaAc-Hac缓冲溶液5ml及1g/L邻二氮氮菲溶液5ml，用水稀释到刻度，摇匀，放置10分钟。在选定波长510nm下，用1cm比色皿，以不含铁的试剂溶液作参比溶液，测量溶液的吸光度。

五 数据及处理

1.根据标准溶液的吸光度绘制标准曲线，计算摩尔吸收系数。

2.根据试样的吸光度，计算试样中铁的含量。

六 思考题

1.邻二氮菲测定铁时，为什么要加盐酸羟胺和醋酸钠溶液？

2.邻二氮菲比色测铁的原理是什么？用该法测出的铁含量是试样中亚铁的含量吗？

3.参比溶液为什么选用试剂空白，而不用蒸馏水？

 

第二篇：邻二氮菲分光光度法测定微量铁实验的改进

?　44?沈阳医学院学报　JournalofShenyangMedicalCollege　第10卷　第1期　20xx年3月

邻二氮菲分光光度法测定微量铁实验的改进

秦岩

(沈阳医学院基础医学院化学教研室,辽宁沈阳110034)

2+[关键词]缓冲溶液;表面活性剂(CTMAB);Fe

[中图分类号]R39211　　[文献标识码]B　　[文章编号]1008-2344(2008)01-0044-02

　　用邻二氮菲测定微量铁,在pH=2～9的溶液

2+

中,Fe与邻二氮菲反应生成橙红色配合物。以往实验我们用HAC—NaAC作为缓冲液。在HAC—NaAC缓冲液配制过程中,每500ml溶液中需要加入136gNaAC和120ml冰HAC,这样不但增加了实验成本,也给实验准备带来很多不便,为此,本文研究了用pH=4100[1]

HAC—NaAC缓冲溶液,[2,3]

十六烷基三甲基铵,,1　722MC可见分光光度计;铁标准溶液(100μg/ml):准确称取017022g(NH4)2Fe(SO4)2?6H2O加入20ml1:1HCl,移至1000ml

510nm

。

图1　吸收曲线

312　酸度对显色反应的影响　邻苯二甲酸氢钾溶

液的用量为4～6ml时,显色体系的吸光度值最大且基本恒定,实验选择加入5ml邻苯二甲酸氢钾溶液。

313　显色剂用量对显色反应的影响　显色剂邻二

容量瓶中,蒸馏水定容;10%盐酸羟胺溶液;0115%邻二氮菲溶液;pH=4100邻苯二甲酸氢钾溶液;0101mol/L溴化十六烷基三甲基铵(CT2MAB):用20%乙醇配制;HAC—NaAC缓冲液。2　试验方法

氮菲的用量为1～3ml时,吸光度值基本不变,本实验选择邻二氮菲的用量为2ml。

314　表面活性剂用量对显色反应的影响　分别试

验了加入CTMAB和不加CTMAB对吸光度值的影响,结果表明:含有CTMAB的一组溶液,体系颜色加深,吸光度值增大,表明CTMAB具有增敏作用,试验选择CTMAB用量为2ml。

μg/50mlFe2+进行测315　共存离子的影响　对40定,相当含铁量40倍的Sn、Al、Ca、Mg

2+

2+

3+

2+3-

移取110ml样品溶液于50ml容量瓶中,依次

加入10%盐酸羟胺110ml,pH=4100邻苯二甲酸氢钾溶液510ml,0101mol/LCTMAB210ml,0115%邻二氮菲溶液210ml,每加入一种试剂需摇匀,最后用蒸馏水定容,放置10min,用1cm比色皿,在510nm处测定吸光度。3　结果

311　吸收曲线制作　取3个50ml容量瓶按试验方

、Zn、SiO3

2+

2+2-

;20倍的Cr、Mn、PO4

3+2+

;

5倍的Co、Cu等均不干扰测定。

316　标准曲线　取6个50ml容量瓶,分别加入铁

2+

标准溶液0100、0140、0180、1120、1160、2100ml。按照试验方法进行测定,Fe浓度在0108～

μg/ml内与吸光度呈良好的线性关系,回归方4100

程为A=011519C+018444,相关系数γ=019963,

4

ε=4163×10。

2+

法配制待测液,第一个加HAC—NaAC缓冲液510ml;第二个加邻苯二甲酸氢钾溶液510ml;第三

个加邻苯二甲酸氢钾溶液510ml和CTMAB210ml。

然后分别在470～530nm波长范围内测定吸光度,绘制吸收曲线(图1),测得最大吸收波长均为

317　样品分析　按照试验方法对待测样品平行测

定5次,并进行加标回收实验,测定结果见表1。

第1期秦岩.邻二氮菲分光光度法测定微量铁实验的改进

表1　样品测定结果(n=5)

2+

?　45?

样品

测得值

(μg/ml)

11203100

标准加入量(μg/ml)

210410210410

测得总值(μg/ml)

3122511741967104

回收率

(%)10110xxxxxxxxxxxx

RSD(%)411xxxxxxxxxxxx

且稳定性增强,将该法用于样品中Fe的测定,既降低了实验成本,又给实验准备工作带来方便,而且结果准确、可靠。

参考文献:

[1]杜娟.溴化十六烷基三甲基铵增敏光度法测定废影液中的银

[J].化学分析计量,2005,14(3):54-56.

[2]刘红,黄亚励.表面活性剂增敏光度法测定烟草中铁的含量

[J].贵州农业科学,2005,33(4):53-54.

[3]梁国柱.表面活性剂增敏光度法测定水样中的微量铁[J].

样品1样品2

4　讨论

在CTMAB作用下,用邻苯二甲酸氢钾溶液作

2+

缓冲液测定样品中的Fe,提高了测定的灵敏度,

南通职业大学学报,2005,19(2):29-31.

[收稿日期]2007-07-10

(上接第39页)

命之源,是人体含量最丰富的常量元素,人体中99%的钙沉积在骨骼和牙齿中,发育、维持骨骼形态和硬度有重要作用还参与脑细胞发育3微量元素如铁物中虾皮,也利于吸收利用,,营养学家提出3～6岁儿童每日奶的摄入量应在

[4]

300～600ml。调查结果显示8所幼儿园奶的摄入量仅为80～150ml,严重不足。313　维生素类　8所幼儿园维生素E、PP摄入充足。城市示范和一类园维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素C摄入充足,其他6所幼儿园摄入不足,亚临床维生素A缺乏患病率农村高于城市。

膳食营养是儿童健康成长的物资基础,科学合理的平衡膳食对促进儿童发育,减少各种营养相关性疾病有重要作用,本次调查结果显示,农村幼儿园及城市二类以下幼儿园,儿童营养膳食质量问题突出。特别是个体园所多数为经济自筹,幼儿园没有合理科学的儿童食谱,随意配餐、膳食单调,为了多盈利,降低和克扣儿童伙食费标准,很难保证儿童各种营养素的摄入达到标准。

乳类食物摄入A,这些对儿。建议增加富含维生素A,每周,在钙的补充方面除提倡每人一杯奶以外,还要鼓励儿童多锻炼,增加户外活动,使儿童每日有1～2h的户外活动时间,保证儿童每日维生素D需要量达400IU,以促进钙的吸收。在膳食中要增加豆类、芝麻、紫菜、虾皮、奶类的摄入。加强对保健医生的营养知识培训,在制订食谱时除注意做到主副、荤素、干稀、甜咸、粗细粮搭配,食物多样化外,还要注意各营养素之间的平衡。提倡电脑配餐,及时调整膳食结构,为幼儿园儿童提供合理的平衡膳食,保证儿童健康成长。

参考文献:

[1]中国营养学会1中国居民膳食营养素参考摄入量[M]1北

京:中国轻工业出版社,2000123-26.

[2]杨锡强,易著文1儿科学[M]1第6版1北京:人民卫生

出版社,2004.681

[3]万力生1儿童常量元素缺乏防治[M]1北京:金盾出版

社,2004.13-191

[4]葛可佑1中国营养素师培训教材[M]1北京:人民卫生出

版社,2000.282-2831

[收稿日期]2007-07-23