弓形虫病的诊断与研究进展

弓形虫的诊断与其研究进展

【中文摘要】 弓形虫病的病原是刚地弓形虫(Toxoplasma gondii), 简称弓形虫, 它是一种对人类具有极大潜在危害的专性细胞内寄生虫, 也是一种致病寄生虫。本文对弓形虫病的诊断与其研究进展进行了综述。

【Abstract in English】 Toxoplasma disease pathogen is toxoplasma gondii, referred to as the toxoplasma, it is a kind of human has great potential hazard of obligate intracellular parasites, is also a kind of machine pathogenic parasites. In this paper, the toxoplasma disease diagnosis and its research progress were summarized.

【关键词】 弓形虫病、诊断技术、病原诊断、免疫诊断、分子生物学诊断、研究进展。

【Key Words】 Toxoplasma disease, diagnosis technology, pathogen diagnosis and immune diagnosis, molecular biology diagnosis and research progress.

正文 弓形虫病是一种由刚第弓形虫引起的呈世界性分布的人兽共患寄生虫病, 严重危害人体健康且给全世界的畜造成很大的经济损失。但人和动物的弓形虫病缺乏特异性临床症状和体征, 诊断较为困难。传统的检测方法有病原学诊断、免疫学检测等。其中病原学的诊断方法最为可靠, 但费时且易漏检; 免疫学方法临床上使用较为普遍, 但因抗原含量少, 抗体出现较晚, 不适合感染的早期检测和对免疫功能缺陷患者的诊断。而以核酸扩增技术为基础的分子生物学技术的迅速发展, 不仅为弓形虫病的诊断提供了快速、灵敏、特异及稳定的检测方法, 而且通过对病原基因型的分析鉴定, 为弓形虫群体生物学、流行病学、疫苗

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研究及对基因型和疾病模式之间潜在的相关性研究等提供重要的依据。

1 刚地弓形虫的发现及初期发展

19xx年，法国人Nicolle、Manceaux在刚地梳趾鼠的肝脾单核细胞中发现该虫种，因其滋养体呈弓形，故命名为刚地弓形虫。19xx年，Janku在布拉格一家医院观察到一名左眼畸形、右眼盲、脑积水的11个月大的弓形虫病患儿，被公认为人类弓型虫病的首例报告。19xx年Wolf等在纽约一例因脑膜炎死亡的新生儿脑重发现此虫，从而推断其有经胎盘感染的可能。

2 流行情况

弓形虫呈世界性分布，广泛寄生于多种哺乳类动物以及人体的有核细胞中。血清学调查结果表明, 全球约有10亿人被弓形虫感染。我国人群感染率约为5%~20%。

3 流行病学诊断

弓形虫生活史包括滋养体、包囊、裂殖体、配子体和卵囊, 除配子体外, 其余各期均有感染性。人和某些脊椎动物为其中间宿主, 而猫和其他猫科动物则为终宿主(同时也是中间宿主)。卵囊在终宿主体内形成, 随粪便排出体外, 人吃了被弓形虫成熟卵囊污染的食物, 或食入含弓形虫的未熟脊椎动物肉和禽蛋类而感染; 妇女在怀孕过程中, 尤其是在妊娠的最初三、四个月内感染弓形虫,不仅对胎儿致畸率高, 而且还常导致流产。因此, 当弓形虫感染者就诊时, 首先应了解其:①职业; ②有无生食肉类或蛋类的病史; ③是否喂养猫、犬等宠物; ④在家族及当地是否存在弓形虫病流行情况。如为女性, 尚须询问其孕产史;如存在畸形或弱智等残缺, 更要详细追溯其有关病史。若就诊者被初步诊断为弓形虫病, 则应进一步作相关临床检查和实验室检查; 若了解到当地有较多类似患者, 还应与疾控部门取得联系, 开展必要的流行病学调查。流行病学调查结果, 往往可反过来作为对弓形虫病诊断的参考依据。

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4 临床诊断

由于弓形虫寄生在宿主的有核细胞内, 机体的各个部位或脏器都有可能受到损害, 故弓形虫病在临床上表现为多种多样, 缺乏特异性。具体临床表现主要取决于弓形虫的寄生部位、机体的反应性及其病损程度。因此, 在进行临床诊断 时, 须根据就诊对象和具体临床表现仔细地加以分析、判断。

（1）先天性弓形虫病

① 若弓形虫损及胎儿脑部, 可引起小头畸形、脑积水、无脑儿等; 有的在出身后, 不仅有先天性畸形(除脑积水等而外, 还可有硬腭裂、兔唇、无耳壳、无肛门及两性畸形等), 有的还可表现为智力低下或先天愚型。

② 若病变累及双眼, 多发生脉络膜视网膜炎、虹膜睫状体炎等眼疾。

③ 若有脑积水、脑钙化及小头畸形, 同时伴有视网膜炎,即可诊断为“弓形虫病四联症”。

（2）获得性弓形虫病

获得性弓形虫病其临床表现比先天性弓形虫病更为复杂, 须注意与其他疾病(如结核病、病毒性脑炎)相鉴别。

① 感染弓形虫后, 首先出现弓形虫血症, 但并不一定出现急性症状, 而多呈带虫状态, 这有别于其他感染。

② 其后可出现淋巴结炎, 以头部、颈部的淋巴结肿大最为常见。

③ 若中枢神经系统受损, 常表现为脑炎、脑膜炎、脑膜脑炎, 并可出现癫癇 和精神异常等症状。

④ 若眼部受损,常表现为脉络膜视网膜炎, 有的还可出现斜视、眼肌麻痹、白内障、小眼球、眼球震颤、视网膜剥离、视神经炎或视神经萎缩等, 其中以视网膜炎最为常见。

⑤ 若累及心血管, 可表现为心脏扩大或发生心肌炎、心包炎、心律不齐及先天性心血管畸形等。

⑥ 可偶而侵犯呼吸道, 引起弓形虫性支气管炎和肺炎。

⑦ 免疫功能不全者,还可发生全身重症型弓形虫病。

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⑧ 值得注意得是, 弓形虫尚可损害皮肤、肌肉、肝脏、肾脏及其他多种器官; 有时还可与风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒混合感染, 引起TORCH 综合征。

在临床上, 通过详细地询问病史、全面的体格检查, 并进行仔细地分析、综合, 排除其他疑似疾病, 必要时还可对病变部位(如脑部, 肝脏)作CT 扫描,一般不难作出初步诊断。然而, 如欲确诊, 则需要进一步进行以下相关检查。

5 实验诊断

（1） 病原学诊断

在寄生虫病诊断中，病原学检查是寄生虫感染确诊的主要依据。因此有条件获取弓形虫病原的都不应轻易放弃该检查环节，这也是寄生虫实验诊断的一条基本原则，如在送检的标本中检测出弓形虫虫体，则可以确诊。目前确诊送检标本中是否有弓形虫虫体有以下方法：

① 涂片染色法。取急性期患者的腹水、羊水、脑脊液、骨髓液或血液等，

离心后取沉淀物作涂片。也可采用活组织穿刺物涂片，经姬氏染液染色，镜检弓形虫滋养体，一般用于急性感染的确诊。慢性感染一般通过银染色检查包囊壁和PAS染色缓殖子确诊。但常规染色方法常会造成虫体辨

识困难，轻度感染可能出现假阴性结果，应反复检查，避免漏诊；

② 动物接种分离法或细胞培养法。将待检样本（一般为患者的组织或体液）

接种于小鼠腹腔，一周后剖杀，取腹腔液镜检滋养体。阴性者需要盲目传代三次以上

（2） 免疫学诊断

由于从患者样本中直接检查出弓形虫比较困难，因此免疫学检测一直是最常用的方法，其中染色实验、间接血凝试验、酶联免疫吸附试验等，均有较好的特异性和敏感性。

① 染色试验（DT） 该方法是弓形虫病所特有的免疫血清反应诊断方法。

其原理是弓形虫在与阴性血清作用后仍能被碱性美蓝染液深染，但与

阳性血清（抗体）作用后则不着色或着色很淡。据此便可判断被检者

血清中是否含有弓形虫抗体。该法的优点是特异性强敏感性高，感染

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后数天即可出现这种抗体，可用于早期诊断；缺点是所用抗原为活虫，安全性差，辅助因子较难获得。

② 间接血凝试验（IHA） 其临床意义在于弓形虫病的IHA一般在病后１

个月左右出现阳性。血清抗体效价1:64为既往感染，1:256可能为近期感染，1:1024为现在急性感染。IHA操作简便，敏感性高，适用于现场检测，可用以辅助诊断及作为流行病学调查和综合查病的方法；缺点是重复性差，致敏红细胞不稳定

③ 酶联免疫吸附试验（ELISA） 该法利用酶的高催化效率，显著放大反

应效果，使检测灵敏度大大提高。陈飞兰等建立及并应用了实验动物弓形虫ELISA检测方法，发现IgG ELISA检测抗弓形虫抗体检测方法具有较好的敏感性及特异性，结果客观，易于定量等特点，通过进一步研究及规范可推广应用于实验动物弓形虫抗体的检测。陈丽萍等将ELISA检测IgG的方法进行了改良，基于杨惠珍等提纯抗原的方法，制成检测弓形虫病IgG抗体的试剂盒，并通过阻断试验和血吸虫、肝炎等阳性血清的检测证实了ELISA反应的特异性，抗弓形虫抗体试剂盒通过稳定性、重复性的测试，灵敏度和稳定性较好，可应用于临床检测和辅助诊断。

还有人采用间接免疫荧光抗体试验（IFA）、补体结合试验（CT）、胶乳凝集试验（LA）等方法检测血清弓形虫抗体

（3） 核酸检测技术（分子生物学诊断）

随着弓形虫分子生物学的研究，核酸检测技术在弓形虫检测领域得到迅速应用，避免了血清学免疫诊断不适用于免疫抑制患者如器官移植病人及艾滋病并发的弓形虫感染，目前具体包括以下几种技术。

① 基于PCR技术的检测手段 19xx年，Burg等首先将PCR技术用于弓形

虫病诊断的研究，克隆了B1基因并依据其基因序列设计了一对引物，建立了弓形虫DNA的PCR方法，其灵敏度可达检测出单个弓形虫DNA

的水平，且其不受机体免疫力等因素的影响，靶基因的高度保守性，决定了PCR检测的高度特异性。目前常用的PCR目的基因有B1、P3O、

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TGR1E等。在上述目的基因中，B1由于其在虫体基因组DNA上重复35次，因此敏感性较高。为了检测B1基因的特异性，同时对一些与弓形虫密切相关的生物体以及在免疫受损患者中枢神经系统可能发现的虫体进行B1基因的PCR，无一例阳性，结果表明B1基因具有高度特异性。20xx年，Homan等通过构建基因文库，筛选出弓形虫基因组内一个重复序列（重复次数为200~300次，重复单元为529bp），该序列具有高度的敏感性和特异性，被检测的60个弓形虫虫株都含有此序列，而其他种类的寄生虫均不存在，由于其重复次数远大于B1，且敏感性、特异性和保守性更高，是值得深入研究的理想靶基因。虽然现在研制的PCR试剂盒方便、快捷，但罗新萍等的研究所反映出的国产TOX-PCR试剂盒结果的真实性、可靠性及适用范围等问题应引起大家的关注。

② 定量PCR（quantitative PCR，Q-PCR） 特别是实时定量PCR的出

现，不仅弥补以往PCR只能定性的缺点，更是以其低污染、高灵敏、高特异、准确定量和实时监测等特点，受到临床实验室的欢迎，已成为寄生虫检验方法的发展趋势。Gutierrez等以529bp DNA片段为靶基因，建立实时定量PCR，来检测注射了弓形虫包囊的已怀孕90d的血清阴性母羊，并对其胎羊组织及母羊多个部位组织进行了检测。结果发现胎膜是理想的检测样品，结果准确可靠。近些年来还出现了双重和多重实时定量PCR 的技术，Mahittikorn等构建双重实时定量PCR检测感染弓形虫的免疫抑制小鼠中SAG1和BAG1基因的表达，实验结果表明双重RT-PCR是一种简便快速、敏感，重复性好的方法，尤其适用于大样本的分析，提高了实验室检测的效率。

③ 核酸分子杂交 该法所用探针多为病原体的特异核酸序列，可用来

检测病原体是否存在，其技术关键在于获得特异性核酸探针，该法直接检测寄生虫基因，比血清方法可靠。Angel等从弓形虫基因组DNA文库中筛选分离出了一个在基因组中有近1000拷贝的440bp片段，采用放射性同位素标记，一次探针可检测80pg的弓形虫DNA。近年来，非同位素标记探针技术将免疫学方法与DNA检测方法有机地结合在

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一起，大大拓宽了DNA杂交法的应用范围，而且避免了放射性同位素标记的探针固有缺点和危害性。近年来发展起来的DNA芯片技术，以其特异性强，灵敏度高，操作简便和可实现自动化以及高通量高精确的优点，成为疾病诊断的一个发展方向。与传统的检测方法相比，DNA芯片可在一次实验中同时快速、敏感地检测上千个基因，获得大量诊断信息，解决了操作效率低和结果客观性差等问题，适合大规模流行病学调查。David等调查显示，基因芯片已经用于检测感染状态下弓形虫与宿主基因表达情况。已有研究者尝试采用DNA芯片技术进行弓形虫病的分子生物学诊断，随着弓形虫遗传学和弓形虫核酸微阵列技术的研究进展，DNA芯片将在弓形虫病的基因诊断方面发挥重要作用。

6 防治原则

（1） 加强畜禽及可疑动物的监测隔离；

（2） 加强饮食管理及肉类食品卫生检疫；

（3） 不吃半生的肉、蛋、奶制品；

（4） 孕妇不接触猫、狗等宠物；

（5） 定期对孕妇进行检查，在怀孕5个月内发现本虫感染，一般应

终止妊娠。

7 治疗方法

（1） 对急性期患者应及时治疗，但目前尚无十分理想的药物。乙

胺嘧啶、磺胺类药物如复方新诺明，对增殖期弓形虫有抑制作用，这两类药物联合使用可提高疗效；

（2） 孕妇如感染确诊，应立即服用螺旋霉素；

（3） 若胎儿确诊弓形虫病，孕妇应立即服用乙胺嘧啶、磺胺嘧啶

与螺旋霉素交替使用。

【参考文献】

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第二篇：犬弓形虫病的诊治

目 录

摘要 …………………………………………………………………………………………1 关键词 ………………………………………………………………………………………1 Abstract ……………………………………………………………………………………1 Key words ……………………………………………………………………………………1 引言……………………………………………………………………………………………1

1.材料与方法 ……………………………………………………………………………… 2

1.1材料 …………………………………………………………………………………… 2

1.1.1试验动物 ……………………………………………………………………………2

1.1.3试验试剂………………………………………………………………………………2

1.2方法 ……………………………………………………………………………………2

1.2.1疾病调查与临床检查…………………………………………………………………2

1.2.2实验室诊断 …………………………………………………………………………2

1.2.3病原学诊断……………………………………………………………………………3

1.3治疗………………………………………………………………………………………4

2.结果与分析 ………………………………………………………………………………5

2.1结果………………………………………………………………………………………5

2.2分析 ……………………………………………………………………………………6

3.类症鉴别 …………………………………………………………………………………6

3.1犬瘟热 …………………………………………………………………………………6

3.2犬传染性气管支气管炎 …………………………………………………………………6

3.3犬疱疹病毒感染 …………………………………………………………………………7

3.4大副流感 …………………………………………………………………………………7

3.5犬传染性肝炎 ……………………………………………………………………………7

3.6感冒 ………………………………………………………………………………………7

3.7弓形虫病与艾滋病 ………………………………………………………………………8 参考文献………………………………………………………………………………………8 致谢 …………………………………………………………………………………………8

犬弓形虫病的诊治

摘要：犬弓形体病又称犬弓形虫病,由龚地弓形体（Toxoplasma gondii）引起的人和动物共患的寄生在细胞内的一种原虫病，病原为球虫目、弓浆虫科、弓浆虫属,其形态和结构分为5型,即滋养体（或子孢子）、包囊、裂殖体、配子体和卵囊，前2型出现在中间宿主体内，后3型出现在终末宿主体内。病犬主要表现为中枢神经紊乱，不安，食欲减退或拒食，粪便干燥，运动失调，最后抽搐死亡；有的听觉迟钝，呼吸困难，呆立不动，最后衰竭死亡。怀孕母犬发生流产或早产。随着国内宠物犬饲养数量的增加，应对弓形虫感染的情况于以重视。现就犬弓形体病的鉴别诊断、治疗等作一浅谈。

关键词：弓形虫；治疗；鉴别诊断

The diagnosis and treatment of toxoplasmosis for dogs Abstract：Canine toxoplasmosis is a kind of zoonosis which is caused by protozoon parasiticed on cells, and the protozoon belong to coccidian and toxoplasm as well as Toxoplasm. The morphology and structure of the protozoon can be classed into five kinds, including trophont (sporozoite), cyst, schizont, sporadin and oocyst, and the first two types are emerged in the body of intermediate host, while the other three types in the final host. The presenting symtoms of a sick dog are as follows: CNS disorder, anxiety, decreased food appetite, dried dung,

incoordination and die in convusion eventually, while some dogs show amblyacousia, lose their breath and last exhaustion dies. In addition, it may also leads to a miscarriage and premature bith. With the increasing of pet dogs, we should emphasize the infection of toxoplasmosis. This article is on the differential diagnosis and the treatment of toxoplasmosid for dogs.

Keywords: toxoplasmosis；treatment；differential diagnosis.

引言：弓形虫是由刚弟弓形虫(Toxoplasma gondil)引起的一种原虫病。属于人畜共患病，犬多为隐性感染，有时也可引起发病。症状类似犬瘟热、犬传染性肝炎，主要表现为发热、咳嗽、厌食、精神萎靡、虚弱，眼和鼻有分泌物，粘膜苍白，呼吸困难，甚至发生剧烈的出血性腹泻。少数病犬有剧烈呕吐，随后出现麻痹和其他神经症状。怀孕母犬发生流产或早产，所产仔犬往往出现排稀便、呼吸困难和运动失调等症状。血液检查：急性期可检查到红、白细胞减少，中性粒细胞增多，中性粒细胞减少和单核细胞增多者较少见；慢性病例的白细胞总数增多，主要为嗜中性粒细胞增多，血小板减少，但没有出血倾向。

19xx年Lave ran发现弓形虫的存在。在这100多年中科学家们前仆后继的研究。已经积累了大量资料，把弓形虫在寄生虫分类学之内安排了位置，球虫亚纲，真球虫目，等胞球虫科，弓形体属。清楚了他的习性，它是专性细胞内寄生虫，人畜共患。科学家们，几乎调查了世界所有动物，哺乳、爬行、鱼类、鸟类、昆虫、包括寄生虫-蛔虫等都能感染。随着科学的进步，创造了21种化验方法，但应用于临床中时发现，就连最近各地医院用的试剂盒，在实践中证明只有一定的参考价值，但参考价值并不大，

经常出现漏诊和误诊。本来患有严重弓形虫病，用试剂盒可能检验不出来，也有已经静止的病情，用试剂盒能检验出来阳性。

科学家们发现可以抑制弓形虫的药物有：乙胺嘧定、磺胺、四环素族药物、螺旋霉素等。这些药物都能抑制弓形虫滋养体，对包囊无效，如果长时间使用，会产生药毒性，达不到治愈弓形虫的目的。文章对弓形虫病的发病机理、临床症状、病理变化、诊断及其与犬瘟热的鉴别诊断进行介绍，希望能够给从事临床工作的兽医提供诊断参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物 犬4只；小白鼠10只

1.1.2 试验器材 体温计；听诊器；显微镜；培养皿；酒精灯；微量吸管；血细胞计数板；恒温箱；高压蒸汽灭菌器；试管架；灭菌小试管；煮沸消毒器；灭菌注射器；外科剪；棉棒；镊子；红细胞稀释管；载玻片；盖玻片；PCR扩增仪；离心机；离心管。

1.1.3 试验试剂 血红蛋白剂；稀释液；pH7.0～7.2的缓冲液；姬氏染液；CDV 试剂盒；维生素B6；阿托品；止血芳酸；中药；复方sm2；糖盐水；维生素B12；0.85％氯化钠溶液。

1.2 方法

1.2.1 疾病调查与临床检查 疾病调查：应用正向间接血凝试验,对33只犬血清进行了弓形虫抗体检测；临床检查:①视诊:观察犬精神，食欲，呕吐，粪便，姿态，眼睛，鼻镜，口腔，肛门，皮肤是否异常。②扣诊:用手指叩打肺部体表，听肺部音响。③听诊：借助听诊器听心音、呼吸音、查心跳数、呼吸数。

1.2.2 实验室诊断

1.2.2.1 血常规检查 于后肢外侧小隐静脉采血10-20ml。加入3.8%枸橼酸钠溶液2ml做抗凝处理，再用0.85％氯化钠溶液稀释，备用。① 红细胞计数：用5ml吸管吸取红细胞稀释液4ml置于试管中。用沙利氏吸血管吸取全血样品至20μl刻度处（或吸血至刻度10处，红细胞稀释液用2ml）。擦去吸管外壁多余的血液，将此血液吹入试管底部，再吸、吹数次，以洗出沙利氏管内粘附的血细胞，然后试管口加塞，颠倒混合数次，再用毛细吸管（或玻棒）吸取已稀

释好的血液，放于计数室与盖玻片接触处，即可自然流入计数室中。计数时，先用低倍镜，光线要稍暗些，找到计数室的格后，把中央的大方格置于视野之中，然后转用高倍镜。在此中央大方格内选择四角与最中的五个中方格（或用对角线的方法数五个中方格），每个中方格有16个小方格，所以共计数80个小方格。计数时压在左边双线上的红细胞计在内，压在右边双线上的红细胞则不计数在内；同样，压在上线的计入，压在下线的不计入。② 白细胞计数：用1ml吸管吸取白细胞稀释液0.4ml置一小试管中。用沙利氏管吸取被检血至20μl处，擦去管外粘附的血液，吹入小试管中，反复吸吹数次，以洗净管内所粘附的白细胞，充分振荡混合，再用毛细吸管或沙利氏吸血管吸取被稀释的血液，充入已盖好盖玻片的计数室内，静置1～2min，低倍镜检查。将计数室四角四个大方格内的全部白细胞依次数完，压在左线和上线的计入，压在右线和下线的不计入。

1.2.2.2 细菌学检验 无菌挑取病犬的鼻分泌物接种于普通琼脂培养基上，放入37°C的恒温箱中，培养24h。

1.2.2.3 CDV快速诊断法 ① CDV试纸诊断：采眼睛、鼻镜处的分泌物适量，放入测试溶液10—15分钟后，滴入测试板加样处3-4滴，5分钟后观测结果。

1.2.2.4 血液检查 试验方法如下：① 薄血膜制片：在载玻片1/3与2/3交界处蘸血一小滴，以一端缘光滑的载片为推片，将推片的一端置于血滴之前，待血液沿推片端缘扩散后，自右向左推成薄血膜。操作时两载片间的角度为30～45℃，推动速度适宜。理想的薄血膜，应是一层均匀分布的血细胞，血细胞间无空隙且涂血膜末端呈扫帚状。② 姬母萨染色：用pH7.0～7.2的缓冲液，将姬氏液稀释；比例约为15～20份缓冲液加1份姬氏染液。用蜡笔划出染色范围，将稀释的姬氏染液滴于已固定的薄血膜上，染色半小时(室温)，再用缓冲液冲洗。血片晾干后镜检。

1.2.3 病原学诊断

1.2.3.1 脏器涂片检查 取急性型病死或剖检病犬的实质脏器(肺、肝、脑、肾、心、淋巴结等)作涂片标本检查，其中以肺脏的抹片因背景清楚，检出率较高。涂片自然干燥后甲醇固定，用革兰氏或瑞氏、姬姆萨氏染色，在450

倍的显微镜下观察，寻找有无增殖型虫体。此法适用于急性型病例，而且生前未用过抗原虫药物，检出率则较高。慢性病例可检查脑中的包囊，即将脑组织置乳钵中加生理盐水研磨，然后用低倍镜(100)检查脑组织悬浮液有无呈圆形或椭圆形的包囊，在脑组织悬液中，包囊颜色深暗易于发现。但有些花粉粒形状与包囊相似，故操作时器皿均须保持清洁。包囊的最后确定，必须通过涂片或切片染色，在高倍镜或油镜下进行检查证实。

1.2.3.2 集虫法检查 取肺和肺门淋巴结研碎后加10倍生理盐水过滤，500 r/min离心3 min，取上清液再1 500 r/min离心10 min，取沉渣涂片，干燥、固定、染色、镜检。

1.2.3.3 动物接种 取虫体寄生较多的部位(肺、肝、脑、淋巴等)组织，研碎后加十倍生理盐水，经纱布过滤，滤液经2 500 r/min离心15 min，废弃上清液，加入含500～1 000 IU(μg)/ml青、链霉素的生理盐水适量。充分混合后接种小鼠，每只0.5 ml，腹腔注射(亦可脑腔内注射)，观察3～4周。若小鼠出现被毛粗刚、呼吸迫促症状或死亡，可用注射器抽取腹腔液滴在载玻片上镜检，如发现增殖型虫体即可确诊。若初代接种的小鼠可能不发病，可用被接种小鼠的肝、淋巴结等组织按上法制成乳剂盲传三代，可能从病鼠腹腔液中发现虫体。也可将不发病的小鼠用乙醚麻醉后切断腋下动脉，采取血液分离血清,-20℃保存作染色试验。同时取脑组织少许置于载玻片上，加入2滴生理盐水，盖上盖玻片轻压，镜检有无包囊型虫体。

1.2.3.4 皮内变态反应诊断 (1)抗原制备：取人工感染弓形体的小鼠腹腔液，用离心法将虫体浓缩，加水反复冻融或用超声波处理，再用丙酮提纯而冻干后备用。(2)注射观察：按规定将冻干的抗原稀释后，用结核菌素注射器准确地在犬的耳翼中央皮内注射0.2 ml，48 h后判定结果。(3)判定标准：注射部位红肿直径超过15 mm者为阳性(+)，在10～15 mm之间者为可疑，小于9 mm者为阴性(-)。

1.3 治疗 ①补液补营养：由于病犬脱水，不食，补充液体和能量等营养物质是很重要的，维生素10.5g，ATP20mg，辅酶A100单位，肌苷50mg。加入200ml糖盐水中静滴。每天输液至少一次，每次持续38小时，连用6天。维生素B12 0.5mg隔日一次，肌注，复合维生素B 2ml肌注，1次1天。②用复方sm2

片剂按20-30mg/Kg体重口服，1d 2次，连用6天，首次剂量加倍，由于其溶解度较低，较易在尿中析出结晶，内服时应增加饮水。③止吐，止血，解痉，维生素B6 10mg，阿托品0.5mg肌注。止血芳酸0.05g，止血敏15mg加入50mlG5中静滴。④中药治疗：菌栀黄（菌阵、栀子、黄岑、金银花）具有清热解毒，泻火退黄，利湿止吐等功效，取菌栀黄10ml加入200ml G10中，缓慢静滴，每天一次，连用七次，板蓝根清热解毒，凉血利咽，抑菌抗病毒，2ml/次，肌注，Bid连用5天，大蓟粉，止血，凉血，2g/次，每天1次，口服，连用7天。 2 结果与分析

2.1 结果

2.1.1 疾病调查结果 抗体阳性4份,抗体阳性检出率为12.1%。

2.1.2 临诊结果 听诊病犬肺局部呼吸音粗砺，浊音区肺泡音减弱，有湿性锣音或捻发音。叩诊病犬肺部呈局灶性浊音区。视诊病犬结膜潮红，眼角有脓性分泌物，鼻镜干燥，角化过度而皲裂，鼻孔内有外有浆液性或脓性鼻液。病犬呼吸困难，气喘，呈腹式呼吸，湿咳，有痰。病犬呕吐不良，拱背吊腹，腹泻，里急后重，排灰褐色或咖啡色粥样便，腥臭。瘦弱，精神沉郁，行走摇晃，肋间肌和腹肌有轻微的阵发性颤搐，足垫角化干裂。

2.1.3 实验室诊断结果 血常规检查，红细胞4.0×106个/mms，白细胞3500个/mms。白细胞分类：中、淋、单、酸分别70：16：4：10。4只病犬红细胞减少，白细胞增多，主要为嗜中性粒白细胞增多，血小板减少，但没有出血倾向。细菌学检查，无细菌生长。CDV试纸诊断呈阴性，PCR诊断试纸快速诊断呈阳性。镜检，发现有数量不符的一端稍尖，另一端钝圆，呈香蕉形或弓形的滋养体，虫体胞等呈淡兰色，核呈紫红色，位于虫体中部偏向钝圆的一端，每一个视野中有1-5个虫体。

2.1.4 病原学诊断结果 脏器涂片检查、集虫法检查、动物接种，境检均观察到虫体。皮内变态反应诊断，注射部位红肿直径21mm为阳性。

2.1.5 治疗结果 1只病犬急性发病，治疗第三天死亡。将其解剖作为实验室诊断材料。其余3只，2只恢复良好，第三天起逐渐恢复食欲，呼吸道、消化道症状逐渐消失，已不见肋间、腹肌颤搐，基本痊愈。七天后出院。1只治疗效果不明显，7天后精神仍沉郁，食欲不振，呼吸有所好转，遂更改治疗方案，对

病犬每日给予磺胺嘧啶(每公斤体重73mg)和乙胺嘧啶(每公斤体重0.44mg)。氯林可霉素，每日总剂量每公斤体重10-40mg，并进行少量多次喂药，有助于减轻食欲减退、呕吐或腹泻等副作用。2天后病情有所好转，5天后除瘦弱外基本痊愈。治愈率75%。

2.2 分析

① 弓形虫病是一种人畜共患病，寄生十分广泛。犬大多表现为隐性感染。本病发生于皮肤癣菌病三天后，可能是由于机体抵抗里下降，加上潮湿的环境，造成不良，表现临床的弓形虫携带者继发感染。

② 杂该犬弓形虫病诊治过程中发现，该病流行特点，临床症状与犬瘟热病有相似之处，仅依靠临床症状很容易与犬瘟热特别是神经型犬瘟热相混淆。因此在流行病学分析，临床症状等综合判定后螟害必须以检测病原体或证实血清中抗体滴度升高才能确诊。

③ 快速诊断，即使用药是控制本病的关键。弓形体是常见的寄生虫病，但犬一旦感染出现呼吸道、消化道疾病症状时，只有磺胺类药物与抗菌增效剂配合使用才能对本病早期有交好的疗效，其他抗生素和抗病毒药物进行治疗是无效的。另外，配合重要治疗，用药后2-3d即可见效。

④ 在治疗过程中，若体温升高的病例可肌肉注射30%安乃近2m1，1日3次。

⑤ 不喂生肉，并防止犬捕食啮齿类动物，防止猫粪污染饲料及饮水，能较好地控制预防犬弓形虫病。

⑥ 对病犬环境及用具用3%氢氧化钠溶液进行喷洒消毒。与犬有接触的人员要树立安全意识，认真做好个人防护，防止感染。

⑦ 必要时采取药物预防，即定期给犬或其他动物服用磺胺类药物，根据犬群或养殖场的情况而定，如用药1周，停药1周，再用1周。

3 类症鉴别

3.1 犬瘟热

类似处：有传染性。发热，厌食，沉郁，咳嗽，眼、鼻有分泌物，呕吐，病初白细胞减少。

不同处：病程中表现双相热，眼结膜潮红、充血，有时角膜发炎甚至发生

溃疡。在病程的第三节段常发生头跳，脊柱抖动和四爪抖动，采取病料处理后镜检，可见红色包涵体。

3.2 犬传染性气管支气管炎

类似处：有传染性。发热，减食，沉郁，咳嗽，眼鼻流分泌物。

不同处：病原为气管支气管败血波氏杆菌，初病时体温不高，有混合感染时体温才升高，单独感染症状较轻。 X 线摄影，可见纹理增强。检验，无弓形虫。

3.3 犬疱疹病毒感染

类似处：有传染性。幼犬多发，沉郁，发热，食欲不好，咳嗽，流鼻液，呼吸困难，有时出现运动失调，母犬流产。

不同处： 1 周龄以内的幼犬得病，死亡率在 80 % 以上，母犬阴道黏膜散发淤血和出血，流产和死产。公犬包皮浆性分泌增多，但 4 ～ 5 天即自行恢复。剖检，各实质脏器表面散在直径约 2 ～3 毫米的灰白色坏死灶和小出血点，最常见的特征是在变性细胞的核内，于核膜处出现嗜酸性球形小体。用已知犬疱疹病毒免疫血清进行中和试验，即可出现明确结果。

3.4 大副流感

类似处：发热，鼻流液，咳嗽，减食，委顿。

不同处：咳嗽较剧烈，扁桃体红肿。剖检，肺脏有少量出血点（无白色结节），感染后第 1～ 6 天在鼻液、气管、支气管及周围淋巴结检出犬副流感病毒（ CPIV ）。

3.5 犬传染性肝炎

类似处：有传染性。发热，厌食。鼻有分泌物，有出血性腹泻，白细胞减少。有时呕吐。

不同处：剑状软骨处触压肝区有疼痛，结膜潮红，角膜浑浊（肝炎性蓝眼) , 扁桃体肿大，有蛋白尿，如有出血，常出血不止，凝血时间延长。剖检，常见皮下水肿，腹腔有积液，常含有血液，暴露空气中易凝固。胆囊壁增厚，黏膜有纤维蛋白沉着（具有特征性）。肝脏稍肿大，淡棕色或血红色，易碎。肝细胞及窦状隙内皮细胞核内有包涵体，其间有透明带，将感染病料制成反应原接种于皮内，如有红肿、热痛，即为阳性。

3.6 感冒

类似处：发热，沉郁，厌食，咳嗽，流鼻液。

不同处：无传染性。多因骤寒、洗澡、睡于空调、风扇下发病，不出现消瘦、呕吐、运动失调、出血性腹泻等症状。

3.7 弓形虫病与艾滋病 艾滋病毒主要侵犯T4淋巴细胞、单核巨噬细胞等。弓形虫寄生在人体所有的有核细胞，包括T4淋巴细胞。因为T4淋巴细胞壁比较厚，寿命是3-4年。对弓形虫有较强的抑制作用，弓形虫在T4淋巴细胞内繁殖极其缓慢。而T4淋巴细胞内要是有艾滋病毒，它就失去了对弓形虫的抑制能力，弓形虫在其内可以安逸的繁殖成标准的弓形体。标准的弓形体有极强的致病能力，所以艾滋病患者多死于弓形体爆发。

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