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第__5__次课                             授课时间：20##年11月29日～11月30日

 

第二篇：胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇

实验六 胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇

【原理】

血清中总胆固醇(total cholesterol，TC)包括游离胆固醇(free cholesterol，FC)和胆固醇酯(cholesterol ester，CE)两部分。血清中胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸(FFA)，胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成△4-胆甾烯酮和过氧化氢，H2O2在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC含量成正比。 【试剂】

1．胆固醇液体酶试剂组成(具体含量见相关文献) GOOD's缓冲液(pH6.7) 50mmol/L 胆固醇酯酶 ≥200U/L 胆固醇氧化酶 ≥100U/L 过氧化物酶 ≥3 000U/L 4-AAP 0.3mmol/L 苯酚 5mmol/L

2．胆固醇标准溶液5.17 mmol/L (200 mg/dl) 精确称取胆固醇200 mg，用异丙醇配成100 ml溶液，分装后，4℃保存，临用取出。也可用定值的参考血清作标准。 【操作步骤】 终点法检测TC按下表依次加样。

酶法测定TC操作步骤

项目 血清(μl) 标准液或定值血清(μ

l) 蒸馏水(μl) 酶试剂(μl)

－ 1.50

－ 1.50

50 1.50

测定管 50 －

标准管 － 50

空白管 － －

混匀后，37℃保温5 min，用分光光度计比色，于500 nm波长处以空白管调零，读出各管吸光度。 【计算】

血清TC (mmol/L)＝

测定管吸光度

×胆固醇标准液浓度

标准管吸光度

【参考范围】 血清参考值：3.0～5.20 mmol/L；危险阈值：5.20～6.20 mmol/L；高胆固醇血症：≥6.20 mmol/L。

【临床意义】

1．TC增高 常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症(如家族性高胆固醇血症、家族性ApoB缺陷症、多源性高胆固醇血症、混合性高脂蛋白血症等)、糖尿病、肾病综合征、总胆管阻塞、甲状腺功能减退、肥大性骨关节炎、老年性白内障和牛皮癣。

2．TC降低 常见于低脂蛋白血症、贫血、败血症、甲状腺功能亢进、肝脏疾病、严重感染、营养不良、肠道吸收不良和药物治疗过程中的溶血性黄疸及慢性消耗性疾病，如癌症晚期等。

【注意事项】

1．试剂中酶的质量影响测定结果。

2．若需检测游离胆固醇浓度，将酶试剂成分中去掉胆固醇酯酶即可。

3．检测标本可为血清或者血浆(以肝素或EDTAK2抗凝)。

【评价】 本方法线性范围为≤19.38 mmol/L (750 mg/d1)。

本方法特异性好和灵敏度高，既可用于手工操作，也可自动化分析；既可作终点法检测，也可作速率法检测。

在终点法中血红蛋白高于2g/L时引起正干扰；胆红素高于0.1g/L时有明显负干扰；血中维生素C与甲基多巴浓度高于治疗水平时，会使结果降低。但是在速率法中上述干扰物质影响较小。高TG血症对本法无明显影响。

检测TC的血清(浆)标本密闭保存时，在4℃可稳定1周，－20℃可稳定半年以上。