紫外光度法测定维生素C实验报告

紫外分光光度法测定维生素C片维生素C的含量

一、实验目的

1.学习利用紫外吸收光谱测定物质含量的原理和方法；

2.熟练紫外-可见分光光度计的操作。

二、实验原理

维生素C（VC）是一种酸性己糖衍生物，具有烯醇式己糖内酯立体结构，分D和L两种立体构型，但只有L型有生理功效。维生素C具有较强的还原性,在一定条件下氧化型和还原型可以互变 ,两者均具有生物活性(结构式见图1),其C2和C3位上两个相邻的烯醇式羟基极易解离而释放出H⁺,故维生素C虽然不含自由羧基，仍具有有机酸的性质。维生素C呈无色无臭的片状结晶体,易溶于水,不溶于脂。在酸性环境中稳定,遇空气中氧、热、光、碱性物质,特别是有氧化酶及痕量铜、铁等金属离子存在时可促进其破坏速度。

具有π电子的共轭双键化合物、芳香烃化合物等，在紫外光谱区都有强烈吸收，其摩尔吸收系数k可达10⁴-10⁶数量级。利用紫外吸收光谱进行定量分析，要借助朗伯-比尔定律。根据维生素C在稀硫酸溶液（维生素C水溶液在pH 5～ 6之间稳定）中，在245 nm 波长处有最大吸收的特性，建立了紫外分光光度法测定维生素C片含量的方法。

三、实验仪器及试剂

实验仪器：容量瓶（100 ml、1000 ml）、移液管（0.5 ml、5 ml）、烧杯、紫外分光光度计

实验用品：98%浓硫酸（分析纯，1.84 g/ml）、维生素C对照品系以原料药经105 ℃干燥至恒重（含量为99.7 %）、维生素C片（2片）、去离子水

四、实验步骤

1. 0.005 mol·L^-1硫酸溶液的配制

用0.5 ml移液管移取0.27 ml 98%浓硫酸放入事先已盛有蒸馏水的烧杯中，搅拌，冷却至室温后移入1000 ml容量瓶，稀释至刻度，待用。

2. 0.5 g·L^-1 对照品溶液的配制

精密称取105℃ 干燥至恒重的维生素C对照品50 mg置100 ml量瓶中，加0.005 mol·L^-1硫酸溶液制成0.5 g·L^-1 对照品溶液。

3. 维生素C对照品标准溶液的配制

用5 ml移液管精密量取0.5 g·L^-1对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 ml，分别置100 ml量瓶中，用0.005 mol·L^-1硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，待用。

4. 测定波长及标准曲线

以0.005 mol·L^-1 硫酸溶液为空白，测定维生素C在稀硫酸溶液中最大吸收波长，并在此波长处测定维生素C对照品标准溶液的吸光度，以浓度对吸光度作线性回归。

5. 样品含量测定

取维生素C片2片，精密称定，研细，精密称取适量（0.06g，约相当于维生素C 50 mg）置100 ml容量瓶中，加0.005 mol·L^-1硫酸溶液适量，超声5 min使溶解，再加0.005 mol·L^-1硫酸溶液至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2.0 ml置100 ml量瓶中，加0.005 mol·L^-1硫酸溶液至刻度，摇匀，在最大吸收波长处测定吸光度。

6.空白试验

模拟维生素C片处方比例，精密称取辅料适量置100 ml量瓶中，与步骤5样品含量测定同法操作，在最大吸收波长处测定吸收度为0。

7.回收率试验

先测得2 ml样品溶液的吸光度A₁（C₁），再取0.0125 g/L 的VC 标液200 μl，于2 ml 已测得吸光度A₁的样品溶液中，再测得吸光度A₂（C₂）。

五、实验数据记录及处理

1.维生素的吸收波长

在紫外可见分光光度计上扫描测定VC标准样品的吸收光谱，结果显示VC在244nm波长处的吸光度值最大。