物品清洗基本流程

预洗（自来水）→清洗（手工式机械+酶）→漂洗（自来水）→漂洗2（离子水或蒸馏水）→消毒（温热方法）→润滑（水溶性油）→干燥（烘干或擦干）

诊疗器械、器具和物品的处理流程 回收→分类→清洗→消毒→干燥→检查保养→包装→灭菌→

储存→发放

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布类包装标准

1、能保持阻隔细菌及气体渗透的功能，能有利于蒸汽穿透，进行灭菌。

2、包装后的物品应容易开启包装且不会污染内容物。

3、包装后的物品应便于运输，并保持无菌状态。

布类包装程序

1、工作台必须清洁，无杂物、污物。

2、工作人员穿工作服、戴帽、口罩、手套。

3、物品准备包括：包布、化学指示胶带，化学包内指示卡、笔。

4、检查包布是否完整无缺，应无洞、无撕裂、无污渍、无颜色染渍，无粘附的棉絮和纤维。

根据待包装物品选择正确的包装方法。

包装时不能挤压，松紧适宜。

包裹不可大于30×30×25cm,重量不可重于5公斤，且包装严密包内物品齐全。

使用正确的灭菌标签进行封口，并注明灭菌日期物品名称及工号。

5、标准试验包按要求放入需要物品按上法进行包装。

2

高压灭菌操作标准及程序

1、灭菌前的准备：每日清晨、灭菌工作开始前检查并清洁灭菌器内外，检查蒸汽阀，电源及汽水阀是否处于工作状态，

2、灭菌程序进行前，先检查灭菌物品是否达到标准，内容包括：物品包装完整，清洁无破损，包裹上有化学指示胶带，包裹上已注明科室灭菌日期。

3、装戴，据物品种类按灭菌器的要求进行装载，灭菌器内物品的放置必须有利于蒸汽的充分穿透。

原则：

（1）灭菌包不能碰到灭菌器炉壁，以免吸收冷凝水，

（2）盆具、瓶子等灭菌包放置时，必须倾斜、侧立或倒立于灭菌柜内，避免空气及冷凝水滞留有利于排水。

（3）布类物品须竖立，有利于蒸汽由上而下渗透时通畅。

（4）混合物品摆放时，布包及敷料包应放于上层，以利于内藏的空气受重力作用而排走，器械包放于下层。

4、认真记录每锅的时间、温度、及所灭菌物品的种类。

5、灭菌结束后，关闭灭菌器电源开关。

3

过期物品处理程序

1、布包类：所有过期的布类物品，必须把整个布包拆除，送往洗衣房洗后，才重新使用。

2、器械包类：

按污染器械进行处理。

3、敷料类：下收下送人员将过期敷料送至包装区，检查敷料是否完整、清洁，将敷料重新包装，并填写指示胶带，贴于包装外，进行灭菌处理。

4

去污区工作质量控检查标准

1、装载已使用过物品的运输车，不可进入污染区以外的区域，应用“污”字标记。

2、清洗使用过的物品时，一律戴口罩，帽、手套、穿隔离衣、专用鞋。

3、清洗时使用的手套，不可再接已清洗过的物品。

4、凡隔离的器械及物品应先经消毒灭菌处理。

5、正确使用各种消毒剂。

6、玻璃制品执行四步清洗法。

7、针头无钩、无血、无污、通畅。

8、按器械处理流程正确清洗，消毒各类器械。

9、清洗器应定时维护和保养。

5

包装区工作质控检查标准

一、包装区的物品必须经过去污消毒过程方可进入。

二、各种包布，要一用一洗一更换，保证无缺损。

三、包装的包裹大小符合规定，器械包≤7公斤；敷料包≤5公斤体积≤30×30×25厘米，并且包装严密，松紧适宜，包内物品齐全。

四、器械应去污，无锈，进行保养，关节处灵活，卡口紧密，锐器刃面锋利。

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灭菌区工作质控标准

一、按灭菌器的使用说明正确进行操作。

二、定时定期检测灭菌器的功能。

三、用储槽或特制灭菌盒存放敷料、空针，进入压力蒸器灭菌器前，先打开筛孔。

四、出锅后必须封闭储器槽及有孔器皿。

五、灭菌后的物品必须有灭菌标记及日期，不潮湿。

六、每日定时清洁灭菌器。

七、所用灭菌过程应记录完整。

7

无菌物品存放区工作质控标准

一、入室前应更衣、洗手、换拖鞋、戴口罩、帽子。

二、物品分类放置，按消毒日期先后顺序摆放整齐。

三、所有灭菌物品标记清楚，凡过期物品一律不可发放使用。

四、在有效期内已拆封而未用的物品要重新包装，灭菌后才可使用。

五、无菌柜定期擦拭。

六、尽量减少对无菌包的触摸。

8

下收下送工作质控标准

一、使用封闭式下收下送车，有“污”、“洁”标记。

二、回收及发放物品要分车分人进行。

三、清点数目并签字。

四、使用后的车辆应清洁消毒。

9

无菌物品质量检查标准

一、无菌物品应包装严密。

二、包内放指示卡，包外贴有化学指示胶带，以监测灭菌

三、无菌物品所用包布应无污，无洞，无染渍。

四、包内器械敷料应齐全。

五、标记清清楚楚（灭菌日期、失效期等）

10 效果。

器械检查标准

一、器械外表及外形是否清洁及完整。

二、将器械做咬合张开数次，检查开关的活动性及松紧度。

三、具有咬合性能的器械合闭时，两边咬齿尤其是尖端部位应完全对合。

四、检查器械上螺丝的稳定程度，防止松脱。

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供应室工作质控小组计划

为确实做好重复使用的器械器具，和物品的清洗、消毒、灭菌工作，安全无误地保证无菌物品的及时供应，更好地服务于临床，特做计划如下：

第一周：各种仪器、设备运行是否正常，护理人员能否正确使用并及时保养维护。

第二周：去污区工作质量检查。

第三周：清洁区工作质量检查。

第四周：无菌物品的储存与发放管理情况。

12

 

第二篇：临床微生物室标准操作程序

遂昌县中医院 临床微生物室 标准操作程序

SOP

临床微生物室标准操作程序（SOP）目录

1. 标本采集与送检原则标准操作程序----------------------WSW-SOP-1

2. 血液及骨髓标本的采集标准操作程序——————————WSW-SOP-2

3. 呼吸道标本留取标准操作程序—————————————WSW-SOP-3

4. 尿液标本留取标准操作程序——————————————WSW-SOP-4

5. 脓及创伤感染标本留取标准操作程序——————————WSW-SOP-5

6. 生殖道分泌物标本采集标准操作程序——————————WSW-SOP-6

7. 粪便标本采集标准操作程序——————————————WSW-SOP-7

8. 穿刺液标本留取标准操作程序--------------------------WSW-SOP-8

9. 脑脊液、胆汁标本采集标准操作程序——————————WSW-SOP-9

10. 组织标本的采集标准操作程序—————————————WSW-SOP-10

11. 静脉道管标本采集标准操作程序————————————WSW-SOP-11

12. 眼、耳及乳突分泌物标本采集标准操作程序———————WSW-SOP-12

13. 样本接收、核对、接种、培养标准操作程序———————WSW-SOP-13

14. 菌株的纯化、鉴定、药敏流程标准操作程序———————WSW-SOP-14

15. 普通MicroScan板接种培养流程标准操作程序——————WSW-SOP-15

16. 判读普通革兰阳性板标准操作程序----------------------WSW-SOP-16

17. 判读普通革兰阴性板标准操作程序----------------------WSW-SOP-17

18. 普通Microscan 板报告标准操作程序--------------------WSW-SOP-18

19. 常见标本培养结果解释标准操作程序--------------------WSW-SOP-19

20. KB法药敏试验标准操作程序----------------------------WSW-SOP-20

21. 超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检测标准操作程序——————WSW-SOP-21

22. β-内酰胺酶检测标准操作程序-------------------------WSW-SOP-22

23. 革兰染色标准操作程序————————————————WSW-SOP-23

24. 抗酸染色标准操作程序————————————————WSW-SOP-24

25. 解脲/人型支原体培养标准操作程序---------------------WSW-SOP-25

26. AccuStep衣原体抗原检测标准操作程序------------------WSW-SOP-26

27. ATB FUNGUS2真菌药敏标准操作程序--------------------WSW-SOP-27

28. 培养基的制备标准操作程序-----------------------------WSW-SOP-28

29. 触酶试验标准操作程序---------------------------------WSW-SOP-29

30. 氧化酶试验标准操作程序-------------------------------WSW-SOP-30

31. 芽管试验标准操作程序---------------------------------WSW-SOP-31

32. 临床微生物实验室安全标准操作程序---------------------WSW-SOP-32

遂昌中医院

临床微生物实验室 标本采集与送检原则 标准操作程序 编号：WSW-SOP-1 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

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【目的】

正确采集和处理标本是实验室取得正确结果的前提，必须予以重视。但对标本采集的方法和时间，标本的来源，实验室常不能加以控制，实验室人员有责任通过各种方式，指导医师和护士正确采集标本。特制定以下原则，以便统一标准执行。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【基本原则】

1. 送检报告单应注明被检人的姓名、性别、年龄、临床诊断、标本来源及检验

目的、抗生素使用情况，使实验室正确选用相应的培养基和适宜的培养环境。

2. 尽量在抗生素使用前采集标本。

3. 在采集血液、脑脊液、穿刺液等标本时，应严格无菌操作，避免杂菌污染。

4. 标本采集后应立即送到实验室，床边接种可提高病原菌的检出率。

5. 以拭子采集的标本如咽拭子、伤口拭子或肛拭子等，最好采用运送培养基送

检，应采用吸水性好、不宜干燥的材料取样。

6. 混有正常菌群的标本，如痰、尿、伤口拭子、不可置肉汤培养基送检。

7. 盛标本容器需经灭菌处理，但不得使用消毒剂。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期

傅石明 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 血液及骨髓标本的采集 标准操作程序 编号：WSW-SOP-2 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

第 1页，共1页

【目的】

指导血液及骨髓标本的正确采集。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【步骤】

1. 一般采血部位为肘静脉，疑似细菌性心内膜炎时，以肘动脉或股动脉采血为

宜。切忌在静脉滴注药物处（或一手滴药，另一手采血）采集血标本；

2. 选择体温上升时才血可提高阳性率。对正在使用抗菌药物而又不能停药的患

者，应在下次投入抗菌药物前采集标本。

3. 采集部位先以70%酒精擦拭。再用棉签沾取2%碘酊涂于欲作穿刺处，让其干

后再用70%酒精擦拭。

4. 全部手续再作一此（如必要）。

5. 采血量以培养液体积的1/10为宜,成人每次采血5-10ml,婴幼儿每次采血

1-5ml;

6. 骨髓采集:严格消毒后抽取骨髓0.5-1ml

7. 血液或骨髓抽出后过火，立即注入双相血培养瓶，马上充分混匀后，及时送

检。

8. 每列至少采血两次，间隔时间据病情而定，以利于提高阳性率和区别感染菌

和皮肤污染菌。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期 傅石明 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 呼吸道标本留取 标准操作程序 编号：WSW-SOP-3 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

第 1页，共1页

【目的】

指导呼吸道标本的正确采集。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【步骤】

1. 痰液标本的采集以清晨为好，因此时痰量多，含菌量大。标本收集前，病人

必须用清水漱口数次，除去口腔内大部分杂菌。然后用力自气管深部咳出痰液于无菌器皿内，及时送检。咳痰时应尽量防止唾液及鼻咽部的分泌物混入，以减少污染。

2. 痰量极少者可用45℃10%氯化钠雾化吸入导痰，一般以清晨第一口痰为好

3. 检查结核菌时，必要时可收集24小时痰液，以提高阳性率。

4. 支气管分泌物内含的细菌常能正确地反映出下呼吸道中的病理变化，标本的

采集应由专科医生利用支气管镜直接从患者支气管内采取。

5. 咽拭采集:嘱病人在留取标本之前,用清水反复漱口以减少正常菌群的污染,

将拭子越过舌根到咽后壁或悬壅垂后侧,反复涂抹数次,注意避免拭子接触口腔和舌拈膜,置无菌容器中尽快送检。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期 傅石明 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 尿液标本留取 标准操作程序 编号：WSW-SOP-4 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

第 1页，共1页

【目的】

指导尿液标本的正确采集。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【步骤】

1. 正常人尿液是无菌的，而尿液细菌培养最大的问题是杂菌污染。正常人外尿

道有大肠杆菌、葡萄球菌等存在。而这些细菌又是尿路感染中常见的病源菌。因此要作好尿液细菌学检查，首先应注意标本收集问题。

2. 中段尿采集：是临床上最常用的方法。女病人先用肥皂水或0.1%高锰酸钾水

溶液冲洗外阴部及尿道口,用无菌纱布擦拭,最后用手指将阴唇分开排尿;男病人应翻转包皮冲洗，用肥皂水或2％红汞或0.1%新洁尔灭消毒尿道口，再用无菌纱布或干棉球拭干，叫病人排尿。将尿液分成三段，第一段排掉，收集中段尿3～5ml留入试管中，立即加塞盖好送检。

3. 婴儿则先消毒其阴部，将无菌小瓶直接对准尿道以胶布粘上固定于皮肤，待

排尿后立即送检。

4. 导尿管采集尿液：一般用无菌导尿管取得尿液10～15ml，盛3-5ml于无菌试

管中，不能混入消毒剂，否则影响细菌生长。虽该可减少污染，但由于导尿有将微生物引入膀胱的危险，因此除非必要，应避免用此法。

5. 对于留置导尿者，可用碘酒消毒尿道口处的导尿管壁，用无菌注射器斜穿管

壁抽吸尿液，或消毒后解开接口，弃去导尿管前段尿液，留无污染的膀胱内尿液送检。不可从集尿袋的下端管口留取标本。

6. 做结核菌培养的尿液标本，应收集24小时全部尿液，并将沉淀部分盛于洁

净瓶内送检。

7. 婴幼儿中段尿采集困难或培养结果与病情不符时，可经耻骨上皮肤穿刺采集

无污染的膀胱内尿液。

8. 送检标本以晨尿为佳，但室温较高时，应采集即时尿液，但尿液在膀胱内至

少置留了4小时以上。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期 傅石明 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 脓及创伤感染标本留取 标准操作程序 编号：WSW-SOP-5 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

第 1页，共1页

【目的】

指导脓及创伤感染标本的正确采集。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【步骤】

1. 应首先用无菌生理盐水清洗脓液及病灶的杂菌，再采集标本，以免影响检验

结果。

2. 一般用棉拭子采取脓液及病灶的深部的分泌物，瘘管也可以无菌手续采取组

织放入无菌试管内送检。

3. 脓肿标本以无菌注射器抽取为好，也可在切开排脓时，以无菌棉拭子采取，

也可以将沾有脓汁的最内层敷料放人无菌平皿中送检。

4. 厌氧菌感染的脓液常有腐臭应予注意。采集和运送标本是否合格，对厌氧培

养是否成功至关重要，特别要注意两点：1.避免正常菌群所污染；2.由采集至接种前尽量避免接触空气。标本采取完毕应立即送往细菌室检测。如一时来不及送，应在室温内作暂短保存，一般认为不要冷藏，因冷藏对某些细菌有害，而且在低温时氧的溶解度较高。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期

傅石明 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 生殖道分泌物标本采集 标准操作程序 编号：WSW-SOP-6 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

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【目的】

指导生殖道分泌物标本的正确采集。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【步骤】

1. 尿道及尿道口标本:生理盐水清洗局部后,将无菌棉拭子插入尿道口1-2cm,

停留10余秒,轻轻旋转采集标本,置无菌容器中尽快送检;

2. 外阴糜烂、溃疡标本: 用无菌盐水和手术刀清除溃疡面,暴露出溃疡基底,渗

出物积聚较明显时,用拭子或吸管采集,置无菌容器中尽快送检;

3. 宫颈标本:用无菌盐水湿润窥阴镜暴露宫颈,清除阴道和宫颈分必物,弃之,

轻压宫颈使分必物流出用拭子采集,或用拭子插入宫颈管1—2cm，转动并停10—30s再取出,置无菌容器中尽快送检;

4. 阴道标本：先清除阴道表面的分泌物，弃之，然后在后穹窿或阴道上端采集

粘膜分泌物。

5. 前列腺液:有医生通过前列腺按摩获取,置无菌容器中尽快送检。

6. 用于除去宫颈外粘液的拭子不宜作微生物培养，因其含有大量的阴道菌群。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期

傅石明 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 粪便标本采集 标准操作程序 编号：WSW-SOP-7 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

第 1页，共1页

【目的】

指导粪便标本的正确采集。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【步骤】

1. 粪便标本采集时应挑取有脓血、粘液部分的粪便2—3g；液状粪便取絮状物

1-2ml，盛于灭菌的广口瓶中或腊状纸盒中，并及时送检和接种。

2. 在无法获得粪便时，可用无菌生理盐水或增菌液湿润直肠，将棉拭子插入肛

门4～5cm深处(小儿2～3cm)，轻轻转动一周擦取直肠表面的粘液后取出，盛入无菌试管或保存液中送检。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期 傅石明 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 穿刺液标本留取 标准操作程序 编号：WSW-SOP-8 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

第 1页，共1页

【目的】

指导穿刺液（胸、腹水、心包液、关节液）标本的正确采集。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【步骤】

1. 各种穿刺液标本的留取应由临床医生以无菌穿刺术抽取，胸腹水抽取量一般

约为5一l0ml，心包液、关节液等一般抽取量为1～5m1，将所得穿刺液盛于含有无菌的试管中，立即送检。

2. 对易自凝的标本可用已添加抗凝剂的无菌试管，充分混匀，立即送检。

3. 也可将5-10ml的穿刺液无菌操作注射到双相血培养瓶中送检。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期 傅石明 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 脑脊液、胆汁标本采集 标准操作程序 编号：WSW-SOP-9 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

第 1页，共1页

【目的】

指导脑脊液、胆汁标本的正确采集。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【步骤】

脑脊液、胆汁标本的采集方法应由医生亲自严格无菌操作，留在无菌试管内，注意保温，以防细菌死亡并立即送细菌室培养。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期 傅石明 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 组织标本的采集 标准操作程序 编号：WSW-SOP-10 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

第 1页，共1页

【目的】

指导组织标本的正确采集。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【步骤】

1. 表浅的感染组织和各种窦道标本可用棉签擦拭、小刀刮取、穿刺抽吸或手术

切除。对窦道和痰管应刮取深部管壁组织。

2. 深部组织标本可经皮穿刺或手术切除。标本置无菌容器并加少量生理盐水以

保湿度；或置肉汤增菌液，或置血平皿送检。

3. 尸体标本应予死后20小时内采取，以防肠道菌侵入引起污染。

4. 作病原体分离的组织标本不可用福尔马林固定。疑有污染的组织块可用烧红

的烙铁烧灼其表面，或置沸水中5-10秒钟使其表面变白消除污染后，再用无菌器械切开组织，取中间部位组织送检。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期 傅石明 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 静脉道管标本采集 标准操作程序 编号：WSW-SOP-11 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

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【目的】

指导静脉道管标本的正确采集。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【步骤】

1. 从病人体内拔出静脉插管，用无菌技术剪去导管体外部分，体内段导管立即

置血平皿上作滚动涂布接种。不能作床边接种者，将导管置含少量生理盐水的无菌试管内送检。

2. 也可将剪下的导管体内段置肉汤内增菌，但不能区分导管感染菌与少量定植

菌。

3. 有些标本的微生物学检验在诊断感染或指导治疗上无多大价值，如Foley导

管的尖端、恶露、呕吐物、结肠造口术的渗出物等，一般不进行培养。

4. 口腔及牙周损伤处、褥疮及静脉曲张处、烧伤、浅层坏死及肛周脓肿等部位

标本，应先彻底清疮后在取组织送检。

5. 冲洗用的道管、静脉导管及动脉导管应在进入部位的皮肤消毒后，小心取出，

以无菌方法切区去皮肤外的短部，其余部分送检。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期

傅石明 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 眼耳及乳突分泌物标本采集标准操作程序 编号：WSW-SOP-12 日期：05年 9月 5日 版号：2006—1

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【目的】

指导眼、耳及乳突分泌物标本的正确采集。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【步骤】

1. 以无菌棉拭子采集眼分泌物、尤其是脓性分泌物及耳部脓汁置无菌试管中及

时送检;

2. 乳突炎患者标本在手术时采集。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期 傅石明 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 样本接收、核对、接种、培养标准操作程序 编号：WSW-SOP-13 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

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【目的】

标本的质量是检验结果准确性与有效性的基础，为使标本从病人到实验室这一过程受控，保证准确可靠的检验结果，特制定本程序。

【适用人员】

临床微生物实验室检验人员

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【步骤】 1.接收样本：

核对各样本号与申请单联号是否一致，如不一致马上与病房联系以便作出相应的处理，如退单或重送样本等，并做好联系情况的记录。核查各送检样本是否符合要求。

1) 痰液样本：先看外观、再直接涂片镜检， 低倍镜下见白细胞>10个/LP，上

皮细胞<25个/每个视野，为合格痰液。

2) 无菌体液样本：检查各种无菌体液样本的盛放器皿是否符合要求。

3) 容易干燥的样本：对一些容易干燥的样本如大便、咽拭子、脓液拭子、泌尿

生殖道拭子等是否已经干燥。

对不符合要求的样本必需与临床联系，以便作出相应处理，方法如联号不符的样本。做好记录。对符合的样本进行接种，并注明日期。

2.样本接种：

1) 大便致病菌、三线，分区划线接种于麦康凯平板；

2) 血液、骨髓按要求采集直接注射于法国梅里埃双相血培养瓶送检；

3) 支原体培养+药敏，按支原体操作规程接种于支原体专用培养基；

4) 衣原体检测,按衣原体操作规程操作；

5) 其它标本(痰液、咽拭子、脑脊液、各种无菌体液、脓液分泌物)分别接种血

平皿、麦康凯平板，分三区划线接种；

对脓液、脑脊液等在接种的同时应对其沉渣进行革兰染色，如有细菌立刻通知临床，并做记录。

4 样本培养：

移种过的血平板、麦康凯平板、血液增菌培养瓶及支原体培养条板均置于35.0℃的培养箱（HH.B11.420型）。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期 傅石明 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 菌株的纯化、鉴定、药敏流程标准操作程序 编号：WSW-SOP-14 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

第 1页，共1页

【目的】

明确菌株纯化、鉴定、药敏流程，指导检测人员正确进行菌株的纯化、鉴定、药敏操作。

【适用人员】

临床微生物实验室检验人员

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【步骤】

1. 查对昨天移种平板申请单，确定标本移种是否正确。

2. 观察血液增菌培养瓶，如发现有细菌生长，马上涂片革兰染色，将细菌的染

色特性及形态报告给临床，并做好记录，同时将阳性的血液增菌瓶移种到血平板与麦康凯平板上,且用无菌棉签沾取该阳性增菌液涂于MH培养基，依革兰染色，按NSSLS贴药敏纸片，培养18-24小时（临时报告）。

3. 观察平板，挑取可疑菌落涂片革兰染色，并将菌落纯化于血平板；

4. 将前一天分纯的细菌严格按照美国德灵MicroScan细菌分析系统操作手册配

制菌悬液、加样、置培养箱。

5. 对一些不适合用仪器检测药敏的细菌，改用标准的K-B法进行检测。 碰到

异常的耐药模式应要慎重，需重复试验或送上一级单位确认后方可发出报告， 如碰到耐万古霉素的葡萄球菌、粪肠球菌，耐泰能的大肠埃希菌、克雷伯菌属、肠杆菌属等。并加做特殊的药敏纸片，并改用纸片法加以比较。

6. 真菌用ATB FUNGUS2真菌药敏条进行耐药性检测，严格按操作规程操作。

7. 大便培养，对可疑菌用抗血清做凝集试验，阳性的再做生化鉴定和药敏试验，

需血清凝集试验与生化鉴定相符方可报告，否则要慎重。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期

傅石明 20xx年9月5日

编号：WSW-SOP-15

遂昌中医院 普通MicroScan板接种培养流程日期：05年 9月 5日

临床微生物实验室 标准操作程序 版号：2004—1

第 1页，共2页

【目的】

+-+-明确普通G、G MicroScan板接种培养流程，指导检测人员正确进行普通G、G

MicroScan板接种培养的操作流程。

【适用人员】

临床微生物实验室检验人员

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员

批准签字：专业主管、科主任。

【步骤】

1、标本按微生物室标准操作程序所推荐的方法进行收集、运送和初步离培养。

2、染色：挑取纯培养细菌进行革兰氏染色

1) 革兰氏阴性杆菌、弧菌：进行氧化酶实验，记下实验结果，选用阴性板 NC21

2) 革兰氏阳性球菌：进行触酶实验，区分链球菌科（-）和微球菌科（+），记

下实验结果，选用阳性板 PC12

3、接种：

①.接种的准备：

a) 用取种针去接触纯菌落3、4次，让顶端凹槽填满菌，用CAP帽子抹去

多余菌，放接种水中盖紧，充分混匀，备用。

0b) 挑选琼脂平板上，形态相同的菌落移种于M-H液体培养基中，置35C

温箱中孵育4小时，用生理盐水稀释至相当于0.5麦氏浊度标准，或用

接中环挑取菌落，悬浮于生理盐水中振荡混匀后与标准化浊管比浊，调整浊度至相当于0.5麦氏浊度标准，吸100ul菌悬液于25ml接种水中，备用；

②. Microscan板的水化与接种：

要用的干板取出室温平衡后，用无菌吸嘴吸取115ul菌悬液于相应的

Microscan板中。

4、加石蜡油：于孔下划有一横线的孔滴加2、3滴石蜡油。

阴性板NC21：7个孔（GLU URE LYS H2S ARG ORN DCB）

阳性板PC12：2个孔（URE ARG）

5、贴封口胶纸：对革兰氏阴性板，氧化酶（+）的板右上角9个孔贴封口胶（空 位为DCB孔）

CIT TAR OF/G

MAL ACE OF/B

ONPG CET

6、孵育：测试板上盖一块空板，35℃非CO2培养箱孵育16-24小时。

7、检查：从培养箱取出板

①检查C孔（控制孔）须澄清；G孔（生长孔）混浊，有菌长。 （如不满足上述条件，则不要判药敏结果）

②革兰氏阳性板：

a PGT孔（+）黄色

b以下9孔，有任意三个以上为（+）黄色

RAF LAC TRE

MNS SOR ARA

RBS INC MAN

★以上两个条件，任意一个符合即可加试剂叛读结果。若以上两个条件均不符合，则需再孵育15-24小时。药敏MIC结果需在16-24小时内判读。

③革兰氏阴性板：

a葡萄糖发酵菌： 1）GLU=深黄色 2）SUC=黄色或SOR=黄色

b葡萄糖非发酵菌：1）ARG=紫色和OF/G=黄色 3）LYS=紫色

2）ARG=紫色和CET=混浊 4）ORN=紫色

★符合以上条件之一则可加试剂叛读结果。若不符合，则需再孵育15-24小时。药敏MIC结果需在16-24小时内判读。

8、加试剂： 革兰氏阴性板：VP-40%KOH(VP1)，5%α-萘酚（NIT2）各一滴。 NIT-0.8%对氨基苯磺酸（NIT1），0.5%α-萘酚（NIT2）各一

滴。（5分钟后判读）。

TDA-10%Fec13(TDA)一滴。

IND-柯凡奇试剂（IND）3滴。 革兰氏阳性板：VP-40%KOH(VP1), 5%α-萘酚（VP2）各一滴。 NIT-0.8%对氨基苯磺酸（NIT1），0.5%α-萘酚（NIT2）各一

滴。 （5分钟后判读。）

PYR-肽酶试剂（PET）2滴。

★如果VP（-）须等到20分钟后再确定VP是否真为阴性

9、拿掉封口剂。

10、人工判读,将生化反应和药敏结果记录在相应的Microscan结果记录纸上。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期

傅石明 20xx年9月5日

遂昌中医院 临床微生物实验室

判读普通革兰阳性板 标准操作程序

编号：WSW-SOP-16 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1 第 1页，共2页

【目的】

+

指导检测人员正确进行普通革兰阳性（GMicroScan）板的结果判读，保证检验结果。

【适用人员】

临床微生物实验室检验人员

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【普通G+MicroScan板阳性对照色卡】

VP1、VP2各一滴20分钟

NIT1、NIT25分钟 二滴2分钟

【步骤】

一、35℃非2培养箱孵育16-24孔（生长

孔）混浊，有菌长,并符合以下条件之一则可加试剂判读结果： a PGT孔（+）黄色有沉淀

b以下9孔，有任意三个以上为（+）黄色 RAF LAC TRE MNS SOR ARA RBS INC MAN

二、以上两个条件均不符，则先判读所有药敏结果。记录鉴定药敏或生长试验

CV、MS、NOV、NaCL、BAC和IDX、PHO、BL实验结果，其它生化反应试验再孵育15-24小时后判读。

三、普通G+MicroScan板生化结果判断： 试验孔名称 阳性结果 阴性结果 CV MS NaCL 有生长（混浊） 无生长（清） OPT NOV BAC PGR PHO PGT 黄色（孔中有一点黄色即可）无色 （与NOV作对照) 试验孔名称 阳性结果 阴性结果

IDX 蓝色，灰色沉淀 无色或白色沉淀

VP 粉红至红色 无色至褐色或极淡粉色试验孔名称 阳性结果 阴性结果

BE 暗棕色至黑色 无色至亮棕色

PYR 红色或橙红色 黄色至橙色

ARG 微球菌属 橙色，粉红/红色 黄色至橙黄色

链球菌属 粉红/红色 黄色至橙色

URE 粉红色（24H） 黄色至橙色

RAF LAC SOR RBS INU 黄色 橙色至红色

PRV TRE ARA MNS MAV

BL 无色 兰色至黑色

NIT 粉红至红色 无色或淡粉色

HEM β-溶血 无β-溶血

LOC 仪器识别反应板类型用

四、MIC药敏结果的判读：

1. 所有的药敏，CV、MS、NOV、NaCL、OPT和BAC的结果以黑色为背景判读；

2. 以最开始出现生长抑制的最低浓度孔记录为MIC；

3. 当所有孔均不出现细菌生长，MIC记录为小于等于最低浓度；

4. 当所有孔均出现细菌生长,MIC记录为大于最高浓度；

5. 当不出现细菌生长的浓度孔出现于细菌生长的浓度孔梯度孔中，譬如，细菌

在1、2、和8ug/ml浓度孔中生长，但在4ug/ml孔中不生长，此孔则称为跳孔，这个浓度孔结果应被忽略。

五、生化和药敏结果均记录在手工记录纸上：

Microscan 阳性复合板 PC12 结果记录：

病人： 床号： 记录时间：

鉴定结果：

2 MS 鉴定值

药敏结果：

T/S

Am

Cfz

Fd

编 写 人

傅石明

Rif P Cd Ox Cf Gm TFG Aug Va Cft STS 批 准 人 Te E Cp GMS Imp Cla Nxn β-Lac 生 效 日 期 20xx年9月5日

遂昌中医院 临床微生物实验室

判读普通革兰阴性板 标准操作程序

编号：WSW-SOP-17 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1 第 1页，共2页

【目的】

-指导检测人员正确进行普通革兰阴性（GMicroScan）板的结果判读，保证检验结果。

【适用人员】

临床微生物实验室检验人员

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【普通G-MicroScan板阳性对照色卡】

葡萄糖发酵菌编码 TDA一滴3分钟 NIT1、NIT2各一滴5分钟

4 2 1

GLU SUC

RAF RHA

INO MEL

URE IND LYS ARGORN

TDA ESCVP

CIT MAL ONPG

CL>4CF>8OXI

TAR ACE CET

OF/G P>4 K>4

CL>4

ADO H2S

SOR ARA

葡萄糖非发酵菌编码

IND三滴5分钟 VP1、VP2各一滴20分钟

【步骤】

一、35℃非CO2培养箱孵育16-24小时后，C孔（控制孔）须澄清；G孔（生长

孔）混浊，有菌长,并符合以下条件之一则可加试剂叛读结果： 1、葡萄糖发酵菌： 1）GLU=深黄色 2）SUC=黄色或SOR=黄色 2、葡萄糖非发酵菌：1）ARG=紫色和OF/G=黄色 3）LYS=紫色 2）ARG=紫色和CET=混浊 4）ORN=紫色

二、以上条件均不符，则先判读所有药敏结果。记录鉴定药敏CL4、Cf8、P4、

K4、FD64和CET实验结果，其它生化反应试验再孵育15-24小时后判读。

-三、普通GMicroScan板生化结果判断： 试验孔名称 阳性结果 阴性结果 GLU 深黄色 橙红色 SUC RAF INO SOR 黄色、橙黄色 红色 RHA ADO ARA MEL URE 洋红、粉红色 H2S 黑色有沉淀 没变黑 IND 粉红至红色 澄清、橙色 LYS ORN ARG 发酵菌 紫色至灰色 黄色 （DCB为对照孔）非发酵菌 紫色 无色或灰色 试验孔名称 阳性结果 阴性结果

TDA 暗棕色 黄色至橙色 ESC 棕色至黑色 澄清 VP 红色 澄清 ONPG 浅黄色 澄清 CIT TAR MAL ACE 蓝色至蓝绿色 绿色至黄色 OF/G 若OF/B为绿色黄色 绿色至蓝色 若OF/B为蓝色或蓝绿色黄色至绿色 蓝色 NIT 红色 无色或淡粉色 P4 K4 CL4 Cf8 CET 有生长（混浊） 无生长（清） LOC 仪器识别反应板类型用

四、MIC药敏结果的判读：

6. 所有的药敏，CV、MS、NOV、NaCL、OPT和BAC的结果以黑色为背景判读； 7. 以最开始出现生长抑制的最低浓度孔记录为MIC；

8. 当所有孔均不出现细菌生长，MIC记录为小于等于最低浓度； 9. 当所有孔均出现细菌生长,MIC记录为大于最高浓度；

10. 当不出现细菌生长的浓度孔出现于细菌生长的浓度孔梯度孔中，譬如，细菌

在1、2、和8ug/ml浓度孔中生长，但在4ug/ml孔中不生长，此孔则称为跳孔，这个浓度孔结果应被忽略。

五、生化和药敏结果均记录在手工记录纸上： Microscan 阴性复合板 NC21 结果记录

病人： 床号： 记录时间： 鉴定结果：

GLU RAFINO URE LYSTDACIT CL>4 TAR OF/G CL>4 NIT 4 2

1

SUC SOR

RHAARA

ADO H2S ARGMEL IND ORN

ESCVP

MAL

CF>8 ACE

CET

P>4 K>4

Fd>64 To>4

OXI

ONPG OXI

鉴定值 Am Cfx Cft Ak

Cf Cp Cpe

Pi Crm Gm ESBL

Azt Cax To

药敏结果： A/S Cfz Caz Imp

编 写 人 傅石明

P/T Cpd T/S

批 准 人

生 效 日 期 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 普通Microscan 板报告 标准操作程序 编号：WSW-SOP-18 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

第 1页，共2页

【目的】

明确普通Microscan板报告的操作流程，指导检测人员正确进行普通Microscan 板的细菌查询、英文报告生成与传送、中文报告检索生成与打印。

【适用人员】

临床微生物实验室检验人员

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【步骤】

一、英文资料输入（测定结果）

1、打开电脑电源，自检通过后，电脑屏幕显示

F1=Standard boot of bootable partition

F2=CCI Concurrent DOS Microscan

按〖F2〗键进入MicroScan英文系统

二、细菌鉴定板判读和细菌查询

1、完成板加试剂判读，记录生化反应和药敏结果；

2、根据生化反应生成6-9位编码；

3、进入仪器第四平台：同时按〖Ctrl〗和〖4〗进入

革兰氏阴性发酵菌和孤菌（氧化酶阴性）选择〖1〗；

革兰氏阴性非发酵菌和迟缓酵菌（氧化酶阳性）选择〖2〗；

革兰氏阳性链球菌和肠球菌（触酶阴性）选择〖15〗；

革兰氏阳性葡萄球和微球菌（触酶阳性）选择〖16〗；

根据编码检索，确定细菌名和代码记录。

三、资料输入

1、DMS主菜单输入〖1〗按〖ENTER〗键，选择第一项（Datd Enrty and Edit） 进入；

第一页输入样本编号（Specimem NO.）：一般输入8为号码，如：02080101； 样本来源（Source）：如输入〖5〗为痰液，输入〖3〗为尿液， （可 按〖F3〗键查看） 按〖PageDown〗键进入第二页（按〖PageUp〗键返回第一页） 第二页输入菌株号（Iso/ResNO.）：输入〖1〗（同一标本分离的第二菌

株输入〖2〗）

测试板类型（PansType）：输入〖1〗为G+板，输入〖2〗为G-板， 菌名代码（Orgabism）：输入第四平台查询得到地菌名代码；

测试日期（Test Date）：输入〖T〗为当天日期，〖Y〗为昨天日期； 增加试验（Extra Tesst）：按要求输入TFG ESBLs BL等（+/-/*）； STS GMS（R/S） 药敏结果（MICs）：输入检测药敏结果；

完成菌株和药敏资料输入后按〖F10〗保存当前页，可继续输入同一病人 分离的另外菌株资料，或按〖F6〗保存前后两页资料，并进入下一病人资

料输入。完成所有资料输入后同时按〖Ctrl+F10〗保存退出。

四、英文报告传送

1、确定任务：传送英文报告，进入第二平台：同时按〖Ctrl〗和〖2〗； DMS主菜单输入〖3〗按〖Enter〗键，选择第三项进入；

2、选择报告格式和内容：

Selected by: 输入〖3〗按〖Enter〗键，使用测试日期； Type of Report:输入〖7〗键，选择长报告格式；

Sorted by: 输入〖1〗按〖Enter〗键，选择样品编号； Type of Result:输入〖1〗按〖Enter〗键，选择所有结果； 输入〖Y〗或〖N〗按〖Enter〗键，选择是否包括打印过的资料； 输入〖2〗按〖Enter〗键，选择长报告不包括总结页；

3、检索结果范围：

输入起止样品编号，按〖Enter〗键确定；

输入起止测试日期，直接按〖Enter〗键选择当天结果；

4、查看和打印/传送报告：

输入〖2〗或〖3〗按〖Enter〗键，查看选择结果；

输入〖1〗按〖Enter〗键，确认准备完成后再按〖Enter〗键打印可传

送；

5、退出：完成后连续按〖Esc〗+〖Enter〗三次，返回到主菜单。

6、完成当天工作后，确认第一和第二平台都处于主菜单（Main Menu）下， 输入〖10〗按〖Enter〗退出到C：\DMS\；可以关闭或重启电脑

五、中文报告检索生成和打印

1、完成步骤四报告传送后，重新启动电脑，屏幕出现提示：

F1=Standard boot of partition

F2=CCI Concurrent DOS Microscan

2、按〖F1〗键进入Windows中文系统；

3、运行微生物中文报告系统，输入病人资料后进行检索，确认结果；

4、无菌报告在中文系统手工输入生成

5、审核后打印报告。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期

傅石明 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 常见标本培养结果解释 标准操作程序 编号：WSW-SOP-19 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

第 1页，共2页

【目的】

由于微生物标本采集过程中正常菌群及环境微生物的污染（特别是医院感染时的许多分离菌均是机体正常的菌群），因而对许多感染标本的培养结果应作综合分析，而不能笼统将所有培养分离出的细菌均认为是感染的病原菌。特别是医院感染，由于抗生素的应用等因素导致菌群失调，定植治病菌污染感染部位标本甚为多见，其给医院感染的病原学诊断带来困难，为提高疾病诊断的正确性，确认感染病原菌而制定本程序。

【适用人员】

临床微生物实验室检验人员

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【血液结果解释】

1. 通常血培养分离的细菌或真菌，可认为是血液感染的病原菌。但如为表皮葡

萄球菌、类白喉棒状杆菌等皮肤常居菌，则连续两次培养为同种菌方可确定。血培养为枯草杆菌则污染可能性大。

2. 如为静脉插管病人，血中培养一次阳性，且选用相应敏感抗生素治疗有效时，

也可认为是病原菌。

【尿液结果解释】

1. 中断尿分离的革蓝阴性菌浓度＞105CFU/ml，革蓝阳性球菌＞104CFU/ml可

认为是感染的病原菌，反之污染的可能性大。真菌或肠球菌浓度＞1000-10000CFU/ml可认为是感染菌。

2. 已用抗菌药物或经导尿管采集的尿液，多次尿培养为单一的同种菌，细菌浓

度虽未达到上述界限，也可认为是感染菌。 3. 尿培养显示浓度超过上述界限，但有两种以上细菌或真菌时，应考虑污染的

可能。

4. 耻骨上穿刺尿标本分离出细菌，不管量是多少均有临床意义。

5. 无菌生长的脓性尿表明有肾结核的可能，应建议进行接和结核菌检查。

【痰液结果解释】

1. 外观干燥或仅为唾液者属不合格，应要求重留。

2. 半定量培养结果的临床意义

各区菌落数目 相当于菌落数

级别 —————————— 临床意义

第一区 第二区 第三区（CFU/ml）

极少量+ ﹤10 ≤104 多为污染菌

少量++ ﹥10 ﹤5 105 污染可能性大，建议重复培养 中等量+++﹥10 ﹥5 ﹤5 106 感染可能性大，建议重复培养 大量++++ ﹥10 ﹥5 ﹥5 ≥107 多为感染病原菌

——————————————————————————————————

3. 经筛选的痰液（白细胞＞10个/LP，磷状上皮细胞＜25个/LP〕连续两次分

离出相同的病原菌。

4. 痰液与血液或胸水中分离到相同病原体，有诊断意义。

55. 如经纤维支气管镜或人工气道采集的标本分离出浓度为10cfu/ml的致病菌

或条件致病菌即有意义。

6. 呼吸道标本中检到特殊的病原体，如结核杆菌、军团菌即有意义。

【皮肤和软组织结果解释】

感染部位引流物或吸引物培养出病原体，如为皮肤正常菌群（如表皮葡萄球菌或微球菌），则需为纯培养。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期 傅石明 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 KB法药敏试验 标准操作程序 编号：WSW-SOP-20 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

第 1页，共1页

【目的】

保证纸片扩散法（KB法）药敏结果的可靠性。

【方法】

K—B法

【材料】

（一）培养基

Mueller-Hinton琼脂平板，只适合肠杆菌科、铜绿假单胞菌、不动杆菌、葡萄球菌、肠球菌、霍乱弧菌；HTM琼脂，只适合嗜血杆菌；GC琼脂＋1％特定的生长因子，只适合淋病奈瑟菌；Mueller-Hinton琼脂＋5％羊血，只适合链球菌。

（二）药敏纸片

来源于杭州天和微生物试剂有限公司

（三）质控菌株

K-Β法质量控制用菌株常规用：金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853。

（四）菌液比浊管

接种菌液浓度为1.5x108/ml，相当于0.5的麦氏比浊管。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【方法】

1. 制备接种菌液：挑选琼脂平板上，形态相同的菌落移种于M-H液体培养基中，

0置35C温箱中孵育4小时，用生理盐水稀释至相当于0.5麦氏浊度标准，或用接中环挑取菌落，置浮于生理盐水中振荡混匀后与标准化浊管比浊，调整浊度相当于0.5麦氏浊度标准。

2. 接种平板：用无菌棉签蘸取已制备好的接种好的菌液，在管壁上旋转挤压，

去掉过多的菌液，涂布整个M-H培养基表面，并将平板旋转60℃，反复几次，最后沿平皿周边绕两圈，保证涂布均匀。

3. 贴纸片：待平板上的水分被琼脂完全吸收后（约15分钟），用无菌镊子取纸

片贴在琼脂平板表面，并用镊尖轻压一下，使其贴平。每张纸片间距不 少于24mm，纸片中心距平皿边缘不少于15mm。

4. 孵育：把贴好药敏纸片的平皿放进350C孵平板，最好单独摆放，不超过2

个叠在一起，孵育18-24小时后，读取结果。

5. 判定结果：培养后取出平板，用尺测量抑菌环的直径，抑菌环的边缘以肉眼

见不到细菌明显生长为限，然后根据抑菌环直径大小、NCCLS判断细菌的敏感性，并加以记录。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期

傅石明 高巧娟 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 ESBLs检测 标准操作程序 编号：WSW-SOP-21 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

第 1页，共1页

【目的】

明确超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检测的意义，指导检测人员正确进行ESBLs的检测。

【适用人员】

临床微生物实验室检验人员

【适用范围】

适用于大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、奇亦变形杆菌。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【步骤】

1、筛选试验：

美国德灵MicroScan革兰阴性板NC21的药敏符合以下其中一个结果， 头孢泊肟（CPD）>1ug/ml

氨曲南（AZT）≥16 ug/ml

头孢噻肟（CFT）≥8 ug/ml

头孢他啶（CAZ）>8 ug/ml

头孢三嗪（CAX）≥8 ug/ml

提示产ESBLs的可能，美国德灵MicroScan细菌分析系统会自动提示。需 做确证试验。

2、确证试验：

①MH培养基

②药敏纸片：头孢他啶30ug、头孢他啶/克拉维酸30/10ug

头孢噻肟30ug、头孢噻肟/克拉维酸30/10ug

③标准纸片扩散法（KB法），35度需氧培养16-18小时；

④结果：

上述两种抗菌素，如含有克拉维酸的复合抗菌素比单独抗菌素的抑菌环对增大相≥5mm，可确认大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、奇亦变形杆菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)。

⑤ 质控：

大肠埃希菌ATCC25922，单独和含有克拉维酸复合抗菌素抑菌环后者相 对增大≤2mm

肺炎克雷伯菌ATCC700603

头孢他啶和头孢他啶/克拉维酸，抑菌环后者相对增大≥5mm

头孢噻肟和头孢噻肟/克拉维酸，抑菌环后者相对增大≥3mm

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期

傅石明 20xx年9月5日

省遂县中医院

临床微生物实验室 β-内酰胺酶检测 标准操作程序 编号：WSW-SOP-22 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

第 1页，共1页

【目的】

明确β-内酰胺酶检测的意义，指导检测人员正确进行的β-内酰胺酶检测。

【适用人员】

临床微生物实验室检验人员

【方法】

碘结合法

【检测原理】

把青霉素和碘加入BL孔中，反应后的β-内酰胺环和淀粉分子竞争性地和碘结合，当有β-内酰胺酶存在时，碘和β-内酰胺环结合，产生无色反应。如β-内酰胺酶不存在时，碘和和淀粉结合，则出现紫色

【适用范围】

适用于葡萄球菌、肠球菌。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【步骤】

1. 美国德灵MicroScan革兰阳性板PC12经16-24小时孵育后；

2. 在BL孔中加一滴青霉素溶液（30000单位），混匀；

3. 35度培养30分钟；

4. 加1滴碘溶液，5分钟内观察结果；

5. β-内酰胺酶阳性：产生无色反应

6. β-内酰胺酶阴性：则出现紫色

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期 傅石明 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 革兰染色 标准操作程序 编号：WSW-SOP-23 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

第 1页，共1页

【目的】

确保染色结果清晰可靠。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【来源】

BaSO （台资）珠海贝索生物技术有限公司

【试剂】

1.龙胆紫液：主要成分龙胆紫、乙醇。

2.碘溶液：主要成分碘、碘化钾。

3.脱色液：主要成分丙酮、乙醇。

4.复染液：主要成分沙黄、乙醇。

【方法】

1.待检标本用无菌生理盐水涂片，经自然干燥或火焰固定。

2.加龙胆紫液染色10秒，清水冲去染液，甩干。

3.加碘溶液染色10秒，清水冲去染液，甩干。

4.以脱色液脱色10-20秒，之后水洗，甩干。

5.最后加复染液复染10秒，之后水洗。

6.待涂片自然干燥后，油镜镜检。

【结果判定】

1. 革兰阳性菌呈紫色。

2. 革兰阴性菌呈红色。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期 傅石明 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 抗酸染色 标准操作程序 编号：WSW-SOP-24 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

第 1页，共1页

【目的】

确保染色结果清晰可靠。

【方法】

碱性复红染色法

【试剂】

1、萋纳石炭酸复红溶液

碱性复红乙醇饱和溶液 10ml

5%石炭酸溶液 90ml

2、脱色剂

浓盐酸 3ml

95%乙醇 97ml

3、复染液（吕弗勒美蓝液）

美蓝乙醇饱和溶液 30ml

10%氢氧化钾 0.1ml

蒸馏水 100ml

【染色步骤】

1、涂片经自然干燥或火焰固定后，加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸汽出现，切不可沸腾。染5分钟（若染色奴卡菌需要加长时间），水洗。

2、加脱色剂，不时摇动坡片至无红色脱落为至，水洗。

3、加复染液，染0.5-1分钟。

4、干后镜检。

【结果判定】

分枝杆菌呈红色，背景为蓝色。

注：奴卡菌、放线菌标本染色时，脱色剂改用2%硫酸水溶液。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期 傅石明 20xx年9月5日

遂昌中医院 临床微生物实验室

解脲/人型支原体培养

标准操作程序

编号：WSW-SOP-25 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1 第 1页，共1页

【目的】

指导解脲/人型支原体培养的正确操作程序。 【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 【检测原理】

培养基中含有脲素与精氨酸。及酚红指示剂，解脲支原体（UU）能分解脲素产氨；人型支原体（Mh）能分解精氨酸产氨，使培养基偏碱，由黄色变为红色，提示有支原体存在。 【试剂】

① R1复溶液3.1ml/瓶；②R2脲素/精氨酸肉汤，呈干粉状；③培养板 【步骤】

1. 将采集到的拭子或精液、前列腺液等其他标本（200ul）置于R1瓶中，不能

立即实验，置室温可保存5小时，冰箱可保存48小时，但不能冰冻； 2. 拭子在R1中充分济压，混匀，弃去拭子，然后将R1液到入R2瓶中，轻轻震

荡，使R2干粉溶解；

3. 用灭菌吸嘴吸55ulR2液于培养板各孔中（22孔）； 4. 滴加2滴石蜡油于各孔中；

5. 盖上培养板的盖子，放35度培养箱中，同时将R2的剩余液也一起放培养箱

中；

6. 培养24-48小时观察结果。 【结果的观察与解释】

1. R2肉汤的观察：如无UU与Mh，应为黄色；如有UU或Mh，则培养基应变为

橘红至红色，上层液应清或轻度混，若培养基变混浊，应考虑细菌污染。 2. 培养板结果的观察：

4

2.1（UU≥10）该孔24小时读结果，其余各孔48小时读结果； 2.2

鉴定孔 O

uu Mh

计数孔

UU ≥10

4

DOT 4

4

JOS2 8

OF 1 4

E 1 4

TE 4 8

CP 1 2

AZI 2 4

CLA 1 1

PRI 2

Mh ≥10

8

阳性 阴性 意义

橘红至红色 红色 橘红至红色

黄色 黄色至橘黄

黄色

两孔均-为S；两孔均+为R；上孔+，下孔-为I -为S；+为R

3. 3如质控孔（O）为阴性，则其余各孔不需观察。

编 写 人 傅石明

批 准 人

生 效 日 期 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 AccuStep衣原体抗原检测 标准操作程序 编号：WSW-SOP-26 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

第 1页，共1页

【目的】

指导AccuStep衣原体抗原检测的正确操作，保证检测结果。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【适用范围】

用于直接检测女性宫颈拭子、男性尿道拭子、男性尿液和有症状的眼结膜中衣原体的存在。

【检测原理】

培养基中含有脲素与精氨酸。及酚红指示剂，解脲支原体（UU）能分解脲素产氨；人型支原体（Mh）能分解精氨酸产氨，使培养基偏碱，由黄色变为红色，提示有支原体存在。

【试剂】

② R1复溶液3.1ml/瓶；②R2脲素/精氨酸肉汤，呈干粉状；③培养板

【步骤】

A.处理样品：

1)宫颈、尿道和眼结膜拭子的处理：

a) 取出样品处理管，加8滴A液；

b) 将拭子放进已加A液的处理管中，充分挤压拭子，混匀；

c) 2分钟后，加入B液，充分挤压拭子，尽量使液体挤出，弃区拭子，备

用（60分钟内使用）。

2）男性尿液的处理：

取20ml尿液，3000转/分，离心30分钟；

弃去上清液，加8滴A液，充分混匀，置2分钟；

用一次性吸管将溶液吸入样品处理管，加8滴B液，混匀，备用。

B.检测步骤：

1）取出衣原体抗原检测卡，置室温平衡后使用；

2）将已处理样品加4滴于检测卡的样品孔中；

3）10-15分钟观察结果。

【结果的观察与解释】

阳性结果：对照区（C）与检测区（T）均出现红线；

阴性结果：对照区（C）有一条红线，检测区（T）无红线；

无效结果：对照区（C）不出现条红线。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期

傅石明 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 ATB FUNGUS2真菌药敏 标准操作程序 编号：WSW-SOP-27 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

第 1页，共1页

【目的】

指导ATB FUNGUS2真菌药敏的正确操作程序。保证ATB FUNGUS2真菌药敏结果。

【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【方法】

微量肉汤稀释法(法国梅里埃 ATB FUNGUS2真菌药敏)

【试剂】

③ 药敏试条②ATB F2 Medium③9g/l氯化钠

【步骤】

1. 纯培养物（真菌），用9g/L氯化钠制备2MCF菌液；

2. 吸取20ul菌液于ATB F2 Medium中，混匀；

3. ATB FUNGUS2试条每孔加135ulATB F2 Medium菌液，盖上板条盖；

4. 置35±2℃有氧培养，念珠菌培养24±2小时，隐球菌培养48±6小时；

5. 药敏结果: 5.1念珠菌：

抗 真 菌 药 结 果 S I R Flucytosine（5FC） ≤4 8-16 ≥32 氟胞嘧啶 AmphotericineＢ（AMB） ND ND ND 两性霉素B Fluconazole（FCA） ≤8 16-32 ≥64 氟康唑 Itraconazole（ITR） ≤0.125 0.25-0.5 ≥1 伊曲康唑 注：ND，NCCLS中未注明，一般认为当MIC≥2mg/L时，视为耐药。 5.2隐球菌：

结 果 抗 真 菌 药

S I R

Flucytosine（5FC） ≤4 8-16 ≥32 氟胞嘧啶 AmphotericineＢ（AMB） ND ND ND 两性霉素B Fluconazole（FCA） ≤4 8 ≥16 氟康唑 Itraconazole（ITR） ND ND ND 伊曲康唑 注：AMB，ND，NCCLS中未注明，一般认为MIC≥2mg/L时，视为耐药。ITR不详。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期

傅石明 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 培养基的制备 标准操作程序 编号：WSW-SOP-28 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

第 1页，共1页

【目的】

保证培养基的质量。

【适用范围】

使用成品培养基干粉制备各种分离培养基。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【步骤】

1. 在玻璃容器中加入所需蒸馏水的二分之一量，然后放入一定量培养基干粉，

补足水量，轻轻搅拌以促进溶解。

2. 分装：液体培养基一般在灭菌前分装，分装时应注意每管的分装量不应高于

试管的2/3。

3. 琼脂平板是在培养基高压灭菌后冷至50-600C时再倾注平板。

04. 血平板是在培养基高压灭菌后冷至50-60C时再加羊血(400ml血琼脂+25ml

羊血),轻轻摇匀然后倾注平板

5. 质量检查

1) 无菌试验：将制好的培养基在350C孵育过夜，判定是否灭菌合格。

2) 效果检验：按不同的培养要求，接种相应的菌种，观察细菌的发育、菌

落形态、色素、溶血等特征，判断培养基是否符合要求。

6. 保存：液体培养基及琼脂平板须在40C保存，一般不超过7天，如用塑料袋

密封至多保存2周。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期

傅石明 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 触酶试验 标准操作程序 编号：WSW-SOP-29 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

第 1页，共1页

【目的】

指导检测人员正确操作触酶试验。

【适用人员】

临床微生物实验室检验人员

【适用范围】

主要用于链球菌与葡萄球菌的鉴别，链球菌此试验阴性。

【原理】

触酶又称过氧化氢酶，具有过氧过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢为水和原子态氧，继而形成氧分子，出现气泡。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【步骤】

取洁净玻片一长，用接种环挑取细菌，加3%过氧化氢溶液1滴，立即观察结果。

【结果】

1. 立即出现大量气泡为阳性

2. 无气泡为阴性

【注意事项】

1. 3%过氧化氢溶液要新鲜；

2. 不宜用血琼脂平板上的菌落，因红细胞内含有触酶；

3. 取对数生长期的细菌。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期

傅石明 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 氧化酶试验 标准操作程序 编号：WSW-SOP-30 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

第 1页，共1页

【目的】

指导检测人员正确操作氧化酶试验。

【适用人员】

临床微生物实验室检验人员

【适用范围】

用于奶瑟菌的鉴定，该属细菌均阳性。此外也用于假单胞菌与肠杆菌科细菌的区别，前者阳性，后者阴性。莫拉菌、产碱杆菌属也阳性。

【原理】

氧化酶又称细胞色素氧化酶，是细胞色素氧化酶系统中的最终呼吸酶。此酶并不直接与氧化酶试剂起反应，而是先使细胞色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【步骤】

取白色洁净滤纸沾取菌落。加氧化酶试剂（10g/L盐酸二甲基对苯二胺溶液或10g/L盐酸四甲基对苯二胺溶液）一滴，1分钟内观察结果。

【结果】

1. 阳性者呈立即现粉红色，并逐渐加深；

2. 无色为阴性

【注意事项】

4. 实验时应避免接触含铁物质，以免出现假阳性；

5. 10g/L盐酸二甲基对苯二胺溶液或10g/L盐酸四甲基对苯二胺溶液为无色溶

液，在空气中易被氧化而失效，故应经常更换新试剂，并盛于棕色瓶中，若试剂已变成蓝色，应弃去不用。

6. 不宜用血琼脂平板上的菌落，因红细胞内含有触酶；

7. 取对数生长期的细菌。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期 傅石明 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 芽管试验 标准操作程序 编号：WSW-SOP-31 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

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【目的】

指导检测人员正确操作芽管试验。

【适用人员】

临床微生物实验室检验人员

【适用范围】

主要用于鉴定白色念珠菌，其他念珠菌此试验为阴性

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【步骤】

在无菌试管中加人血清0.2ml接种少量待检菌，混匀后置35℃培养，1小时检查一次，共检查3次。

【结果】

形成芽管者为阳性。

【注意事项】

1. 菌量不宜过多；

2. 培养时间最多不能超过4小时。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期 傅石明 20xx年9月5日

遂昌中医院

临床微生物实验室 临床微生物实验室安全 标准操作程序 编号：WSW-SOP-32 日期：05年 9月 5日 版号：2004—1

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【目的】

保障个人安全，防止交叉感染。

【适用范围】

临床微生物实验室检验人员

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【主要内容】

1. 加强学习，严格执行安全制度，定期检查。

2. 进入实验室要穿工作服，工作服要放在指定的地点，并经常洗涤；生活用品

不能带入实验室。

3. 实验室内不能高声谈笑，不准吸烟、饮食，不要用手指触摸头、面等部位以

免造成污染。如传染物污染手部，要立即用1%（g/dl）三三三高效消毒剂浸泡，再用肥皂水和流水冲洗干净。

4. 如传染物污染桌面或地面应立即用1%（g/dl）三三三高效消毒剂溶液覆盖其

上，经30分钟方可抹去，如工作服被病原微生物污染，应立即脱下，进行高压灭菌处理。

5. 实验室每天用紫外线进行消毒空气，作好记录，并定期检测；接种环（针）

使用后应立即在火焰灯上烧灼灭菌；沾有活菌的玻片、试管等玻璃制品应立即放在钢精锅内统一高压灭菌；检测剩余的标本及接触过微生物的平板、鉴定板（条）等塑料制品均用塑料袋装好，置红色桶内，统一灭菌处理。

6. 各种电器设备，要有专人保管，并做好有关的记录；易燃物品乙醇应妥善保

管，远离火源，若出现着火情况，应立即用湿布将其覆盖。

7. 易燃、易爆、剧毒化学物品要有专人保管，并有使用记录；分离出甲类或乙

类传染病菌株，应及时上报院感科，未经上级同意不得带出实验室，并由专人处理。

8. 工作结束后，用1%（g/dl）三三三高效消毒剂溶液消毒工作台面；工作人员

双手应用肥皂、流水清洗三遍以上，关好窗户、检查好电源后，方可离开实验室。

9. 临床微生物实验室检验人员应定期健康体检及必要的预防接种，以增强自身

抵抗力。

编 写 人 批 准 人 生 效 日 期

傅石明 20xx年9月5日