实验报告

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细胞计数实验报告

一、目的

培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数

二、原理

细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。显微镜直接计数法是将一定稀释的菌体或孢子悬液注入血球计数板的计数室中，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。因为计数板是一块特别的载玻片。其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格，一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小方格，无论哪种每个大方格中的小方格都是400个。每一个大方格边长为0．1mm，所以计数室的容积为0．1mm3。计数时，通常只用4个四周大方格内的细胞数即可。然后求出每个大方格的平均值，即得出一个大方格中的平均细胞数，再换算成lml菌液中的总细胞数。若设大方格中平均细胞数为N，菌液稀释倍数为M，则计算方法为：

lml菌液中的总菌数=平均每个中格中菌的个数=10000xMxN=10000MN(个)

三、实验材料

普通显微镜、血球计数板、试管、吸管，微量移液管、细胞悬浮液

四、实验步骤

1、将血球计数板及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。

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一. 实验原理

用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池后，在显微镜下计数一定体积内的红细胞数量，经换算求出每升血液中的红细胞数量。用白细胞稀释液将血液稀释一定的倍数，同时破坏溶解红细胞。将稀释的血液注入血红细胞计数板，在显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算即可求出每升血液中的白细胞数量。

二. 实验内容与步骤

   1、红细胞计数

  （1）器材：显微镜、微量吸管、改良Neubauer计数板

  （2）试剂：RBC稀释液 ①Hayem 稀释液：NaCl, Na2SO4，HgCl2 ②枸橼酸钠甲醛盐水溶液:枸橼酸钠，甲醛，NaCl ③生理盐水或含1%甲醛的生理盐水：仅在急诊或无上述两种稀释液时临时使用

  （3）标本：外周血或抗凝血（EDTA抗凝)

  （4）操作步骤：①小试管加RBC稀释液2.0 ml。

                 ②采血，取血10 μl。

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《实验诊断学》实验报告

实验一 红细胞计数、白细胞计数 

学  院：                      

专  业 年级：                 

学  号：                        

姓  名：                     

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《实验诊断学》实验报告

实验一 红细胞、白细胞计数

一. 实验原理

一定量的血液经一定量等渗性稀释液稀释后，充入血细胞计数池中，于显微镜下计数一定体积内的红细胞数。用稀醋酸液将血液稀释并破坏红细胞，混匀后充入计数池中，于显微镜下计数一定体积内的白细胞数。根据稀释倍数和计数的容积，换算求得每升血液中的红细胞数量以及白细胞数量。

二. 实验内容与步骤

实验材料：

显微镜、微量吸管、毛细吸管、改良Neubauer计数板、盖玻片、小试管、RBC稀释液、WBC稀释液、正常人的全血、纱布

实验步骤：

1、红细胞计数准备：

① 加稀释液，用微量吸管吸取RBC稀释液蒸馏水2.0 ml加到小试管内。 ② 取血，毛细吸管取血10 μl。

③ 用纱布擦去管外的血，轻吹入试管底部，再清洗吸管2-3次，立即混匀。

2、白细胞计数准备：

WBC稀释液:

冰醋酸3.0 mL（破坏红细胞）

蒸馏水97.0 mL

亚甲蓝（染色）

① 小试管加WBC稀释液0.38 mL。

② 采血，微量吸管取血20 μL。

③ 擦去管外的血，轻吹入试管底部，再清洗吸管2-3次，立即混匀。

3、充池、观察：

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小鼠脾脏细胞原代培养及观察计数

【实验目的】

1.学习掌握细胞培养的基本原理以及具体方法，并对小鼠脾细胞进行原代培养；

2.掌握无菌操作的具体过程及无菌操作台的使用；

3.学习掌握染色法鉴别细胞的生死状态的原理及方法；

4.学习使用血球计数板对细胞总数及活细胞数进行计数；

【实验原理】

1.      细胞培养

细胞培养指的是在无菌条件下，把动、植物细胞从组织中取出，在体外模拟体内的生理环境，使离体的细胞在体外生长和繁殖，并且维持其结构和功能的一种培养技术。动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。从供体获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法称为细胞的原代培养。当培养的动物细胞生长增殖达到一定密度，形成致密的单层细胞时，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，从一个容器中以1：2或其他比例转移到另一个容器中扩大培养的方法，称为细胞的传代培养。传代培养的累计次数就是细胞的培养代数。

高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的。但如果把活细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则要方便和简单得多。被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类揭开生、老、病、死的规律，探索优生、抗衰老和防治各种疾病的途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，使其向有利于人类健康长寿的方向发展。因此动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。

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实验诊断学实验报告

红细胞计数试验

实验目的： 通过红细胞计数实验

1、掌握红细胞计数方原理、方法及注意事项。

2、掌握血细胞计数板的结构

试验器材： 血细胞计数板、显微镜、盖玻片、试管、血红蛋白吸管、

生理盐水

实验原理： 一定量的血液经一定量等渗性稀释液稀释后，充入血细胞计数池中显微镜下

计数一定容积内的细胞，再换算成每升标本的细胞数报告。

操作步骤： 1、取红细胞稀释液2.0ml毫升，放入一小试管内。

2、用血红蛋白吸管吸血至l0ul处。

3、擦去管尖外部余血将血液迅速轻轻吹入盛有红细胞稀释液的试管内， 上清液嗽洗吸管2-3次，立即摇匀。

4、将计数池与盖玻片用软布料擦净，将盖玻片覆盖于计数池上。

5、用吸管吸取混匀的红细胞悬液，充入计数池中。

6、待2—3分钟，让红细胞完全下沉后，将计数板平放在显微镜台上，用低 倍镜观察，如红细胞分布均匀即可换高倍镜进行计数。

红细胞计数的区域： 中心大方格中的5个中方格(正中一个和四角各一个)。

计数原则： 数上不数下，数左不数右的计数原则即凡压在中方格边线(双线)上的红细胞，只计上侧与左侧线上的细胞，而压在下侧与右侧线上者不计入。

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红细胞计数原理

1. 实验原理：本实验采用流体力学聚集技术原理分析红细胞。使用电阻抗法进行红细胞计数，红细胞通过小孔时，形成的相应的脉冲的多少即红细胞的数目。

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